寧心解郁膠囊質量標準的研究

孔慧，郝麗靜，邢紅霞，吳黃焱，倪健*

(1.北京中醫藥大學中藥學院，北京100102;2.河北大學，河北保定071000;3.曲阜市中醫醫院，山東曲阜273100)

寧心解郁膠囊為北京中醫藥大學東直門醫院主持研發的中藥第五類新藥，由萱草花(百合科植物萱草Heirieroe-allis fulvaL.或黃花菜Hemerocallis citriaBaroni的干燥花蕾)提取精制而成，具有寧心解郁［1］的功效，主要用于治療抑郁癥。據報道萱草花化學成分復雜［2-3］，主要含黃酮類成分［4-6］，本試驗對制劑中的萱草花進行了薄層色譜鑒別［7］;定量測定研究用紫外分光光度法［8-9］測定制劑中總黃酮，用HPLC法［10］測定制劑中蘆丁，為該制劑的質量標準制定提供實驗依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器TU—1810紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司);SD—20島津液相色譜儀(日本)，四元泵(LC—20ATvp)，SPD—M20A二極管陣列檢測器，LC—液相色譜工作站。Sartorius電子分析天平(BT 125D)。KQ3200DE型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料寧心解郁膠囊樣品由北京中醫藥大學制備;蘆丁對照品購自中國食品藥品檢定研究院(100080-200707)。甲醇為色譜純(Fisher公司);水為屈臣氏純凈水;其他試劑均為分析純。

2 鑒別

萱草花的鑒別取本品膠囊內容物約0.5 g，用適量30%乙醇超聲溶解，離心取上清液，作為供試品溶液。另取蘆丁標準品，加甲醇制成1 mg/mL溶液，作為蘆丁對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述溶液各10 μL，分別點于同一聚酰胺板上，以甲醇-水(1∶1)為展開劑，展開，取出，噴1%三氯化鋁展開劑顯色，置紫外光燈(365 nm)下檢視。檢測色譜中，供試品在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。結果見圖1。

圖1 萱草花的鑒別圖譜

3 定量測定［11-13］

3.1 紫外分光光度法測定總黃酮

3.1.1 測定波長的選擇蘆丁標準溶液和萱草花提取液分別按實驗方法顯色后，在波長400～600 nm范圍內掃描，結果蘆丁標準溶液顯色后在510 nm處有最大吸收，萱草花提取液顯色后在此波長下也有吸收，實驗選用510 nm為測定波長。

3.1.2 供試品溶液的制備精密稱取本品粉末20 mg，置10 mL量瓶中，加30%乙醇至刻度，超聲處理10 min，即得。

3.1.3 對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，搖勻，即得。

3.1.4 標準曲線的制備參照郝麗靜等［14］在測定萱草花總黃酮時制備標準曲線的方法進行制備。

3.1.5 測定方法取供試品溶液1 mL，置25 mL量瓶中，按照標準曲線制備項下的方法，測定吸光度，用標準曲線計算供試品溶液中含蘆丁的質量濃度，即得。

3.1.6 方法學考察結果穩定性試驗:結果顯示樣品溶液在1 h內穩定性良好，RSD值＜2.0%。精密度試驗(n=6)、重復性試驗(n=6)和加樣回收率試驗(n=6)的結果顯示:RSD值均＜2.0%，符合方法學考察的要求，加樣回收率平均值為101.28%，在95%～105%之間，符合要求。

3.2 HPLC法測定蘆丁

3.2.1 色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-0.5%冰醋酸溶液(40∶60)為流動相;檢測波長為254 nm。理論塔板數按蘆丁峰計算應不低于3 000。

3.2.2 對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，搖勻，即得。

3.2.3 供試品溶液的制備精密稱取本品粉末20 mg，置10 mL量瓶中，加30%乙醇至刻度，超聲10 min，0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

3.2.4 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，既得。

3.2.5 專屬性試驗取制劑輔料糊精10 mg，置10 mL量瓶中，加30%乙醇至刻度，超聲10 min，0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得陰性樣品溶液。進樣10 μL，按以上色譜條件測定，結果無干擾峰出現。見圖2。

圖2 HPLC色譜圖

3.2.6 線性關系的考察精密吸取質量濃度為0.383 0 mg/mL的蘆丁對照品0、1、3、5、7、9、11 μL，分別注入高效液相色譜儀，測得峰面積。以進樣量(μg)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，計算回歸方程。回歸方程為Y=2×106X－34 857，r=1。結果表明蘆丁進樣量在0～4.213 0 μg與峰面積具有良好的線性關系。

3.2.7 精密度試驗取樣品溶液10 μL，按以上色譜條件連續進樣6次，測定峰面積，結果RSD為0.74%。

3.2.8 穩定性試驗每隔2 h進樣1針，結果顯示，供試品溶液在10 h內穩定性良好。RSD值為0.32%。

3.2.9 重復性試驗按樣品定量測定項下的方法對批號20110530的樣品進行測定，共測定6份，結果平均質量分數為18.60%，RSD值為1.64%。

3.2.10 加樣回收率試驗精密稱取樣品(批號20110530，蘆丁質量分數18.60%)10 mg，共測定6份，置10 mL量瓶中，加入0.383 0 mg/m L的蘆丁對照品溶液4 mL，按樣品方法制備供試品溶液，測定含有量，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率結果

3.3 樣品測定精密稱取3批樣品，分別按供試品溶液的制備方法制備，分別按以上紫外分光光度法和高效液相色譜法測定，分別代入相應的標準曲線計算質量分數，結果見表2。

表2 樣品測定結果

4 討論

4.1 HPLC測定波長的選擇分別取蘆丁對照品和樣品溶液進液相，DAD檢測器檢測，蘆丁的光譜圖顯示在254 nm和365 nm有兩個大的吸收峰，但是樣品在254 nm檢測出的峰個數較多，故選擇254 nm作為測定波長。

4.2 色譜柱的選擇采用Agilent ZORBAX SB-C18，Diamonsil ODS-C18色譜柱(均為416 mm×250 mm，5 μm)2種色譜柱對樣品進行測定，流動相為甲醇-0.5%冰醋酸水(40∶60)。結果不同廠家色譜柱對測定結果影響不大。

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