血清可溶性B7-H4在非小細胞肺癌患者中的表達及臨床意義

張 波，買買提·吐爾遜木明，龐作良*

(1新疆醫科大學附屬腫瘤醫院，烏魯木齊830011;2新疆醫科大學研究生院)

腫瘤在發生發展進程中會產生一些正常細胞不存在的新的抗原標記物，機體免疫系統通過對這些腫瘤抗原的識別而對腫瘤細胞進行殺傷與監視，即機體對腫瘤的免疫。T細胞介導的細胞免疫在人體抗腫瘤免疫效應中起重要作用，而T細胞活化需要雙重信號的激活，即抗原提呈細胞(APC)上的抗原肽MHC與T細胞上的TCR-CD3復合體結合，提供T細胞活化的特異性抗原刺激信號，即第一信號;以及APC上的B7家族分子與T細胞上的CD28家族分子相互識別，為T細胞活化提供共信號，即第二信號［1］。B7-H4是新近發現的B7家族成員［2～4］，免疫組化及RT-PCR分析顯示，B7-H4在卵巢癌等［5～8］一些腫瘤組織高表達，推測B7同源體4(B7-H4)具有減弱抗腫瘤免疫應答的作用。國內對于血清可溶性B7-H4(sB7-H4)在非小細胞肺癌(NSCLC)中的研究鮮有報道。本研究應用ELISA法檢測NSCLC患者血清中B7-H4的表達水平，并探討其在NSCLC中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 從2010年10月～2011年8月收集新疆醫科大學附屬腫瘤醫院胸外科住院患者，男30例、女21例，年齡60.88±8.50(41～79)歲，漢族39例、維吾爾族12例，有淋巴結轉移16例、無淋巴結轉移35例，病理分類為鱗癌26例、腺癌22例、其他類型3例(包含大細胞癌、肉瘤樣癌)，組織分化為高分化6例、中分化34例、低分化11例，TNM分期(2009)Ⅰ期25例、Ⅱ期12例、Ⅲ期14例，均經術后常規病理診斷確診。選取同期住院的肺部良性疾病(BPD)患者40例，包含結核、肺囊腫、錯構瘤、炎性假瘤、支氣管擴張、硬化性血管瘤等，男21例、女19例，年齡 52.95±12.36(28～77)歲。所有NSCLC患者行肺癌根治性手術治療，并除外與自身免疫相關的疾病，標本采集前未行放療、化療及免疫治療等相關腫瘤治療。

1.2 實驗材料 B7-H4 ELISA檢測試劑盒，購于北京永輝生物科技有限公司。德國羅氏公司電化學發光免疫分析儀Cobas6000及羅氏公司提供的配套CA125、CEA檢驗試劑盒。

1.3 檢測方法 所有NSCLC和BPD患者入院后第1天及NSCLC患者手術后第2天早晨空腹采集靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min，分離血清后置－70℃凍存待測，實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書操作，CA125、CEA檢測由新疆醫科大學附屬腫瘤醫院檢驗科完成。

1.4 統計學方法 采用Excel建立電子數據庫，運用SPSS16.0進行t檢驗、F檢驗和Spearman相關性分析，計量資料以s表示，以P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清sB7-H4水平 NSCLC、BPD患者血清sB7-H4水平分別為(49.78±13.46)、(17.34± 9.39)μg/L(P＜0.01)。

2.2 血清sB7-H4與NSCLC臨床病理參數的關系見表1。

表1 血清sB7-H4與NSCLC臨床病理參數的關系(s)

表1 血清sB7-H4與NSCLC臨床病理參數的關系(s)

臨床病理參數 n sB7-H4(μg/L)P性別男30 48.32±11.41 ＞0.05女21 49.54±9.49民族漢39 49.73±9.57 ＞0.05維吾爾 12 49.62±10.45年齡(歲)≤60 25 48.02±8.57 ＞0.05＞60 26 50.82±9.48吸煙是26 49.62±10.61 ＞0.05否25 49.01±9.47腫塊直徑(cm)≥5 13 49.33±14.23 ＞0.05＜5 38 49.90±10.52病理類型腺癌 22 51.48±9.01鱗癌 26 47.76±11.72 ＞0.05其他 3 48.81±6.31組織分化高6 46.47±12.82中34 48.83±8.46 ＜0.05低11 51.63±9.27 TNM分期Ⅰ25 42.08±8.62Ⅱ12 49.62±9.73 ＜0.05Ⅲ14 52.46±10.63淋巴結轉移有16 51.51±9.52 ＜0.05無35 48.72±8.63

2.3 NSCLC患者手術前后血清sB7-H4水平的變化 NSCLC患者手術前、后血清sB7-H4水平分別為(49.78±13.46)、(38.35±8.36)μg/L(P＜0.05)。

2.4 NSCLC患者血清sB7-H4水平與CA125、CEA相關性 將 NSCLC血清 sB7-H4表達水平與CA125、CEA水平進行Spearman相關分析，結果顯示sB7-H4水平與CA125、CEA水平均呈正相關(r =0.717、0.586，P均＜0.05)。

3 討論

B7-H4(又稱 B7X和 B7sl)是2003年 Chen等［2～4］3個實驗室利用生物信息學方法相繼發現的B7家族新成員，主要在抗原特異性免疫反應中起抑制作用，其通過抑制CD+4和CD+8T細胞的增殖、細胞周期的進程及細胞因子IL-2、IFN-γ的產生來負性調控T細胞免疫應答。近來大量研究發現B7-H4在卵巢癌、乳腺癌、腎癌等［5～10］腫瘤組織中過度表達，提示B7-H4可能與腫瘤的發生有關。2006年Simon等［5］運用ELISA法在卵巢癌患者血清中首次證實了存在高表達的sB7-H4。本實驗結果說明血清sB7-H4可能為 NSCLC診斷及預后提供新的依據。

本研究中血清sB7-H4在NSCLC組織中比在BPD組織中顯著高表達，與張彩娣等研究相符合［11］，說明sB7-H4的表達水平增高可能通過負向調節T細胞免疫的方式加速癌細胞免疫逃逸，促進腫瘤在人體內生長，并抑制腫瘤細胞的凋亡，從而導致臨床上肺癌的發生，提示sB7-H4可能為NSCLC新的具有特定診斷價值的腫瘤標記物，可用于鑒別良惡性肺部腫瘤，也說明編碼血清sB7-H4蛋白的基因可能成為NSCLC的促進基因。

腫瘤細胞的分化程度是最重要的腫瘤惡性生物學特征，分化越差說明惡性程度越高，腫瘤患者的預后越差。本實驗發現低分化肺癌患者血清sB7-H4的水平明顯高于高中分化癌水平，錢韻等［12］的研究也表明了這一點，提示NSCLC患者血清中sB7-H4的過度表達可能通過下調APC的活性和加速T細胞凋亡來抑制腫瘤免疫系統的監控，從而促進肺癌細胞生長發展和惡性轉化，使腫瘤細胞具有更大的惡性潛能。

本實驗中有淋巴結轉移的NSCLC血清sB7-H4顯著高于無淋巴結轉移的 NSCLC患者，與 Sun等［13］的研究結果相吻合，說明sB7-H4在NSCLC的轉移中扮演重要角色。在實驗過程中我們發現術后患者血清sB7-H4水平明顯低于術前，可能是因為手術切除腫瘤組織后機體腫瘤負荷減輕，隨即B7-H4表達減少，說明NSCLC患者血清sB7-H4水平與肺癌根治性手術治療有關。此外本實驗中NSCLC患者血清sB7-H4水平與CA125、CEA水平正相關，此現象提示三者有望成為聯合檢測NSCLC的有效指標。

綜上所述，血清sB7-H4在NSCLC中高表達，可能通過抑制機體抗腫瘤免疫參與免疫逃逸，可能與NSCLC的發生、發展及轉移有關。隨著研究的深入，sB7-H4可望成為 NSCLC新的分子標記物和NSCLC免疫治療的潛在靶點。

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