結(jié)直腸癌組織中PI3KCB蛋白表達及其與多藥耐藥基因產(chǎn)物的相關(guān)性

高向前，吳淑華，紀(jì) 洪，李揚揚，燕 偉，孟 曉

(濱州醫(yī)學(xué)院，山東濱州256603)

對于結(jié)直腸癌，目前除手術(shù)治療外，化學(xué)藥物治療依然是重要的治療途徑，因此，選擇有效的化療藥物成為本病治療的關(guān)鍵。PIK3CB基因編碼的蛋白為PI3KCB蛋白。Benistant等［1］研究發(fā)現(xiàn)，在細胞培養(yǎng)中野生型PI3KCB蛋白過表達可以誘導(dǎo)細胞轉(zhuǎn)化，且在不同的腫瘤中PI3KCB蛋白表達增加也有所不同。倪麗等［2］研究發(fā)現(xiàn)，在體外細胞培養(yǎng)中抑制PI3KPI3KCB蛋白的表達，結(jié)腸癌HCT116細胞的增殖速度明顯降低。本研究采用免疫組化法檢測結(jié)直腸癌組織中的PI3KCB蛋白及多藥耐藥(MDR)基因產(chǎn)物L(fēng)RP、GST-π、TopoⅡ，觀察其表達變化，并分析二者的關(guān)系。為結(jié)直腸癌的預(yù)后判斷及化療藥物的選擇提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2009年1月～2010年12月濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的結(jié)直腸癌患者128例，男61例，女67例;年齡25～81歲。本組均為腺癌，其中高分化43例、中分化55例、低分化30例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移81例，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期81例、Ⅲ～Ⅳ期47例。所有病例為首次發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌，術(shù)前未行放、化療。本組患者行手術(shù)治療的過程中留取癌組織，同時取10例正常大腸黏膜組織作對照。

1.2 PI3KCB蛋白及LRP、GST-π、TopoⅡ的檢測采用免疫組化SP法。鼠抗人PI3KCB蛋白單克隆抗體濃縮液購自Abcam公司。鼠抗人LRP、GST-π、TopoⅡ單克隆抗體及通用型二抗和其他輔助試劑購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。所有標(biāo)本用10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，3 μm厚連續(xù)切片。常規(guī)脫蠟后用3%的H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化酶活性，檸檬酸高壓抗原修復(fù)，繼之分別加入1∶250鼠抗人PI3KCB蛋白單克隆抗體和鼠抗人 LRP、GST-π、TopoⅡ單克隆抗體，4℃過夜，逐步滴加通用型二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封固。以PBS代替一抗作空白對照，用已知PI3KCB蛋白陽性的扁桃體組織切片及LRP、GST-π、TopoⅡ陽性的乳腺癌組織切片作陽性對照。以細胞質(zhì)或核內(nèi)出現(xiàn)黃色顆粒為陽性標(biāo)志，PI3KCB蛋白、LRP、GST-π表達于細胞質(zhì)，TopoⅡ表達于細胞核。每張切片光鏡下(400×)觀察10個視野，每個視野計數(shù)100個細胞，共計1 000個細胞，陽性細胞數(shù)≤25%為1分、26%～50%為2分、51%～75%為3分、＞75%為4分;細胞質(zhì)或核無色為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。上述兩分值的乘積≥4判為陽性，＜4判為陰性［3］。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。組間率的比較用分割 χ2檢驗，相關(guān)關(guān)系的分析用Spearman相關(guān)分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌組織中PI3KCB蛋白的表達 10例正常大腸黏膜組織中 PI3KCB蛋白陽性 1例(10%)、陰性9例，結(jié)直腸癌組織中PI3KCB蛋白陽性105例(82%)、陰性23例，兩種組織的PI3KCB蛋白陽性表達率相比，P＜0.01。低分化、中分化、高分化結(jié)直腸癌組織中PI3KCB蛋白呈陽性和陰性表達者分別為30例(100%)和0例、46例(85%)和 9例、29例(67%)和14例，低、中、高分化結(jié)直腸癌組織中PI3KCB蛋白的陽性表達率相比，P均＜0.01。47例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中，PI3KCB蛋白陽性43例、陰性4例，81例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，陽性63例、陰性18例，兩者相比，P＜0.01。81例Ⅰ～Ⅱ期結(jié)直腸癌組織中PI3KCB蛋白陽性63例、陰性18例，47例Ⅲ～Ⅳ期者中陽性43例、陰性4例，兩者相比，P＜0.01。65例結(jié)腸癌組織中，PI3KCB蛋白陽性60例、陰性5例，63例直腸癌組織中陽性48例、陰性15例，兩者相比，P＜0.05。

2.2 結(jié)直腸癌組織中PI3KCB蛋白表達與MDR基因產(chǎn)物表達的相關(guān)性 128例結(jié)直腸癌組織中GST-π陽性120例(93.75%)、陰性8例，TopoⅡ陽性68例(53.13%)、陰性60例，LRP陽性106例(82.81%)、陰性 22例。PI3KCB蛋白的表達與GST-π的表達成正相關(guān)(rs=0.207，P＜0.05); PI3KCB蛋白的表達與LRP、TopoⅡ的表達無明顯相關(guān)性(rs分別為0.497、0.303，P均＞0.05)。詳見表1。

表1 結(jié)直腸癌組織中PI3KCB蛋白的表達與MDR基因產(chǎn)物表達的相關(guān)性(例)

3 討論

PI3KCB蛋白的分子量為110～120 kD，其編碼基因PI3KCB位于染色體3q22.3上。Ciraolo等［4］研究發(fā)現(xiàn)，PI3KCB蛋白表達缺失可導(dǎo)致小鼠生長阻滯以及輕度的胰島素抵抗。提示PI3KCB蛋白正常表達能維持人體的生理代謝平衡和促進細胞生長發(fā)育。研究［5，6］表明，PI3KCB蛋白參與了體內(nèi)多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，通過其磷脂激酶活性作用于其下游信號分子如AKT等，進而在細胞的增殖、周期調(diào)控和凋亡等活動中發(fā)揮重要作用。An等［7］研究發(fā)現(xiàn)，HEC-1B型子宮內(nèi)膜癌細胞的PI3KCB蛋白呈過度表達，利用siRNA干擾PI3KCB蛋白的表達，能夠抑制該細胞的增殖并促進其凋亡。本研究結(jié)果顯示，PI3KCB蛋白在結(jié)直腸癌組織中的陽性表達率明顯高于正常大腸黏膜組織，隨腫瘤分化程度的降低PI3KCB蛋白的表達逐漸增強，在低分化腺癌組織中PI3KCB蛋白的陽性表達率為100%。表明結(jié)直腸癌組織中PI3KCB蛋白呈異常表達，并與腫瘤的分化程度密切相關(guān)，其可能在結(jié)直腸癌的發(fā)生以及去分化中發(fā)揮作用。PI3KCB蛋白的表達與結(jié)直腸癌的發(fā)生部位、腫瘤浸潤深度、TNM分期以及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示PI3KCB蛋白的過度表達與結(jié)直腸癌的生物學(xué)行為密切相關(guān)。

目前，結(jié)直腸癌的治療仍以手術(shù)治療為主，輔以化療、放療。腫瘤細胞對化療藥物所產(chǎn)生的MDR成為臨床治療中的一大難題。腫瘤的MDR是指某種化療藥物作用于腫瘤后，腫瘤細胞不僅對該種藥物產(chǎn)生耐藥，而且對未接觸過的、結(jié)構(gòu)和機制均不同的多種抗腫瘤藥物也產(chǎn)生交叉耐藥。因此，臨床常聯(lián)合檢測多個MDR基因產(chǎn)物，以期能更客觀地反應(yīng)腫瘤細胞對化療藥物的耐藥性。MDR標(biāo)志物L(fēng)RP、GST-π、TopoⅡ可以間接反映腫瘤組織中MDR的情況［8］。本研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌組織中GST-π的陽性表達率為93.75%、TopoⅡ的陽性表達率為53.13%、LRP陽性表達率為82.81%，提示結(jié)直腸癌中存在MDR現(xiàn)象［9］。MDR的產(chǎn)生與多種機制有關(guān)，如多種糖蛋白介導(dǎo)的藥物外排泵機制、酶介導(dǎo)的耐藥機制以及凋亡調(diào)控基因介導(dǎo)的耐藥和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常等。PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活是腫瘤細胞對化療藥物產(chǎn)生MDR的關(guān)鍵點之一［10］。作為 PI3K/Akt細胞信號通路的重要調(diào)控分子，PI3KCB蛋白是PI3K催化亞基p110的重要組成部分。本研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織中PI3KCB蛋白的表達與MDR基因產(chǎn)物GST-π的表達呈正相關(guān)，而與LRP、TopoⅡ的表達無相關(guān)性，提示PI3KCB蛋白表達高的結(jié)直腸癌可能對與MDR基因產(chǎn)物GST-π相關(guān)的烷化劑、鉑類、絲裂霉素等抗癌藥物產(chǎn)生耐藥。

綜上所述，PI3KCB蛋白在結(jié)直腸癌組織中呈高表達，與結(jié)直腸癌的發(fā)生及其生物學(xué)行為有關(guān)。同時，PI3KCB蛋白的表達與MDR基因產(chǎn)物GST-π的表達呈正相關(guān)。因此，檢測PI3KCB蛋白的表達對于判斷結(jié)直腸癌的生物學(xué)行為、預(yù)后以及合理篩選有效的化療藥物具有重要參考價值。

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