復方苦豆子對腎性高血壓復合高脂血癥大鼠血漿內皮素和一氧化氮合成酶的影響

劉曉敏，陳 虹

(1吉林醫藥學院附屬醫院，吉林吉林132013;2石河子大學藥學院藥理學系省部共建新疆特種植物藥資源教育部重點實驗室)

復方苦豆子(CK)由苦豆子、決明子、山楂等八味中藥組成。本課題組研究發現其可改善血脂代謝紊亂狀態并有降低血壓的作用［1～3］。但這些均針對單獨疾病模型進行研究，CK對高血壓合并高脂血癥復合模型是否能同時具有降壓調脂作用，其作用機制如何?2006年1月～2007年12月，我們對這個方向進行了研究，為課題的進一步開展提供更寬的思路。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選取健康清潔級Wistar大鼠，雄性，2～3月齡，體質量170～190 g，購自新疆維吾爾自治區實驗動物研究中心(合格證號:醫動字第2號)。

1.2 主要儀器 RBP-1B型清醒大鼠血壓心率測定儀(北京中日友好醫院);DL-5低速大容量離心機、GL-16M臺式高速冷凍離心機(湖南凱達科學儀器有限公司);酶標儀(Thermo electron corporation); XH-6010Y放射免疫計數器(陜西二六二醫療儀器廠);PCUV-2501紫外分光光度計(日本島津)。

1.3 主要試劑與試劑盒 復方苦豆子流浸膏(石河子大學省部共建新疆特種植物藥資源教育部重點實驗室自制，1 mL含生藥2.50 g);膽固醇(美國進口);膽酸鈉(上海藍季科技發展有限公司);丙基硫氧嘧啶(上海復星朝暉藥業有限公司);卡托普利片(上海安源安徽仁濟制藥有限公司);血脂康膠囊(北京北大維信生物科技有限公司);TC、TG、HDL-C試劑盒(溫州津瑪生物科技有限公司);LDL-C試劑盒(浙江東甌生物工程有限公司);ET放射免疫分析測定盒(北京北方生物技術研究所);NOS測試盒(南京建成生物工程研究所);其他試劑均為分析純。

1.4 模型建立及分組 按文獻建立腎性高血壓復合高脂血癥大鼠模型［4］。復合模型建成后，選取造模成功的大鼠開始分組給藥，每組12只，CK高、中、低劑量組［11.13 g/(kg·d)、5.56 g/(kg·d)、2.78 g/(kg·d)］;陽性對照組:卡托普利［0.01 g/(kg· d)］+血脂康［0.8 g/(kg·d)］;模型組:蒸餾水;假手術組(n=10):蒸餾水+基礎飼料。每天灌服1次，上午10點灌藥，晚上8點灌脂肪乳5 mL/(kg·學處理，實驗數據以s表示。組間分析采用One-Way ANOVA兩兩比較得到相應的P值。以P≤0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 大鼠腎性高血壓復合高脂血癥模型的建立共80只大鼠，其中70只接受兩腎一夾(2K1C)法造模手術，10只為假手術組。術后4周末所有實驗大鼠測量血壓，取血檢測血漿TC、TG、HDL-C、LDL-C，與假手術組比較共有10只大鼠造模失敗被剔除，建立成功復合模型共60只，造模成功率86%。造模組與假手術組比較，血壓、TC、LDL-C明顯升高，具有極顯著性(P＜0.01)，HDL-C降低顯著(P＜0.05)。說明腎性高血壓復合高脂血癥模型構建成功。結果見表1。 d)，每周稱量大鼠體質量，連續灌胃8周。各組灌胃容積相同，不足之處灌胃蒸餾水達到一致。

1.5 觀察指標及方法 體質量:每周同一時間稱重1次，記錄各組大鼠體質量的變化情況。尾動脈收縮壓、心率:在給藥8周，用RBP-1B型清醒大鼠血壓心率測定儀測量血壓、心率。肝臟脂質(TC、TG):給藥8周末大鼠取血處死后，分離肝臟無菌生理鹽水洗凈，濾紙吸干，從中摘取動物肝臟0.5 g，放入玻璃勻漿器中，加入4.5 mL甲醇—氯仿混合液(1∶1)，研磨制成10%的肝勻漿，于14 520 g離心30 min，取上清液待測［5］。內皮素(ET):取血后，將血液迅速注入到含酶抑制劑的抗凝管中，低溫離心(4℃，14 520 g，10 min)，分離血漿，－70℃保存待測。總一氧化氮合酶(T-NOS)、結構型一氧化氮合酶(cNOS):取血后，將血液置于肝素凝處理過的離心管中，14 520 g離心10 min后取上層血漿，－70℃保存待測。

1.6 統計學方法 采用SPSS13.0軟件包進行統計

表1 大鼠實驗4周末觀察指標變化(s)

表1 大鼠實驗4周末觀察指標變化(s)

注:與假手術組比較，*P＜0.05，△P＜0.01

組別 血壓(mmHg) TC(mmol/L) TG(mmol/L) HDL-C(mmol/L) LDL-C(mmol/L)假手術組 119.74±6.87 0.89±0.07 0.85±0.08 0.60±0.05 0.35±0.03造模組 159.37±18.79△ 5.06±0.47△ 2.37±0.19△ 0.31±0.04* 3.45±0.31△

2.2 CK對腎性高血壓復合高脂血癥大鼠體質量的影響 實驗中大部分大鼠健康狀況良好，模型組動物精神較差，飲食飲水少，皮毛粗糙少光澤，部分大鼠出現腹瀉。各給藥組大鼠之間飲食、二便無明顯差別。各組體質量變化比較見表2。

2.3 CK對腎性高血壓復合高脂血癥大鼠血壓、心率的影響 隨著用藥時間的延長，假手術組血壓趨于平穩，處于正常范圍內，模型組血壓不斷上升，到8周時血壓達到180 mmHg。各組血壓、心率變化比較見表3。

2.4 CK對腎性高血壓復合高脂血癥大鼠肝臟脂質(TC、TG)含量的影響 給藥8周后，中劑量組、高劑量組與模型組比較肝臟TC、TG含量明顯下降(P＜0.01);低劑量組降低幅度較小(P＜0.05)。結果見表4。

2.5 復方苦豆子制劑對腎性高血壓復合高脂血癥大鼠血漿ET、NOS的影響

表2 實驗期間各組大鼠的體質量變化比較(g，s)

表2 實驗期間各組大鼠的體質量變化比較(g，s)

注:與模型組比較，*P＜0.05，△P＜0.01;與假手術組比較，#P＜0.05，▲P＜0.01

組別 n 給藥前 給藥1周 給藥2周 給藥4周 給藥8周假手術組 10 242.7±18.2 255.6±16.3 267.3±21.5 287.8±26.2 340.1±18.5模型組 12 246.4±14.7 266.7±23.5 260.3±19.2 250.2±17.7# 245.8±29.3▲高劑量組 12 247.4±12.5 257.7±13.2 250.4±12.1 268.1±17.6*# 317.9±26.3△#中劑量組 12 248.2±18.3 260.3±19.5 255.1±17.0 272.8±21.6*# 325.3±27.1△#低劑量組 12 249.6±17.4 256.8±17.7 250.7±15.2 256.5±25.6# 285.0±26.1△▲陽性對照組 12 250.8±13.9 255.3±18.5 249.9±17.7 278.6±27.8 315.6±28.3△#

表3 用藥8周后CK對復合模型大鼠收縮壓及心率的影響(s)

表3 用藥8周后CK對復合模型大鼠收縮壓及心率的影響(s)

注:與模型組比較，*P＜0.01;與假手術組比較，△P＜0.05，#P＜0.01

組別 n 治療前收縮壓(mmHg) 心率(次/min)治療后收縮壓(mmHg) 心率(次/min)假手術組 10 119.7±6.9 342.7±25.2 116.1±8.3 341.6±36.4模型組 12 159.2±7.5# 361.8±33.8△ 180.5±5.1# 379.3±37.6△高劑量組 12 159.7±13.5 369.7±34.8 135.6±8.6* 373.5±34.4中劑量組 12 157.9±10.8 372.6±36.7 133.3±12.2* 378.6±37.3低劑量組 12 159.1±11.9 387.3±34.5 169.3±10.0 382.6±35.5陽性對照組 12 159.4±11.2 369.6±36.7 131.2±10.5*368.4±36.2

表4 用藥8周復方苦豆子制劑對復合模型大鼠肝臟TC、TG(mmol/L)含量的影響(s)

表4 用藥8周復方苦豆子制劑對復合模型大鼠肝臟TC、TG(mmol/L)含量的影響(s)

組別 n TC TG假手術組10 0.58±0.07 0.52±0.08模型組 12 3.37±0.41## 4.05±0.57##高劑量組 12 2.25±0.29＊＊ 2.38±0.30*中劑量組 12 1.82±0.25＊＊ 2.13±0.32＊＊低劑量組 12 2.95±0.37 3.49±0.28*陽性對照組 12 1.88±0.23＊＊ 2.75±0.34＊＊

2.5.1 用藥8周復方苦豆子制劑對復合模型大鼠血漿ET水平的影響 中劑量組與模型組比較明顯降低血漿ET水平(P＜0.05)，高劑量組和低劑量組降低幅度較小(P＞0.05)。結果見表5。

2.5.2 用藥8周復方苦豆子制劑對復合模型大鼠血漿NOS含量的影響 中劑量組、高劑量組與模型組比較，明顯升高血漿T-NOS、cNOS含量(P＜0.01)。結果見表5。

表5 用藥8周復方苦豆子制劑對復合模型大鼠血漿ET、NOS水平的影響(s)

表5 用藥8周復方苦豆子制劑對復合模型大鼠血漿ET、NOS水平的影響(s)

注:與模型組比較，*P＜0.05，△P＜0.01;與假手術組比較，#P＜0.01

組別 n TC(mmol/L) TG(mmol/L) ET(pg/mL) T-NOS(U/mL) cNOS(U/mL)假手術組 10 0.58±0.07 0.52±0.08 173.74±12.64 37.78±2.26 21.93±1.81模型組 12 3.37±0.41# 4.05±0.57# 272.20±25.43# 26.50±1.87# 9.33±0.85#高劑量組 12 2.25±0.29△ 2.38±0.30* 219.47±19.18 33.18±1.28△ 15.69±1.32△中劑量組 12 1.82±0.25△ 2.13±0.32△ 205.32±18.54* 35.35±2.98△ 19.75±1.65△低劑量組 12 2.95±0.37 3.49±0.28* 238.43±21.85 27.32±1.96 10.01±1.13陽性對照組 12 1.88±0.23△ 2.75±0.34△ 181.35±14.40△ 37.64±2.14△ 19.14±1.96△

3 討論

從本部分實驗結果可以看出，CK可降低高血壓復合高脂血癥模型大鼠的血壓，調節肝臟脂質;在高血壓并發高脂血癥癥狀態下，大鼠的內皮損傷更加嚴重，用藥8周后，隨著血壓血脂的下降，各給藥組血漿ET水平不同程度的降低，T-NOS和cTOS都不同程度的升高，說明復方苦豆子制劑的降壓調脂作用與ET分泌、NO的合成減少有關系。以高、中劑量組效果明顯，與陽性對照藥物在改善內皮功能方面具有相似之處［6，7］。ET和NOS與高血壓和高脂血癥的發病機制密切相關，因此，推測CK降壓調脂作用與內皮系統的調節有關。

高血壓、高脂血癥的發病機制復雜，以往僅從腎素血管緊張素系統對CK的降壓機制進行了研究［2］，而其降壓調脂作用與內皮系統的關系從未研究。本部分實驗探討了CK降壓調脂作用與ET和NOS的關系，反過來也進一步證明了CK的作用。在實驗中可看到中劑量組效果最好，好于高劑量組，并沒有像許多西藥一樣呈現較為明顯的量效關系。出現這種現象是否由于該制劑仍然是含有多種性質相近的成分的混合物，因而各成分之間的藥效可能有不小的差異?在低劑量可能某些成分還沒有達到其閾濃度，而在較高劑量其藥理活性則充分顯示出來，當達到一定濃度時有些成分又出現了副作用而影響了其他成分的作用?在高劑量與中劑量之間是否還有一個最佳劑量還有待進一步研究。陽性對照組采用了降壓藥物卡托普利和調血脂藥物血脂康聯合灌胃治療，與臨床高血壓復合高脂血癥的患者的治療方案相似，從而使研究更加符合臨床實際。

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