高脂血癥恒河猴血清RETN與血脂的相關(guān)性分析

李艷艷，和占龍，趙 遠(yuǎn)，楊鳳梅，禹文海，陳麗雄，王俊斌，魯帥堯

（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所，云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650118）

高脂血癥（hyperlipidemia）是脂肪代謝或運(yùn)轉(zhuǎn)異常使血漿一種或多種脂質(zhì)高于正常值的一種全身性疾病，其主要危害是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化，進(jìn)而導(dǎo)致眾多的相關(guān)疾病。大量研究表明，高脂血癥是腦卒中、冠心病、心肌梗死、心臟猝死獨(dú)立而重要的危險(xiǎn)因素，也是促進(jìn)高血壓、糖耐量異常、糖尿病的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素。此外，高脂血癥還可導(dǎo)致脂肪肝、胰腺炎，高尿酸血癥等疾病，已嚴(yán)重威脅著人類的健康，深入研究其發(fā)病機(jī)理和相關(guān)因素具有一定的意義。抵抗素（resistin，RETN）是一種主要由脂肪細(xì)胞分泌的多肽類激素，已有的研究表明，RETN水平可能影響體內(nèi)能量代謝和平衡，與糖代謝、脂代謝的關(guān)系更為密切。初期主要是研究其與肥胖、胰島素抵抗和Ⅱ型糖尿病之間的關(guān)系［1］。目前對(duì)其與高尿酸血癥、高血壓、冠心病、急性腦梗死等疾病的相關(guān)性研究較多［2-5］，而對(duì)于血清RETN與高脂血癥的關(guān)系，報(bào)道較少。恒河猴在組織結(jié)構(gòu)、生理和代謝功能等方面與人類極為相似，是人類疾病基礎(chǔ)研究和臨床前研究的理想動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)恒河猴血清RETN及血脂，了解高脂血癥恒河猴的血清RETN的水平，旨在探討高脂血癥恒河猴血清RETN水平與血脂是否存在相關(guān)性，為人類高脂血癥及脂類代謝疾病的研究提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)恒河猴由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所醫(yī)學(xué)靈長(zhǎng)類研究中心提供，普通級(jí)恒河猴實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滇）2010-0006；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為：SYXK（滇）2010-0009，并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

1.2 儀器設(shè)備及試劑

移液器（eppendorf 100μL）、離心機(jī)（Thermo LEGEND MICRO 21R）、酶標(biāo)儀（BIO-RAD680）、羅氏全自動(dòng)生化分析儀（P800）、human-resistin ELISA定量檢測(cè)試劑盒（上海依科賽生物制品有限公司，批號(hào)：ZIAZBZZ101）。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組：隨機(jī)挑選正常飼養(yǎng)的成年健康恒河猴16只，分為兩組，飼喂正常飼料為對(duì)照組，飼喂高脂飼料為實(shí)驗(yàn)組；前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)4個(gè)月后實(shí)驗(yàn)組恒河猴血脂水平發(fā)生顯著變化，符合高脂血癥的臨床特征，說(shuō)明已初步建立了實(shí)驗(yàn)性高脂血癥恒河猴模型。

1.3.2 血清樣品采集：采血前受試動(dòng)物禁食12 h以上，后肢靜脈采血2 m L，分裝在一次性自動(dòng)定量采血管中，3000 r/min離心30 min，分離血清后收集，于-20℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 檢測(cè)項(xiàng)目：TC、TG采用氧化酶法測(cè)定，HDL-C、LDL-C采用直接法測(cè)定。

1.3.4 血清RETN測(cè)定：由于先前研究結(jié)果表明，人類與恒河猴的RETN氨基酸序具有較高的同源性，并且趙遠(yuǎn)等［6］的實(shí)驗(yàn)結(jié)果已證實(shí)人RETN ELISA試劑盒可用于恒河猴RENT的檢測(cè)，且測(cè)定結(jié)果具有較好的穩(wěn)定性。因此本實(shí)驗(yàn)采用Humanresistin ELISA定量檢測(cè)試劑盒測(cè)定恒河猴血清RETN水平。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 血脂及血清RETN測(cè)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組恒河猴血清TC、LDL-C以及RETN水平與對(duì)照組比較，顯著升高（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組TG較對(duì)照組顯著降低（P＜0.05）；HDL-C，兩組比較差異不顯著（P＞0.05）（表1）。

表1 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組血脂及血清RETN的測(cè)定結(jié)果Tab.1 The determination Results of resistin and lipids of experimental group and control group

2.2 血清RETN與血脂的相關(guān)性分析結(jié)果

通過(guò)相關(guān)性分析得出，血清RETN水平與TC、 LDL-C呈直線正相關(guān)（回歸方程為：y=0.0009x+ 0.4384，r=0.776，P＜0.001；y=0.001x-1.4385，r =0.791，P＜0.001），與TG呈直線負(fù)相關(guān)（y=-0.00006x+1.1162，r=-0.754，P=0.001），與HDL-C無(wú)相關(guān)性（表2）。線性關(guān)系（圖1，圖2，圖3）。

表2 血清RETN與血脂的相關(guān)性分析Tab.2 Correlation analysis between serum resistin and lipids

圖1 血清RETN與TC相關(guān)性Fig.1 Correlation between serum concentration of resistin and TC

圖2 血清RETN與TG相關(guān)性Fig.2 Correlation between serum concentration of resistin and TG

圖3 血清RETN與LDL-C相關(guān)性Fig.3 Correlation between serum concentration of resistin and LDL-C

3 討論

非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物與人的遺傳物質(zhì)有75％～98.5％的同源性，而恒河猴與人類基因組的同源性大于95％，顯示了許多相似的生物學(xué)和行為學(xué)特征，用恒河猴作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可較好的研究人類相似的疾病及其發(fā)病機(jī)制，因此廣泛用于傳染病學(xué)、藥理毒理學(xué)、生殖生理、營(yíng)養(yǎng)代謝等方面的研究，也是研究人類高脂血癥的理想動(dòng)物模型。根據(jù)血清TC、TG和HDL-C的含量，高脂血癥可分為四類：高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、混合型高脂血癥即血清TC和TG含量均增高、低高密度脂蛋白血癥。本研究中實(shí)驗(yàn)組恒河猴TC、LDL-C顯著高于對(duì)照組，TG顯著低于對(duì)照組，提示實(shí)驗(yàn)組恒河猴血脂代謝已經(jīng)發(fā)生紊亂，符合部分高脂血癥特征，說(shuō)明已初步建立了恒河猴高脂血癥動(dòng)物模型。

RETN主要是由白色脂肪細(xì)胞分化產(chǎn)生的，是脂肪細(xì)胞特異性分泌的具有內(nèi)泌激素性質(zhì)的一種蛋白質(zhì)［7］，有抵抗胰島素的作用，可使血糖水平升高及脂肪細(xì)胞增生繁殖。所以近年來(lái)圍繞RETN和肥胖、胰島素抵抗及糖尿病的關(guān)系進(jìn)行了大量研究，而糖代謝與脂代謝關(guān)系密切。有資料顯示，RETN與脂代謝紊亂也有關(guān)［8］。本研究對(duì)高脂血癥恒河猴血清RETN與血脂水平進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)高脂血癥恒河猴血清TC、LDL-C、RETN水平均顯著高于對(duì)照組，這與解金紅［9］報(bào)道的高脂血癥病人LDL-C及血清RETN水平明顯高于正常人群的研究結(jié)果一致。相關(guān)性分析結(jié)果表明，血清RETN水平與TC、LDL-C呈顯著正相關(guān)，與寇忠愛［5］，史艷［10］等報(bào)道的急性腦梗死、高血壓患者血清RETN水平與LDLC呈正相關(guān)的觀點(diǎn)相一致。有研究表明，RETN與血脂及載脂蛋白代謝相關(guān)［11］，而載脂蛋白A5的主要功能是降低血漿TG的水平，在血漿脂質(zhì)動(dòng)態(tài)平衡中起關(guān)鍵作用［12-14］，這可能是在本實(shí)驗(yàn)中高脂血癥恒河猴血清RETN與TG呈負(fù)相關(guān)的結(jié)果產(chǎn)生的原因，但目前RETN影響載脂蛋白代謝的機(jī)制尚不清楚，是否因RETN的調(diào)控作用導(dǎo)致血清TG的降低還不能確定，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，RETN與血脂代謝密切相關(guān)，并與部分血脂指標(biāo)呈現(xiàn)伴隨狀態(tài)，提示RETN對(duì)血清脂質(zhì)代謝可能有較廣泛的影響，很可能是脂代謝紊亂的一個(gè)早期標(biāo)志性因子，但其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。RETN作為一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞分泌性細(xì)胞因子，不僅與肥胖、Ⅱ型糖尿病和炎癥有關(guān)，與脂肪代謝也有密切關(guān)系，有可能為改善人類脂類代謝研究提供新的途徑，對(duì)人類高脂血癥的研究具有一定的意義。

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