丙肝抗體假陽性檢測中ELISA法應用

鄭煤集團總醫院，河南鄭州 452371

丙型肝炎（HepatitisC，簡稱丙肝）是有丙型肝炎病毒（HCV）引起的危害廣大人群肝臟健康的一種傳染性疾病，目前臨床上把檢測患者血清丙肝抗體（HCV-Ab）做為診斷丙肝的主要依據，酶聯免疫吸附法（ELISA）因其靈敏度高、特異性強，是進行HCV-Ab的主要檢測方法之一[1]，但實驗室在應用 ELISA法檢測丙肝抗體有許多因素可能會導致假陽性的結果[1]。為此本文就回顧性統計分析了鄭煤集團總醫院 36例用 ELISA方法檢測的HCV-Ab弱陽性血清標本，再采用聚合酶鏈反應（PCR）方法將ELISA方法檢測的HCV-Ab檢測HCV-RNA進行確證試驗復檢的結果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料36例血清標本均來自2011年1月至2012年1月鄭煤集團總醫院門診和住院患者。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑HCV-RNA使用美國ABI7500實時熒光定量PCR擴增儀，測定試劑由上?？迫A生物技術有限公司提供；HCV-Ab使用北京普朗新技術公司酶免儀以及配套洗板機，試劑由上海科華生物技術有限公司提供。

1.2.2 檢測方法抽取患者空腹靜脈血3～5ml，離心分離血清后 1～2h內先用 ELISA方法檢測的HCV-Ab，篩查出采用同種方法檢測 3次仍為弱陽性的血清標本，再用聚合酶鏈反應法將ELISA方法檢測的HCV-Ab檢測HCV-RNA加以證實。

1.2.3 質控所有試劑均在有效期內，全部儀器、設備運行狀況良好，每日質控結果、每批測定陰陽對照均在可信范圍，HCV-Ab每次參加河南省臨檢中心質控合格。

2 結果

36例用ELISA方法檢測的HCV-Ab弱陽性血清標本，再采用聚合酶鏈反應(PCR)方法檢測HCV-RNA進行確證試驗復檢的結果顯示28例仍為陽性，8例陰性，表明以PCR檢測HCV-RNA方法為準，ELISA法有77.8%的真陽性率，有22.2%的假陽性率。

3 討論

目前，確定和臨床廣泛應用的 HCV感染診斷方法有兩大類：檢測患者血清 HCV-Ab和HCV-RNA，雖然最近也發展了丙肝抗原（HCV-Ag）檢測技術，但尚未得到廣泛應用。對血清（或血漿）HCV-RNA的檢測是目前唯一直接揭示存在的使用方法，但PCR也存在著技術復雜，要求特殊設備、費用高等缺點，難以在基層醫院推廣應用。血清HCV-Ab的檢測主要有膠體金（GICA）和酶聯免疫吸附（ELISA）方法，GICA法雖然快捷、方便，但存在靈敏度低，重復性差，不能提供準確的確定界限值的標準品，不能進行質控工作等缺點，僅可以做為初步篩查試驗[3]，而ELISA法具有較高靈敏度、特異性強、可進行定量和半定量測定等優點成為檢測HCV感染的主要方法。

導致ELISA法檢測血清HCV-Ab出現假陽性的原因多數報道認為[4]易受加樣、反應溫度、反應時間、洗滌徹底性等諸多因素的影響，根據工作體會認為以下幾個方面是出現假陽性主要因素：標本溶血、被細菌污染、貯存時間過長和標本凝固不全等標本處理問題；試劑盒的抗原不純、采用多克隆抗體和酶結合物純度低等試劑盒本身問題；加樣時間過長造成加樣后放入恒溫箱前等待時間過長，加樣后孔壁上貼有微小血塊加樣等問題；洗板針堵塞，抽吸不完全，洗液量不足，洗板次數少等問題?？傊绊慐LISA法檢測血清HCV-Ab出現假陽性因素除了方法學、試劑盒本身之外，還有標本處理、操作不當等多種因素。因此，檢驗人員在工作中應嚴格按照操作步驟進行操作，認真對待每一份標本，一定要做好檢驗前、檢驗中、檢驗后質控，盡可能降低人為因素造成的假陽性，對可疑的假陽性的標本一定要認真復測，盡可能用兩種以上不同廠家試劑盒進行復檢，最好采用PCR檢測HCV-RNA進行確證。

[1]洪秀華.臨床微生物學檢驗[M].1版,北京:中國醫藥科技出版社,2004:385.

[2]張志梅.ELISA法檢測丙肝抗體出現假陽性的分析[J].中國社區醫師,2009,11(24):187.

[3]王鵬,任美英,王樹平.應用金標法檢測抗-HCV 假陰性和假陽性的結果分析[J].實用醫技雜志,2007,14(02):172-173.

[4]鄭嵐,蔣黎敏,方嫻靜,等.HBsAg,HCV 抗體和 HIV-1/2抗體膠體金檢測法在急診手術前的應用[J].現代檢驗醫學雜志,2010,25(04):115-116.