我國商業化SPF級小鼠病原體污染分析

葛文平，張 旭，高 翔，劉 寧，張海濤，張曉娟

（中國醫學科學院，北京協和醫學院，醫學實驗動物研究所，衛生部人類疾病比較醫學重點實驗室，國家中醫藥管理局人類疾病動物模型三級實驗室，北京 100021）

小鼠是現代醫學研究和生命科學研究最常用的模式動物之一，其微生物質量會直接影響實驗結果的準確性，而判斷微生物質量的基礎是對其攜帶的微生物和寄生蟲進行定期檢測，根據檢測結果監督、改進、提高動物的飼養管理水平。ICR、KM、C57BL、BALB/c和 BALB/c-nu是我國目前需求量最大的幾種小鼠品系，本文對五家實驗動物生產單位生產的 ICR、KM、C57BL/6、BALB/c及 BALB/cnu等品系的無特殊病原體（SPF）小鼠進行隨機抽檢。按現行國標《實驗動物微生物學檢測方法》［1］和《實驗動物寄生蟲學檢測方法》［2］進行檢測，鑒定抽檢小鼠所攜帶的微生物和寄生蟲情況，進而為實驗動物生產管理和質量評估提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

本實驗所檢測的實驗小鼠均購自具有《實驗動物生產許可證》的實驗動物生產單位。單位名稱以A、B、C、D、E為代碼，購入動物的許可［A：SCXK （京）2009-0007；B：SCXK（京）2006-0009；C：SCXK （京）2007-0005；D：SCXK（京）2008-0016；E：SCXK （京）2008-0002］。其中，KM小鼠購自（C、D）兩家生產單位；ICR小鼠品系購自（B、C、E）三家生產單位；C57BL/6購自（A、B、D、E）四家生產單位； BALB/c購自（A、B、D、E）四家生產單位；BALB/cnu購自（A、B、E）三家生產單位。每個生產單位，每種小鼠品系抽檢數量為10只。

1.2 檢測方法

按照《實驗動物微生物學檢測方法》（GB/T 14926.1。14926.64.2001）和《實驗動物寄生蟲學檢測方法》（GB/T 18448.1～18448.10.2001），對所得到的樣本進行微生物和寄生蟲檢測。按照《實驗動物微生物學等級及監測》（GB 14922.2-2001）和《實驗動物寄生蟲學等級及監測》（GB 14922.1-2001），對檢測結果進行綜合判定。檢測項目見表1。

2 結果

2.1 細菌檢測結果

按方法1.2對來自5個不同生產單位的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu，小鼠進行了細菌檢測，檢測結果見表2。以肺炎克雷伯桿菌感染的比例最高。金黃金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌亦見感染。

表1 微生物和寄生蟲檢測項目Tab.1 List of bacteria，virus and parasites

表2 細菌檢測結果Tab.2 Results of bacteria detection

2.2 病毒檢測結果

按方法1.2對來自5個不同生產單位的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu，小鼠進行了病毒檢測，檢測結果見表3。以Reo-3、PVM、POLY和SV感染率較高，MHV和MVM亦見感染。

2.3 病毒檢測結果

按方法1.2對來自5個不同生產單位的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu小鼠進行了寄生蟲檢測，檢測結果見表4。

3 討論

根據我國國家標準，在抽檢的5個生產單位的商 品 化 SPF 水 平 的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu小鼠中，病毒方面主要是呼腸孤病毒Ⅲ型（Reo-3），小鼠肺炎病毒（PVM），多瘤病毒（POLY）；細菌方面主要是肺炎克雷伯桿菌金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌，總陽性率見表5。

表3 病毒檢測結果Tab.3 Results of virus detection

表4 寄生蟲檢測結果Tab.4 Results of parasite detection

表5 攜帶病原微生物的陽性率Tab.5 Positive ratios of pathogenic microorganisms

一些國家的SPF級小鼠不排除綠膿桿菌，一是綠膿桿菌不易排除，二是綠膿桿菌為條件致病菌，對實驗研究危害相對較小［3-5］。

在病毒性病原中，呼腸孤病毒Ⅲ型（Reo-3）感染的陽性率最高，在許多脊椎動物體內可分離獲得呼腸孤病毒，包括馬、牛、豬、綿羊、豚鼠、犬、貓、貂、禽類、蝙蝠以及人、黑猩猩和猴。除了感染嚙齒動物和禽類之外，一般不引起明顯的疾病，特別是對成年動物。呼腸孤病毒與動物和人類某些呼吸道及消化道疾病的發生有關［6］。

PVM屬于副黏液病毒屬（paramyxoviridae）的肺病毒（pneumovirus），其天然宿主是小鼠、大鼠和倉鼠。常見小鼠感染會引起慢性鼻炎和間質性肺炎，通常不會產生明顯的臨床癥狀，而多呈潛伏性感染［6］。

小鼠肝炎病毒MHV（mouse hepatitis viruc）可引起小鼠發生肝炎、腦炎和腸炎，一般呈亞臨床感染或慢性感染，而機體抵抗力低時可引起急性發病死亡，導致實驗失敗。MHV可改變各種免疫應答參數，影響酶的活性，從而對實驗產生嚴重的干擾［6］。克雷伯桿菌肺炎是由于一種常見的病原菌叫克雷伯菌引起的肺部炎癥，存在于正常人的腸道和呼吸道，亦存在于水和谷物中。在免疫低下以及接受手術和侵襲性醫源性操作的人群易患本屬細菌感染，實驗動物操作人員可能會將克雷伯桿菌傳給小鼠，從而造成小鼠的感染，免疫缺陷動物尤其敏感［7-10］。

小鼠體外寄生蟲常見的有螨、蚤、虱等。小鼠飼養環境與外界施行隔離控制，使得需在宿主體外完成部分生活史的虱、蚤的感染機會大大減少，而螨成為最主要的體外寄生蟲。患鼠因寄生蟲種類的不同而癥狀不同，一般可出現被毛粗亂、煩躁不安、消瘦、發育遲緩、種鼠生產能力下降、仔鼠成活率低等癥狀，感染嚴重部位可脫毛、結痂、瘙癢、潰瘍或發生皮炎，影響實驗結果。

通過檢測，目前SPF級小鼠的微生物質量具有不穩定性，有一些國標中規定需要排除的病原體，這些病原體對藥物評價、疫苗研制和免疫學研究的影響尤其嚴重。以上病原體均可通過移卵或剖腹產予以凈化。

［1］GB 14922.2 2001，中華人民共和國國家標準—— 實驗動物微生物學等級及監測［S］.北京：中國標準出版社，2001.

［2］GB 14922.1 2001，中華人民共和國國家標準——實驗動物寄生蟲學等級及監測［S］.北京：中國標準出版社，2001.

［3］Taconic Health Standards.http：//www.taconic.com/wmspage.cfm?parm1=265

［4］List of agentsmonitored and policy for communication of changes in health status.The Jackson Laboratory.http：//jaxmice.jax.org/health/agents_list.htm l

［5］Routine Health Monitoring of Isolator-Reared VAF/Elite? Animals. http：//www. criver. com/en-US/TrainEducation/ health/Pages/home.aspx

［6］殷震，劉景華.動物病毒學［M］.北京：科學出版社，1985

［7］Bleich A，Kirsch P，Sahly H，Fahey J，Smoczek A，Hedrich HJ，Sundberg JP，2008.Keebsiella oxytoca： opportunistic infections in laboratory rodent［J］.Lab Anim 42：369-375.

［8］Fox JG，Anderson LC，Lowe FM，Quimby FW，editors.Laboratory Animal Medicine.2nded［M］.San Diego：Academic PRESS：2002.1325 pp.

［9］Fox J，Barthold S，Daviss M，Newcomer C，Quimby F，and Smith A editors.The Mouse in Biomedical Research：Diseases： 2nded［M］.New York：Academic Press：2007.756 pp

［10］MacArthur CJ，Pillers DA，Pang J，Degagne JM，Kempton JB，Trune DR.2008.Gram-negative pathogen K lebsiella oxytoca is associated with spontaneous chronic otitis media in Toll-like receptor 4-deficient C3H/HeJ mice［J］.Acta-to-laryngologica 128：132-138.

［11］Percy DH，Barthold SW.pathology of Laboratory Rodents and Rabbits［J］.Ames：Lowa State University Press；2007.325 pp.