大鼠再生障礙性貧血模型制備

額爾敦都楞，布仁巴圖，巴圖德力根，韓志強，金 花，娜仁其其格，莫日根畢力格

(內蒙古民族大學附屬醫院，通遼 028007)

AA)是一種獲得性骨髓造血功能障礙性疾病，本病發生與骨髓造血干細胞損傷、造血微環境缺陷、免疫性造血抑制及遺傳傾向等多種因素有關［1］。我們為了篩選治療藥物，建立復制周期短，穩定，成功率高的AA模型，綜合了文獻方法［2-3］。對照射 + Cy+CH復合法干預劑量、干預時間進行了對比研究獲得了與人類病理改變相似，重復性好的AA大鼠模型。報道如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 化學試劑：環磷酰胺(cyclophosphamide)由山西普德藥業有限公司生產，批號2009 0901。氯霉素(chloramphenicol injection)由天津藥業焦作有限公司生產，批號：05022821。

1.1.2 實驗儀器：BJ-6B-X直線加速器(北京醫療器械公司)，XT2000i全自動血液分析儀(日本Sysmex公司)，COVER-015顯微鏡(日本 Olympus公司)。

1.1.3 實驗動物：Wistar大鼠，雌性，體重180g～220g，吉林大學基礎醫學院動物實驗中心提供，生產許可證號：SCXK(吉)2007-0003。

1.2 實驗方法

1.2.1 造模方法：將44只Wistar雌性大鼠禁食不禁水12h后按體重隨機分為對照組、模型A組(A組)、模型B組(B組)等3組。其中對照組8只，A組和B組各18只。造模第1天，A組以直線加速器照射劑量率為240cGy/min，SSD=100cm，全身照射1.2min，分別于第4、6、8天腹腔注射環磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次。B組參照文獻方法［2-3］，于造模第1天以直線加速器照射劑量率 300cGy/min，SSD=100cm，全身照射 1.2m in，第4天、5天、6天腹腔注射環磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次。對照組第1天鉛磚屏蔽假照射。在造模期間觀察大鼠進食量、進水量、毛發光澤、出血點及死亡等一般狀況。于造模第9天、12天、15天，A組、B組各隨機抽取6只，腹主動脈采血檢測白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血小板(PLT)、血紅蛋白(HGB)、網織紅細胞計數(Ret #)，取股骨做骨髓活檢。

1.2.2 再障模型判斷標準：外周血三系細胞減少，RET減少，骨髓活檢示骨髓增生或減低(造血細胞容量40%)，非造血細胞(脂肪細胞)增多，脾臟萎縮或不明顯改變，可判定為AA模型［2，4］。

1.2.3 統計學方法：本實驗數據采用SPSS 17.0統計軟件進行分析處理，數據以±s表示，采用 F檢驗。

2 結果

2.1 一般體征

與空白對照組相比，模型組大鼠自6d起陸續出現皮毛松弛蓬亂，光澤度降低，部分大鼠有脫毛及皮損。消瘦、攝食減少、精神不佳，唇色眼瞼蒼白、活動減少，足底、鼻部出現瘀斑等癥狀。以上表現B組比A組嚴重。于造模第11天B組出現2只大鼠死亡。

2.2 骨髓活檢

模型組與對照組比較，再障模型骨髓脂肪細胞增多，骨髓有核細胞增生減低，紅細胞系、粒細胞系明顯減少，無巨核細胞，網狀細胞等非造血細胞易見(圖1～4，見彩插2)。

2.3 模型外周血象變化

從表1可見，于造模第9天與對照組比較A組、B組 WBC、RBC、PLT、HGB、RET均明顯降低，差異有顯著性(P＜0.05)。于造模第15天，A組RBC、HGB值繼續下降，WBC、PLT、RET值回升，與對照組比較降低，差異有顯著性(P＜0.05)；B組WBC、RBC、HGB、PLT值有顯著回升，與對照組比較降低，差異有顯著性(P＜0.05)，RET值與對照組比較升高，差異有顯著性(P＜0.05)。

表1 各組外周血象變化的比較 (±s，n=6)Tab.1 Comparison of peripheral blood picture in the three groups(±s，n=6)

表1 各組外周血象變化的比較 (±s，n=6)Tab.1 Comparison of peripheral blood picture in the three groups(±s，n=6)

注：與對照組比較，1)P＜0.01；A組與B組比較，2)P＜0.05、3)P＜0.01。Note：Compared with the control group，1)P＜0.01，Compared between groups A and B，2)P＜0.05、3)P＜0.01。

組別Groups天Days白細胞WBC 109/L紅細胞RBC 1012/L血紅蛋白HGB g/L血小板PLT 109/L網織紅細胞計數RET#109/L對照組Control 8.58±0.92 7.96±0.29 142.8±4.12 903.4±25.6 256.5±85.5A組 9 0.18±0.0261) 6.40±0.301) 120.5±9.481) 104.5±11.71) 5.63±1.591) B組 9 0.082±0.031)3) 6.63±0.221) 122.67±2.751) 130.3±2.981)3) 9.6±1.011)3) A組 12 0.25±0.0691) 5.58±0.381) 109.3±5.931) 24.3±4.611) 39.67±9.781) B組 12 1.07±0.321)3) 5.93±0.251)3) 106.7±6.991)3) 88.5±20.81)3) 76.3±11.91)3) A組 15 1.82±0.16 5.23±0.361) 94.1±7.921) 458.7±32.41) 167.6±22.01) B組 15 2.31±0.391)2) 6.12±0.491)3) 119.7±7.611)3) 563.2±30.61)3) 602.5±40.91)3)

3 討論

再生障礙性貧血是由苯及其衍生物、有機磷農藥、氯霉素、抗腫瘤藥等化學物品、藥物和輻射，生物因素造成的骨髓造血功能衰退，導致紅細胞、白細胞和血小板等全血細胞減少引起的一組綜合征。復合法建立的再障動物模型病理與人類病理改變相似，且有方法簡便、成功率高的優點，適合治療藥物的篩選。復合法主要采用放射線、Cy、CH共同作用引起造血細胞損傷，抑制骨髓細胞的再生，導致骨髓造血功能的衰竭。由于以上因素的干預劑量、方法、時間的不同模型誘發的成功率、再障期的穩定性、造模的周期、死亡率都有不同。通過對比研究表明，采用直線加速器照射劑量率為 240cGy/m in，SSD=100cm，全身照射1.2m in，于第4天開始隔日腹腔注射環磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次的造模方法與采用直線加速器照射劑量率300cGy/min，SSD=100cm，全身照射1.2m in，于第4天開始連續腹腔注射環磷酰胺 35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次的造模方法比較，后者于造模第9天WBC和RET急劇下降，自第12天起快速回升，特別是RET值到第15天時已超過對照組的2.5倍。表明該造模方法缺乏穩定性。前者自第9天至第15天各項指標相對穩定，且無死亡。認為直線加速器照射劑量率為240cGy/min，SSD=100cm，全身照射1.2m in，于第4天開始隔日腹腔注射環磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次的造模方法具有復制周期短、成功率高、重復性好的優點。適合用于治療藥物研究的實驗。

［1］王永才.最新血液骨髓細胞診斷學教學醫用多媒體圖譜［M］.人民軍醫出版社，2007：218.

［2］孫紀元，王四旺，謝艷華，等.再生障礙性貧血的動物模型實驗研究［J］.中國實驗動物學雜志，2000，10：210.

［3］陳慧莉，李建華，王海霞，等.愈障湯對再生障礙性貧血大鼠骨髓細胞超微結構的影響 ［J］.濰坊醫學院學報，2007，29：487.

［4］張之南，沈悌.血液病診斷及療效標準第三版［S］.科學出版社，2007：8：19-20.