烏司他丁對急性肺損傷患者T淋巴細胞免疫功能的影響

苑建房

烏司他丁(ulinastatin，UTI)是人體內源性抑炎物質，具有調節炎性因子釋放、穩定溶酶體膜、抑制溶酶體炎性介質釋放及過量超氧化物歧化酶(SOD)產生、清除氧自由基(OR)、改善免疫功能等作用［1］。急性肺損傷(ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是臨床上的危重癥，發病機制較復雜［2］。國內外學者普遍認為，在ALI/ARDS的發生發展中，免疫細胞功能紊亂和免疫炎性因子失衡在致病過程中作用顯著［3－5］。目前，有關UTI對ALI免疫功能的影響報道較少。本研究通過觀察UTI對ALI患者外周血T淋巴細胞亞群的影響，探討UTI對ALI肺保護作用的可能機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇深澤縣醫院2009年6月至2010年6月收治的ALI患者60例，隨機分為常規組和UTI組，每組30例。常規組男18例，女12例;年齡43～76歲，平均年齡(56±9)歲;烏司他丁組男17例，女13例;年齡42～74歲，平均年齡(55±7)歲。選擇同期30例健康體檢者作為對照組，男16例，女14例，年齡40～76歲，平均(54±8)歲。3組在年齡、性別比等方面差異無統計學意義。

1.2 入選與排除標準:(1)入選標準ALI/ARDS的診斷仍沿用1994年歐美聯席會議提出的診斷標準:①急性起病;②氧合指數氧分壓/吸入氣體含氧量(PaO2/FiO2)≤200 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)［不管呼氣末正壓(PEEP)水平］;③正位X線胸片顯示雙肺均有斑片狀陰影;④肺動脈嵌頓壓≤18 mm Hg，或無左心房壓力增高的臨床證據。如PaO2/FiO2≤300 mm Hg且滿足上述其他標準，則診斷為ALI。(2)排入排除標準:①年齡＜18歲;②有腫瘤及器官移植者;③使用對免疫功能有影響藥物者;④慢性器官衰竭者;⑤治療不足24 h死亡者或者中途退出者。

1.3 方法

1.3.1 治療方案:常規組給予常規的機械通氣、抗感染及支持治療(經典的 SSC治療)，UTI組在常規組基礎上給予 UTI 10萬U，靜脈注射，每天8小時1次，連用5 d。

1.3.2 病例采集及臨床指標的監測:所有患者均采集包括年齡、性別、治療前后ApacheⅡ評分、PO2/FIO2等。

1.3.3 血清標本采集與檢測:所有研究對象均于治療前、治療后5 d空腹取外周靜脈血3 ml，于EDTA-K3抗凝管中，充分搖勻，待檢。用流式細胞術檢測T淋巴細胞亞群百分比，操作步驟嚴格按說明書進行。

1.3.4 儀器及試劑:Epics-XLⅡ型流式細胞儀(美國Beckman Coulter公司)，離心機B600A(保定白洋淀離心機廠)，全自動生化分析儀(美國產Beckman DXC800)，血氣分析儀(丹麥雷度ABL77)，烏司他丁(10萬U/支，廣東天普生化醫藥)。

1.4 統計學分析應用SPSS 11.5統計軟件，計量資料以±s表示，組間比較采用單因素方差分析及t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 常規組和UTI組ApacheⅡ評分、氧合指數的比較 常規組和UTI組治療前ApacheⅡ評分、氧合指數差異無統計學意義(P＞0.05);烏司他丁組治療后ApacheⅡ評分、氧合指數均較常規組明顯改善(P＜0.05)。見表1、2。

表1 3組治療前一般資料比較n=30，±s

表1 3組治療前一般資料比較n=30，±s

注:與對照組比較，*P ＜0.01

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表2 2組治療后APACHEⅡ和PO2/FIO2比較n=30，±s

表2 2組治療后APACHEⅡ和PO2/FIO2比較n=30，±s

注:與常規組比較，*P ＜0.05

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表3 3組治療前后變化比較n=30，±s

表3 3組治療前后變化比較n=30，±s

注:與對照組比較，*P ＜0.01;與治療前比較，#P ＜0.01;與常規組比較，△P ＜0.01

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3 討論

多種因素(如嚴重感染、創傷、休克、大手術、大量輸庫血、溺水誤吸等)可導致ALI，其中最重要的因素就是感染［6］。無論開始的刺激因素是細菌性或是非細菌性的，其引起的幾乎都是一種不易調控的全身性免疫紊亂，免疫細胞過度活化和免疫炎性因子大量釋放，導致病理損傷。機體在嚴重的細菌感染、創傷、燒傷或應激狀態下，由于大量的內毒素/LPS入血，LPS與巨噬細胞表面的CD14和Toll4受體結合，巨噬細胞被過度活化，釋放大量的炎性細胞因子，引起系統性炎性反應綜合征(SIRS)或膿毒癥，可最終導致機體的病理損害甚至死亡［7］。

T細胞對機體細胞免疫和體液免疫類型、強度都有重要調節作用，T淋巴細胞亞群的測定有助于了解機體免疫狀況及一些疾病的監測。反應總T細胞分布于T細胞的輔助細胞誘導亞群和抑制細胞誘導亞群(TH/Ti)表面，其主要生理功能是誘導B淋巴細胞增生和分化產生抗體，誘導和輔助細胞毒T細胞前身成為細胞毒T細胞，輔助性T淋巴細胞主要通過分泌細胞因子調節殺傷淋巴細胞、巨噬細胞、自然殺傷細胞等活性分布在抑制性和殺傷性T淋巴細胞表面，CD+8通過自身和抑制因子在免疫反應中起負向調節作用，是機體免疫和調節的重要因素。T細胞調控網絡失去平衡，可導致機體發病，如輔助性T細胞功能低下，機體易發生感染，抑制性T細胞功能低下可能發生過強免疫反應［8］。T淋巴細胞亞群的相對比例可能與機體的免疫功能狀態及多種病情進展密切相關。目前關于ALI時T淋巴細胞變化情況的報道不多。本研究結果顯示，急性肺損傷患者有明顯下降比值降低，表明急性肺損傷患者T淋巴細胞亞群比例發生了的改變，出現了免疫功能的抑制。

UTI是由肝臟分泌的、從人尿中分離純化出來的具有廣譜蛋白酶抑制作用的酸性糖蛋白，具有調節炎癥因子釋放、穩定溶酶體膜、抑制溶酶體炎性介質釋放以及過量超氧化物歧化酶(SOD)產生、清除氧自由基(OR)、改善免疫功能等作用［1］。國內外大量實驗顯示［9－12］，UTI對各種因素所致的急性肺損傷具有保護作用。但其機制目前尚不很清楚，本研究通過觀察UTI對急性肺損傷患者T淋巴細胞亞群及IL-2水平的影響，探討烏司他丁肺保護作用的可能機制，研究發現，急性肺損傷患者外周血比值明顯降低淋巴細胞升高;UTI組治療后外周血比值均較常規組明顯升高淋巴細胞較常規組明顯下降，說明UTI可以改善急性肺損傷患者T淋巴細胞亞群的分布，調控機體的免疫功能，改善急性肺損傷患者的預后。

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3 馮英凱，徐劍鋮，錢桂生，等.炎癥介質與內毒素肺損傷.國外醫學呼吸系統分冊，2004，24:329-335.

4 陳靜，趙金垣.細胞因子在急性呼吸窘迫綜合征發病機制中的作用.工業衛生與職業病，2005，31:55-58.

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6 程曉明，朱波，張彥琦，等.急性肺損傷和急性呼吸窘迫綜合征604例臨床分析.中國現代醫學雜志，2004，14:132-137.

7 徐淑云，卞如濂，陳修主編.藥理學實驗方法學.第3版.北京:人民衛生出版社，2002.34，61.

8 李百花，張秋香，董殿軍，等.番茄紅素對急性肺損傷大鼠免疫細胞和炎性細胞因子的影響.北京大學學報(醫學版)，2007，29:77-82.

9 管向東，黃順偉.烏司他丁在急性肺損傷中應用的研究進展.中華醫學雜志，2006，86:2224-2226.

10 譚正懷，余凌虹，魏懷玲.烏司他丁對脂多糖致小鼠急性肺損傷的保護作用以及與誘導型一氧化氮合酶和c-Jun表達的關系.藥學學報，2006，41:636-640.

11 ITO K，MIZUTANIA，KIRA S，eta.l Effect of Ulinastatin，a human urinary trypsin inhibitor，on the oleic acid-induced acute lung injury in rats via the inhibition of activated leukocytes.Injury，2005，36:387-394

12 Inoue k，Takano H，Toshikazu Y.Protective role of urinary-trypsin inhibitor in acute lung injury induced by lipopolysaccharide.Exp Biol Med，2005，230:281-287.