卵巢癌原位移植模型建立的研究進展

張 雷，易村犍

(長江大學臨床醫學院 荊州市第一人民醫院婦產科，湖北 荊州 434000)

卵巢癌原位移植模型建立的研究進展

張 雷，易村犍

(長江大學臨床醫學院 荊州市第一人民醫院婦產科，湖北 荊州 434000)

卵巢癌是目前臨床的難題之一，隨著實驗動物學的發展，原位移植模型因其能客觀真實反映人類卵巢癌的發生發展過程而成為研究熱點，同時順鉑耐藥也是目前化療的一個難題。綜述了卵巢癌模型的分類、原位移植瘤模型的建立及影響成功率的因素等。在實驗方法上，通過將人卵巢癌細胞株和順鉑耐藥細胞株先進行體外培養，然后再分別接種于裸鼠體內。這種方法建立裸鼠卵巢癌原位移植模型具有成瘤率高的特點,并能保持順鉑耐藥特征。

卵巢癌；原位移植模型；實驗動物學

卵巢癌是婦科常見的腫瘤之一，它的發病率居第三，次于子宮頸癌和子宮體癌。卵巢癌早期即可發生盆腔、腹腔內種植轉移或淋巴結轉移，由于臨床癥狀不明顯，發現時多為晚期，而且卵巢癌耐藥性較高，故卵巢癌死亡率居婦科腫瘤首位，嚴重威脅婦女的生命健康[1]。卵巢癌的發病機制及治療方法一直以來是臨床和基礎研究的重點內容。通過建立動物模型來模擬人體內環境，進而研究其機制并探索治療方法，為臨床應用提供保障。

1 卵巢癌模型分類

卵巢癌模型的分類有多種方法，按動物種類：大鼠模型、小鼠模型、其它動物模型；按腫瘤來源：誘發型、自發型、移植型、轉基因型；按接種部位：腹腔、皮下和常位 (卵巢內)；按移植供體與受體關系：異種移植和同種移植；按轉移率：高轉移性和低轉移性[2]。

2 主要的卵巢癌模型

小鼠因其飼養方便，繁殖率高及與人類基因相似性高成為應用最廣的實驗動物，尤其在人類腫瘤成功移植于裸鼠后，惡性腫瘤學的研究便進入一個全新的階段。

2.1化學誘導型模型

用化學致癌劑(如亞硝胺類、多環芳香烴類、烷化劑等)通過口服、涂抹、埋藏、注入等方式誘導成瘤。Silva等[3]證實雌激素可誘導卵巢腫瘤，尤其己烯雌酚和雌二醇。己烯雌酚可引起卵巢表面乳頭狀瘤，而雌二醇引起的是卵巢漿液性囊腺瘤。

2.2皮下移植瘤模型

在小鼠肩胛區皮下注射癌細胞成瘤。許沈華等[4]用人卵巢癌細胞系移植于裸鼠皮下，建立了人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。皮下移植模型雖然成瘤率高，操作簡單，但很少向遠處發生轉移。

2.3腹水移植瘤模型

在小鼠腹腔內注射癌細胞成瘤。腹腔接種較易顯示癌細胞的侵襲轉移能力。Kyriazis等將人細胞系移植到裸鼠腹腔或皮下均成瘤，皮下移植瘤可見到包膜和淋巴管侵襲，但只有極少數動物發生了局部淋巴結轉移。腹水移植瘤顯示不同臟器浸潤并且有60%的動物發生肺廣泛轉移和縱隔淋巴結轉移[5]。

2.4原位移植瘤模型

皮下移植瘤模型和腹水瘤模型雖然較為常用，但由于與人卵巢癌生物學特征存在差距，在實際的應用中受到一定的限制。原位移植模型近年來備受關注，原位移植不僅成功率高，而且移植瘤容易發生類似于病人的轉移，轉移率較高。取穩定傳代若干代后的小鼠皮下移植瘤的瘤塊，切下一定量的瘤組織縫入小鼠的卵巢內，即可建立原位移植瘤模型[6-10]。

3 順鉑耐藥卵巢癌原位移植瘤模型的建立

在腫瘤的化療中，順鉑的耐藥性是個棘手的問題。建立耐藥的腫瘤動物模型有助于研究其耐藥機理及逆轉方法。首先將體外培養活性較好的人卵巢癌細胞株配制成一定濃度的細胞懸液，然后采用順鉑低劑量誘導方式篩選出耐藥細胞株系，抽取一定劑量接種于實驗動物的皮下，待其形成所需的卵巢癌瘤塊后，再切下一定量的瘤組織植入實驗動物的卵巢中。這種方法能有效的刺激卵巢癌細胞，組織塊能夠更好的適應卵巢局部的微環境[11-12]。

4 影響模型成功建立的因素

盡管從皮下移植瘤模型、腹水瘤模型到原位移植瘤模型在不斷完善，但由文獻報道可知，卵巢癌模型建立的成功率不等[13]，這可能與下列因素有關。

4.1動物的選擇

常用的建立卵巢癌模型的動物為大鼠和小鼠，其中小鼠最為常用。免疫治療現已成為卵巢癌重要的治療方法之一，故免疫治療動物實驗在一定程度上受到限制。有學者提出，在卵巢局部環境中生長的腫瘤細胞由于經歷了惡性細胞選擇，惡性程度更高的腫瘤細胞會繼續生長，所以以往一般常用免疫正常小鼠來建立腫瘤移植模型，這也對之后卵巢癌的研究有極其重要的意義[11]。

4.2動物生存環境

SPF(無特殊病原菌環境)和GF(無菌環境)兩種飼養環境下的裸鼠更有利于腫瘤的生長和轉移，這種環境污染少，減少了抗原刺激，更有利于提高移植瘤的成活率和轉移率。

4.3動物性別和年齡

移植在新生或幼年的裸鼠體內的腫瘤相比于成年鼠更容易生長和轉移。有學者報道，3周齡的幼年裸鼠體內表現有明顯侵襲及高度自發性或轉移的腫瘤，6～8周齡的成年裸鼠體內呈現局限性生長或者低轉移。建議用4～5周齡幼鼠。卵巢癌為激素依賴性腫瘤模型，造模時應注意裸鼠的雌雄，裸鼠的激素水平很大程度上影響裸鼠移植瘤的成功率。

4.4裸鼠免疫功能

腫瘤細胞能否發生侵襲和轉移，主要是由本身的生物學特性決定。裸鼠并非沒有免疫能力，其體內NK細胞、B細胞活性較高，在抵抗移植腫瘤中它們可能起作用。

4.5移植方法

目前推薦使用高轉移性、高侵襲性的卵巢癌細胞株建立模型。具體方法有兩種：一是將一定濃度的卵巢癌細胞懸液直接接種于動物的卵巢中；二是首先將一定濃度的卵巢癌細胞懸液接種于動物的皮下，皮下移植成瘤后取一定量的卵巢癌組織塊植入小鼠的卵巢中。從理論上說，后者能更有效的刺激卵巢癌細胞，組織塊能夠更好地適應卵巢局部的環境，而且前者要求的技術水平高，實驗條件比較苛刻，很容易人為造成腫瘤細胞腹腔擴散[11-12]。

4.6腫瘤來源

移植瘤組織可來源于人腫瘤手術標本，也可來源于腫瘤細胞系。目前比較傾向于前者。一方面由于單個細胞懸液較分散，受到機體免疫狀態影響，容易被機體免疫系統清除，另一方面移植所用細胞經過了多次酶處理，腫瘤原有的細胞結構遭到破壞，可能會引起腫瘤自然屬性和生物學特性的改變，從而影響腫瘤細胞移植及轉移。研究發現用細胞懸液進行的原位移植在轉移能力方面不如完整組織塊的移植。

4.7組織特異性

因為腫瘤組織異質性的存在，移植部位取材和數量有限，植入到裸鼠體內的瘤組織形成的結構，僅僅反映取材部位瘤組織的形態特點，并且植入的瘤組織需要適應裸鼠的體內環境，生長力較強的細胞株會優勢生長，生長力較弱的細胞群在傳代過程中可能會丟失，導致移植瘤和原人瘤組織存在著一定差異性，從而就有移植瘤成功率和轉移率的差別[14-15]。

4.8其他因素

此外還有一些其他因素也影響著造模的成功率。如人腫瘤細胞的生物學特性、狀態，數量等；裸鼠品系；病人的腫瘤和裸鼠體內腫瘤對細胞毒性的反應性缺乏等等都會造成成瘤率的不等性[16-19]。隨著動物實驗技術的發展和各種新型實驗動物的開發，以裸鼠為載體的人卵巢癌動物模型，是研究卵巢癌病因學和治療學的重要工具，利用動物模型對卵巢癌進行各種基礎和臨床研究，探索其發生發展規律，開發新的治療方法和藥物，將對卵巢惡性腫瘤防治水平的提高起到重要的推動作用，同時為腫瘤轉移基礎理論的探索和逆轉方法的研究提供良好的基礎。

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[編輯] 一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.06.032

R737.31

A

1673-1409(2012)06-R070-03

2012-04-02

張雷(1983-)，女，湖北松滋人，醫師，主要從事婦科腫瘤臨床與研究工作；通訊作者：易村犍，E-mail：cunjiany@yahoo.com.cn