胃癌腹膜轉移中survivin的表達及意義

殷 舞，韋海明，莫祥蘭，鐘曉剛

(廣西壯族自治區人民醫院，南寧530021)

進展期胃癌根治術后易發生腹膜轉移，最終導致癌性腹水、腸道梗阻、惡病質，成為胃癌死亡的主要原因。對于胃癌腹膜轉移，尤其是腹膜亞臨床轉移的早期預測與及時阻斷是當前胃癌治療領域的研究熱點［1］，而關于胃癌腹膜種植轉移的機制尚無定論，多數學者傾向于“種子—土壤”學說。但是，正常上皮細胞和不具備轉移特性的實體瘤細胞進入體腔后會因失去基質的支持而發生失巢凋亡［2］。然而，發生轉移的胃癌“種子”從瘤體上脫落后并不發生凋亡，而是遷徙到腹膜繼續生長。因此，可推斷這些發生腹膜轉移的癌細胞具有獨特的抗凋亡能力。survivin基因是凋亡抑制因子(IAP)家族中的主要成員，一直受到研究者的關注。文獻報道survivin蛋白表達可發生在胃腺體惡性轉化的早期和進展期［3］，而關于survivin在胃癌腹膜轉移中作用的研究在國內外仍較少，本課題對此進行初步研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 48例進展期胃癌組織均來自2008年1月～2010年12月廣西壯族自治區人民醫院外科手術標本，其中伴腹膜轉移胃癌標本24例。隨機選取同期進展期胃癌根治標本24例作為對照組。年齡30～84歲、平均55歲，其中男36例、女12例。胃癌伴腹膜轉移組24例中22例接受外科手術切除，術后病理均存在淋巴結和腹膜轉移;2例僅腹腔鏡腹膜活檢，淋巴結狀態無法評估。全部標本均經10%甲醛固定，普通石蠟包埋，5 μm連續切片。

1.2 survivin蛋白檢測方法 采用免疫組化SP法染色，操作步驟按說明書進行，DAB顯色，蘇木素復染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。用已知染色陽性的結腸癌組織切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。結果判定:癌細胞胞質內淺/棕黃色顆粒為survivin陽性信號，計分采用染色強度和陽性細胞百分率相結合的半定量分析的判斷標準［3］:a.染色強度:0分為陰性，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色;b.陽性細胞的百分率:＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。a和b的乘積作為表達強度的總分:0分為(－)，1～4分為(+)，5～8分為(++)，9～12分為(+++)。

1.3 統計學方法 實驗數據采用SPSS13.0統計軟件分析處理，列聯表資料采用χ2檢驗，多個相關樣本等級資料表達差異采用等級資料的秩和檢驗(Kruskal-WalliS H)，以P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 無腹膜轉移組胃癌原發灶、淋巴轉移灶survivin的表達 原發灶與淋巴轉移灶間survivin表達強度有差異，P=0.044。見表1。

表1 無腹膜轉移組胃癌原發灶、淋巴轉移灶survivin的表達［例(%)］

2.2 腹膜轉移組胃癌原發灶、淋巴轉移灶、腹膜轉移灶survivin的表達 原發灶與淋巴轉移灶比較組間survivin表達強度有差異，P=0.001;原發灶與腹膜轉移灶比較組間survivin表達強度有差異，P= 0.000;腹膜轉移灶與淋巴轉移灶比較組間survivin表達強度也有差異，P=0.035。見表2。

表2 腹膜轉移組胃癌原發灶、淋巴轉移灶、腹膜轉移灶survivin的表達［例(%)］

2.3 腹膜轉移組與無腹膜轉移組survivin的表達比較 腹膜轉移組與無腹膜轉移組胃癌原發灶比較survivin表達強度無差異，P=0.312;淋巴轉移灶比較survivin表達強度也無差異，P=0.423;腹膜轉移灶中survivin表達強度高于無腹膜轉移組的原發灶及淋巴轉移灶，P=0.000及0.013。見表3。

表3 腹膜轉移組與無腹膜轉移組survivin的表達比較［例(%)］

3 討論

隨著標準胃癌根治手術和圍手術期輔助放化療的開展，胃癌總體預后有一定程度的改善，然而進展期胃癌術后5年生存率仍僅有30%～40%。腹膜轉移在進展期胃癌發生率高，成為影響其預后的主要因素，針對胃癌腹膜轉移的機制研究一直是研究的焦點之一。隨著胃癌分子生物學研究的不斷深入，針對腫瘤浸潤、血管生成以及生物性癌變機制等靶點提出的分子靶向治療成為胃癌綜合治療的重點和熱點［4］。預測進展期胃癌的分子標志物候選者眾多，但迄今國內外的基礎研究尚未找到有效的早期預測進展期胃癌腹膜轉移的分子標志物，尚缺乏干預的關鍵分子靶點。近年的研究認為，胃癌腹膜轉移是一個多階段、序貫的復雜過程。Tanaka等［5］證實，胃癌的腹膜轉移與血行轉移和淋巴轉移機理不同，眾多研究對細胞黏附、血管生成等進行探討，但失巢凋亡機制在其中的作用尚缺乏深入研究。

失巢凋亡是由于與細胞外基質和其他細胞失去接觸而誘導的一種程序化細胞死亡形式。survivin作為迄今發現的最強的凋亡抑制因子之一，與IAP家族其他成員一樣，其對凋亡的抑制作用較明確，也參與失巢凋亡過程［6］。survivin是caspase抑制劑，同時也通過調節細胞周期、細胞分離和信號傳導抑制細胞死亡。survivin在分化成熟的正常組織中很少表達，而在腫瘤組織中過表達，且與腫瘤進展相關，預示更差的預后。Yao等［7］用免疫組化技術檢測survivn在胃腺癌中的表達，結果顯示胃癌原發灶、淋巴結轉移灶及正常腺體基底生發層細胞的survivn陽性率分別為49.17%、64.00%和17.50%，survivin的表達與腫瘤病理分型、分化程度及淋巴結轉移有關，其在胃癌組織中的表達呈一漸進的過程。李平等［8］研究顯示，胃癌組織中survivin陽性率為53.85%，且臨床分期越晚其表達越高，在伴有淋巴結轉移的胃癌組織中survivin陽性率顯著高于無淋巴結轉移的病例。

本研究發現伴腹膜轉移的進展期胃癌組織中，淋巴轉移灶與原發灶之間survivin表達有差異，隨著腫瘤進展胃癌出現腹膜轉移，腹膜轉移灶中survivin表達強度逐漸增高，明顯高于淋巴轉移灶中的表達強度，表明survivin在胃癌腹膜轉移過程中發揮特殊作用。在伴或不伴腹膜轉移的兩組胃癌病例中，其原發灶間及淋巴轉移灶間survivin表達強度均無差異，但在腹膜轉移灶中其表達強度卻明顯高于兩組的原發灶和淋巴轉移灶。上述結果表明腹膜轉移灶中survivin表達增強可能在于高表達survivin的亞群癌細胞更易發生轉移，或轉移的腫瘤細胞在轉移部位因為survivin表達上調抑制失巢凋亡而得以存活，成為腹膜轉移灶。survivin在腹膜轉移灶中高強度表達預示其可能在胃癌腹膜轉移中發揮特殊的作用。有研究表明誘導survivin表達升高，可調節生理性或病理性的血管形成，與依賴于新生血管形成的腫瘤細胞生長、浸潤、轉移密切相關［9，10］。Wang等［11］以survivin為靶基因，以RT-PCR方法檢測腹膜沖洗液的癌細胞來確定有無腹膜轉移，結果顯示在所有良性腫瘤的腹膜沖洗液中均未檢測到survivin的mRNA，但在48例胃癌并淋巴結轉移的病例中有28例檢測到survivin的表達，其表達與癌的浸潤深度、淋巴結轉移和TNM分期相關，在92%的腹膜轉移病例中檢測到survivin的表達。因此survivin相關通路在胃癌腹膜轉移中可能發揮特殊作用，與本研究結論相似。

惡性腫瘤在增殖演進過程中不斷變異，造成該腫瘤內瘤細胞亞群表型的多樣性，即所謂異質性。與胃癌腹膜轉移直接相關的是癌細胞的轉移潛能，具有高轉移潛能的癌細胞容易發生轉移。survivin基因在腫瘤細胞內廣泛而特異的表達，為腫瘤的基因治療提供新的靶向物［12］，而本研究進一步表明，survivin在胃癌腹膜轉移中也起關鍵作用，針對這一分子靶點設計治療，可望有效控制胃癌腹膜轉移，改善患者預后。但對于survivin在胃癌腹膜轉移灶中高表達的機制，以及如何有效阻斷相關分子通路干預腹膜轉移的發生和進展，有待深入研究。

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