復(fù)方醋酸甲地孕酮片的溶出度研究

聞宏亮，簡(jiǎn)龍海，宋冬梅，楊永健（上海市食品藥品檢驗(yàn)所，上海 201203）

復(fù)方醋酸甲地孕酮片（CMAT）為復(fù)方口服避孕藥，含醋酸甲地孕酮和炔雌醇2種組分。該2種組分均為難溶性藥物，其溶出速度直接影響到CMAT的吸收，因而對(duì)CMAT的溶出度控制尤為重要。但CMAT現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]檢驗(yàn)項(xiàng)目中無(wú)溶出度檢查項(xiàng)。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于醋酸甲地孕酮和炔雌醇的單方制劑溶出度測(cè)定方法已有文獻(xiàn)報(bào)道[2，3]，但關(guān)于CMAT的溶出度測(cè)定方法尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。故筆者對(duì)CMAT的溶出度測(cè)定方法進(jìn)行研究，建立了高效液相色譜（HPLC）法同時(shí)測(cè)定醋酸甲地孕酮和炔雌醇含量、槳法測(cè)定二者溶出度的方法，為CMAT的標(biāo)準(zhǔn)提高提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

RC806溶出儀（天大天發(fā)科技公司）；1100 HPLC儀，包括自動(dòng)進(jìn)樣器、二元泵、柱溫箱、紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、Chemstation色譜工作站（美國(guó)Agilent公司）。

1.2 試藥

CMAT（批號(hào):100303、100701，規(guī)格:每片含醋酸甲地孕酮1 mg、炔雌醇0.035 mg）、輔料淀粉、預(yù)膠化淀粉、糖粉、糊精、硬脂酸鎂、黃色包衣預(yù)混劑均由某公司提供；醋酸甲地孕酮標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào):100171-200503，純度:100.0%）、炔雌醇標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào):100052-200308，純度:100.0%）均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；甲醇、乙腈均為色譜純，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:XtimateTMC18（15 cm×0.46 cm，5 μm）；流動(dòng)相:乙腈-水（60∶40），流速:1.0 mL·min－1；柱溫:30 ℃；醋酸甲地孕酮選擇紫外檢測(cè)器，以最大吸收波長(zhǎng)288 nm進(jìn)行測(cè)定；炔雌醇參照復(fù)方左炔諾孕酮片溶出度測(cè)定方法[1]選擇熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng):285 nm，發(fā)射波長(zhǎng):310 nm；進(jìn)樣量:100μL。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

分別取醋酸甲地孕酮、炔雌醇標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇定量稀釋制成每1 mL中含醋酸甲地孕酮100 μg、炔雌醇3.5 μg的溶液，分別作為標(biāo)準(zhǔn)品貯備液a、標(biāo)準(zhǔn)品貯備液b。分別精密量取上述貯備液各2 mL，置于同一100 mL量瓶中，用0.5%十二烷基硫酸鈉溶液（SDS）稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.3 溶出介質(zhì)的選擇

由于2種組分均為難溶性藥物，故參考文獻(xiàn)[1]，分別以0.000 5%聚山梨酯-80溶液、0.25%SDS和0.5%SDS為溶出介質(zhì)，體積均為500 mL，采用槳法，轉(zhuǎn)速為75 r·min－1，加入樣品（批號(hào):100303），分別在10、20、30、45、60、75、90、105、120 min時(shí)取樣測(cè)定，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累積溶出率。結(jié)果，2種組分在0.000 5%聚山梨酯-80溶液中達(dá)到平臺(tái)期時(shí)的累積溶出率較低；在0.25%SDS中2種組分均溶出緩慢；在0.5%SDS中溶出迅速，45 min時(shí)的累積溶出率達(dá)到90%左右。故選擇0.5%SDS作為溶出介質(zhì)。

2.4 溶出方法和轉(zhuǎn)速的選擇

本品為片劑，優(yōu)先考慮選擇溶出度第二法[2]進(jìn)行試驗(yàn)。取樣品（批號(hào):100303），以0.5%SDS為溶出介質(zhì)，采用槳法，分別以50、75 r·min－1為轉(zhuǎn)速，在10、20、30、45、60、75、90、105、120 min時(shí)取樣測(cè)定，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累積溶出率。結(jié)果，2種組分在75 r·min－1條件下，45 min時(shí)的累積溶出率均可達(dá)90%左右，而在50 r·min－1條件下達(dá)到平臺(tái)期時(shí)間稍晚，且45 min時(shí)醋酸甲地孕酮的累積溶出率僅為80%左右。故選擇槳法，以轉(zhuǎn)速75 r·min－1進(jìn)行試驗(yàn)。

2.5 含量測(cè)定方法學(xué)考察

2.5.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn)。按照處方稱(chēng)取相當(dāng)于1片重量的輔料，加0.5%SDS適量，超聲處理15 min，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為空白輔料溶液。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液、空白輔料溶液和“2.7”項(xiàng)下樣品溶液各100μL，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果空白輔料不干擾主藥的測(cè)定，色譜見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.5.2 線性關(guān)系考察。分別精密稱(chēng)取醋酸甲地孕酮、炔雌醇標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇溶解并用溶出介質(zhì)稀釋制成每1 mL中含醋酸甲地孕酮0.394 1、0.985 25、1.970 5、2.955 75、3.941 μg，含炔雌醇0.014 32、0.035 8、0.071 6、0.107 4、0.143 2 μg的溶液，進(jìn)樣測(cè)定，分別以醋酸甲地孕酮和炔雌醇峰面積（A）對(duì)相應(yīng)濃度（c）進(jìn)行線性回歸，得醋酸甲地孕酮的線性方程為A＝360.76c+4.610 2（r＝1.000 0）；炔雌醇的線性方程為A＝469.18c+0.167 6（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，醋酸甲地孕酮和炔雌醇的檢測(cè)濃度線性范圍分別為0.394 1～3.941、0.014 32～0.143 2 μg·mL－1。本品規(guī)格為每片含醋酸甲地孕酮1 mg、炔雌醇0.035 mg，樣品溶液的濃度分別為2、0.07 μg·mL－1，均在線性范圍內(nèi)。

2.5.3 精密度試驗(yàn)。精密吸取“2.5.2”項(xiàng)下醋酸甲地孕酮、炔雌醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，分別用溶出介質(zhì)稀釋制成每1 mL中含醋酸甲地孕酮1.577、1.971、2.365 μg，含炔雌醇0.057 28、0.071 6、0.085 92 μg的溶液（相當(dāng)于樣品濃度的80%、100%和120%），分別進(jìn)樣測(cè)定5次，計(jì)算得醋酸甲地孕酮和炔雌醇校正因子（校正因子為濃度與峰面積的比值）的RSD分別為0.1%和0.3%，表明方法精密度良好。

2.5.4 回收率試驗(yàn)。分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液適量，置于200 mL量瓶中，加入混合輔料27 mg，制備分別含醋酸甲地孕酮0.985 3、1.577、1.971 μg·mL－1，含炔雌醇0.035 8、0.057 28、0.071 6 μg·mL－1的回收率試驗(yàn)樣品，加0.5%SDS適量，超聲處理15 min，放冷，加0.5%SDS稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得醋酸甲地孕酮和炔雌醇的回收率。結(jié)果平均回收率分別為98.8%、99.6%，RSD分別為0.4%、0.3%（n＝9），詳見(jiàn)表1。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取“2.7”項(xiàng)下的樣品溶液（批號(hào):100303），在室溫放置0、1、2、4、8、12 h后進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得醋酸甲地孕酮和炔雌醇峰面積的RSD分別為0.1%和0.3%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.6 溶出均一性試驗(yàn)

取2批樣品分別在10、20、30、45、60、75、90、105、120 min取溶液5 mL測(cè)定，并即時(shí)補(bǔ)充相同體積、相同溫度的溶出介質(zhì)，計(jì)算累積溶出率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 2批樣品不同溶出時(shí)間累積溶出率結(jié)果（%，±s，n＝6）Tab 2 Accumulative dissolution rate of 2 batches of samples at different tim（e%，±s，n＝6）

表2 2批樣品不同溶出時(shí)間累積溶出率結(jié)果（%，±s，n＝6）Tab 2 Accumulative dissolution rate of 2 batches of samples at different tim（e%，±s，n＝6）

取樣時(shí)間/min 10 20 30 45 60 75 90 105 120醋酸甲地孕酮批號(hào)100303 56.5±9.8 82.7±3.5 88.4±2.9 92.3±3.2 94.2±3.0 94.9±2.8 95.4±2.8 95.7±2.6 96.1±2.4批號(hào)100701 55.6±9.5 80.2±2.3 85.3±2.188.9±2.7 90.2±2.8 90.9±2.9 91.6±3.0 92.1±2.8 92.3±2.9炔雌醇批號(hào)100303 69.3±9.6 87.6±2.7 91.5±2.6 93.7±2.8 94.9±3.2 95.2±3.195.6±3.0 96.1±2.8 96.8±2.6批號(hào)100701 59.9±6.184.2±3.0 88.4±2.9 92.1±3.4 93.4±3.7 94.2±3.4 95.5±3.4 95.9±3.3 96.0±3.3

由表2可見(jiàn)，2批樣品2種組分在45 min時(shí)累積溶出率均大于80%，在60 min時(shí)累積溶出率的標(biāo)準(zhǔn)差s均小于5%，故選擇溶出平臺(tái)期60 min為取樣時(shí)間，限度均擬訂為標(biāo)示量的75%。從表2還可見(jiàn)2批樣品溶出均一性均良好。

2.7 樣品的溶出度測(cè)定

取2批樣品各6片，以0.5%SDS作為溶出介質(zhì)，采用槳法，以轉(zhuǎn)速75 r·min－1進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，取樣時(shí)間為60 min，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 2批樣品累積溶出率測(cè)定結(jié)果Tab 3 Accumulative dissolution rates of 2 batches of samples

3 討論

原衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法測(cè)定醋酸甲地孕酮的含量，雖方法快速，但靈敏度低、專(zhuān)屬性差，且炔雌醇對(duì)醋酸甲地孕酮的測(cè)定有干擾。本文采用HPLC法克服了上述困難。但炔雌醇濃度較低，采用紫外檢測(cè)器測(cè)定時(shí)靈敏度達(dá)不到要求，而采用熒光檢測(cè)器可提高靈敏度[4]。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，建立的溶出度測(cè)定方法專(zhuān)屬、靈敏、快速、準(zhǔn)確，可用于CMAT的溶出度測(cè)定。

[1]衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（二部）第五冊(cè)[S].1998年版.1998:62.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2010年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:577、1 115、附錄86.

[3]李 芳，李 瑛，劉建平，等.不同生產(chǎn)廠家常用口服避孕藥體外溶出度考察[J].中國(guó)藥房，2007，18（7）:535.

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