八仙花葉中異香豆素和香豆素成分的結構鑒定

王知斌，孫海姣，雷印廷，馬振平，肖 揚，楊春娟

(1.黑龍江中醫藥大學，黑龍江哈爾濱150040;2.哈爾濱醫科大學，黑龍江哈爾濱150081)

八仙花(Hydrangea macrophylla)又名繡球花、紫陽花、粉團花，為虎耳草科八仙花屬多年生草本植物。原產中國大陸長江中下游以南和日本本州等地，在我國的栽培歷史悠久，分布于我國南北各地。《中藥大詞典》記載:“苦微辛，寒，有小毒。”其復方治瘧疾和治腎囊風。近年來，日本學者對其多有研究，其有效成分具有抗潰瘍、抗過敏等生物活性［1］。因此，為了更好的利用該植物，我們利用現代中藥化學手段對其化學成分進行了研究。通過硅膠柱色譜﹑ODS柱色譜和HPLC等方法從中分離得到了5個異香豆素和香豆素類化合物，根據其波譜數據并結合文獻，確定了這5個化合物的結構，分別鑒定為①繡球酚，②繡球酚－4'－O－β－D－葡萄糖苷，③7－羥基香豆素，④香豆素－7－O－β－D－葡萄糖苷，⑤8－甲氧基香豆素－7－O－β－D－葡萄糖苷。

1 儀器與材料

核磁共振儀:JEOL EX－270(270 MHz)，JEOL E－500(500 MHz);高效液相色譜儀:HPLC detector－Shimadzu RID－6A refractive index;柱色譜用硅膠:BW－200，150～300目;柱色譜用ODS:DM1020T，100～200目)。

2 提取分離

八仙花葉3 kg用甲醇回流提取，得浸膏325.8 g，用水分散后，用乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮，得到乙酸乙酯層浸膏67 g。乙酸乙酯層浸膏經硅膠柱色譜分離，采用氯仿－甲醇－ 水(20∶3∶1→10∶3∶1→7∶3∶1，lower layer→6∶4∶1，v/v/v)系統進行梯度洗脫，所得餾分經ODS柱色譜以及HPLC等方法進行分離純化，得到 5個化合物:①100.3 mg，②58.2 mg，③10.5 mg，④17.2 mg;⑤13.3 mg。

3 結構鑒定

化合物1:白色粉末，該化合物的 EIMS給出 m/z 256［M］+。該化合物的1H－NMR(500 MHz，CD3OD)譜中顯示分子中含有1個AA'BB'偶合系統的苯環，質子信號為δ7.34(2H，d，J=7.3 Hz)，6.81(2H，d，J=7.3 Hz)，1 個三取代的苯環，質子信號為 δ7.53(1H，t，J=8.6，7.4 Hz)，6.90(1H，d，J=8.6 Hz)，6.88(1H，d，J=7.4 Hz)和 2 個羥基質子信號δ10.93(1H，s)，9.62(1H，s)。該化合物的13C － NMR(125 MHz，CD3OD)譜中可見15個碳信號，包括12個苯環碳信號δ 160.9，157.8，140.6，136.3，128.5，128.3 × 2，118.4，115.4，115.2 ×2，108.4 和1 個羰基碳信號 δ169.4。在 HMBC 譜中，H－3與C－2'、C－4a和 C－1相關，H －4與 C－5、C－8a和C－1'相關。通過2D－NMR和NMR確定了化合物的結構，即化合物1為繡球酚。

化合物2:白色粉末，該化合物的FABMS給出m/z 441［M+Na］+。該化合物的1H －NMR(500 MHz，CD3OD)譜中顯示分子中含有1個AA'BB'偶合系統的苯環，質子信號為δ7.45(2H，d，J=8.3 Hz)，7.07(2H，d，J=8.3 Hz)，1 個三取代的苯環，質子信號為 δ7.52(1H，t，J=8.3，7.6 Hz)，6.89(1H，d，J=8.3 Hz)，6.88(1H，d，J=7.6 Hz)和1 個8 位羥基的質子信號 δ10.90(1H，s)。該化合物的13C－NMR(125 MHz，CD3OD)譜中可見21個碳信號，包括12個苯環碳信號δ160.9，157.6，140.5，136.4，131.5，128.0 × 2，118.4，116.2×2，115.5，108.5，1 個羰基碳信號 δ169.2 和 1 分子葡萄糖的碳信號 δ100.2，73.2，77.0，69.7，76.6，60.7。該化合物波譜數據與文獻報道數據基本一致［2］，確定化合物2為繡球酚－4'－O－β－D－葡萄糖苷。化合物3:黃色粉末。1H－NMR(270 MHz，CD3OD)譜給出δ7.85(1H，d，J=9.6 Hz，H －4)和 6.18(1H，d，J=9.6 Hz，H－3)，提示為香豆素類化合物;給出ABX偶合系統的苯環質子信號 δ7.45(1H，d，J=8.3 Hz，H － 5)，6.78(1H，dd，J=8.3，2.0 Hz，H －6)，6.71(1H，d，J=2.0 Hz，H － 8)。13C －NMR(68 MHz，DMSO － d6):C2 163.8，C3112.3，C4146.1，C5130.7，C6114.7，C7163.5，C8103.5，C9157.3，C10113.1。綜合上述信息并結合文獻［3］，鑒定該化合物為7－羥基香豆素。

表 1 1H and13C NMR(500 MHz and 125 MHz，CD3OD)data of compounds 1 and 2

化合物4:白色粉末。1H－NMR(270 MHz，DMSO－d6)譜給出 δ8.00(1H，d，J=9.4 Hz，H －4)和 6.34(1H，d，J=9.4 Hz，H－3)，提示為香豆素類化合物;3個ABX偶合系統的苯環質子信號 δ 7.65(1H，d，J=8.4 Hz，H －5)，7.02(1H，dd，J=8.4，2.2 Hz，H －6)，7.05(1H，d，J=2.2 Hz，H －8)和1 個葡萄糖上的端基質子信號 δ 5.04(1H，d，J=7.4 Hz)。13C－ NMR(68 MHz，DMSO － d6):C2160.2，C3113.1，C4144.2，C5129.4，C6113.6，C7160.2，C8103.2，C9155.0，C10113.3，C1'100.0，C2'73.1，C3'76.5，C4'69.6，C5'77.1，C6'60.6。綜合上述信息并結合文獻［4］，鑒定該化合物為香豆素－7－O－β－D－葡萄糖苷。

化合物5:白色粉末。1H －NMR(270 MHz，DMSO －d6)譜給出 δ 8.00(1H，d，J=9.5 Hz，H －4)和 6.34(1H，d，J=9.5 Hz，H－3)，提示為香豆素類化合物;2個相鄰的苯環質子信號 δ7.40(1H，d，J=8.7 Hz，H －5)，7.19(1H，d，J=8.7 Hz，H－6);1個甲氧基質子信號δ3.88(3H，s)和1個葡萄糖端基質子信號 δ5.03(1H，d，J=7.4 Hz)。13C － NMR(68 MHz，DMSO －d6):C2159.7，C3113.3，C4144.4，C5123.1，C6112.3，C7153.1，C8135.8，C9147.3，C10114.1，C1'100.4，C2'73.1，C3'76.6，C4'69.5，C5'77.1，C6'60.5。綜合上述信息并結合文獻［5］，鑒定該化合物為8－甲氧基香豆素－7－O－β－D－葡萄糖苷。該化合物為從該屬植物中首次分離得到。

3 討論

異香豆素類化合物(繡球酚和繡球酚－4'－O－β－D－葡萄糖苷等)為八仙花中主要的活性成分和特征性成分，自然界植物中存在較少。近年來研究表明異香豆素類化合物具有降血糖、保肝、減肥等活性作用，因此有必要對其有效成分進行質量控制。本文為八仙花的進一步研究提供了有效的物質基礎。同時，本文首次報道了繡球酚的光譜數據，為其活性的深入研究提供了保證。

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