非小細胞肺癌組織中PEDF、VEGFR-2的表達*

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非小細胞肺癌組織中PEDF、VEGFR-2的表達*

網絡出版時間：2015-03-19網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150319.0939.009.html

王世君， 黃莉， 謝婷婷， 夏曙華**

(貴陽醫學院附院 臨檢科， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 檢測非小細胞肺癌(NSCLC)組織標本中色素上皮衍生因子(PEDF)、血管內皮生長因子受體(VEGFR-2)的表達，探討PEDF在NSCLC血管新生中的作用及其與VEGFR-2之間關系。方法： 應用免疫組織化學法檢測28例NSCLC患者癌組織和遠離癌組織的對照組織中PEDF和VEGFR-2的表達；通過標記CD34計數微血管密度(MVD)，比較癌組織中PEDF和VEGFR-2陰陽性表達時血管新生情況。結果： 癌組織中PEDF和VEGFR-2表達陽性率分別為71.43%、64.29%，與對照組織不表達相比，差異有統計學意義(P<0.05)；PEDF和VEGFR-2的共表達率在癌組織和對照組織中分別為39.29%、0%，差異有統計學意義(P<0.01)；癌組織MVD(29.30±3.80)低于對照組織(98.86±18.87)，差異有統計學意義(P<0.05)；癌組織中PEDF陽性表達的MVD顯著低于陰性表達的MVD，VEGFR-2陽性表達的MVD顯著高于其陰性表達的MVD，差異均有統計學意義(P<0.05)。結論： NSCLC細胞PEDF和VEGFR-2陽性表達百分率高；PEDF陽性表達和VEGFR-2的陰性表達可能與組織MVD有關。

[關鍵詞]癌,非小細胞肺； 色素上皮衍生因子； 血管內皮生長因子受體-2； 新生血管化,病理性； 免疫組織化學

色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor，PEDF)是一種重要的內源性血管生成抑制因子，在同一環境下PEDF和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF)的表達呈負相關，PEDF可通過血管內皮生長因子受體1(vascular endothelial growth factor receptor-1， VEGFR-1)有效抑制VEGF誘導的血管生成[1-5]。而VEGF主要通過與血管內皮生長因子受體2(vascular endothelial growth factor receptor-2， VEGFR-2)結合，調節血管內皮細胞相關反應[1-4]。多種實體腫瘤的生長和轉移依賴于血管新生，而腫瘤在其生長、演進過程中又分泌促血管生成的相關因子,誘導血管新生。目前多采用微血管密度(microvessel density，MVD)作為血管新生觀察指標。本研究選取28例非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者的癌組織與遠離癌組織的自身對照組織，采用免疫組織化學方法檢測PEDF與VEGFR-2的表達，探討PEDF在NSCLC血管新生中的作用及其與VEGFR-2之間的關系，報告如下。

1材料和方法

1.1　材料

1.1.1標本臨床病理學確診為原發性NSCLC患者28例，經手術切除獲得NSCLC標本，自身對照組織取材于同一病例距離癌組織4 cm以上的遠端組織。

1.1.2試劑兔抗人PEDF多克隆抗體和兔抗人VEGFR-2多克隆抗體購于武漢博士德生物工程有限公司，鼠抗人CD34單克隆抗體購于北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2　方法

1.2.1染色應用免疫組織化學染色法測定PEDF、VEGFR-2及CD34表達，通過CD34檢測反映微血管密度MVD，陽性對照及陰性對照均由廠家提供，嚴格按照試劑盒說明進行操作。

1.2.2評分標準PEDF的陽性表達主要定位于腫瘤細胞胞漿內。VEGFR-2主要定位于腫瘤細胞的胞漿及胞膜。陽性細胞胞漿染成棕黃色，結合著色程度和陽性著色范圍進行評分，將未著色、淺黃色、黃棕色、深棕色分別定義為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級。在10×40倍視野下，每張切片至少觀察5個視野的陽性細胞，計數不同染色級別細胞數， 0或Ⅰ級陽性細胞計數<25%，為陰性(-)；Ⅰ級及以上陽性細胞數≥25%，為陽性(+)。CD34計數按照Weidner等方法并加以改進。

1.3　統計學方法

2結果

2.1　PEDF、VEGFR-2和CD34表達及MVD

PEDF、VEGFR-2在癌組織中的陽性表達分別為71.43%、64.29%，與對照組織中不表達比較，差異均有統計學意義(χ2為31.11、26.53，P<0.01)。CD34定位于血管內皮細胞胞漿中，癌組織中MVD平均計數(29.30±3.80)低于正常組織(98.86±18.87)，差異有統計學意義(t=7.08，P<0.05)。

2.2　癌組織中PEDF、VEGFR-2表達與MVD的關系

癌組織中PEDF陽性表達20例與陰性表達8例的平均MVD分別為26.29±8.92、36.83±9.91，差異有統計學意義(t=2.61，P<0.05)；癌組織中VEGFR-2陽性表達18例與陰性表達10例的平均MVD分別為33.41±9.96、21.90±5.75，差異有統計學意義(t=3.88，P<0.05)；PEDF和VEGFR-2共表達在癌組織和對照組織分別為39.29%和不表達，差異具有統計學意義(χ2=10.72，P<0.01)。 癌組織中，PEDF、VEGFR-2共表達與非共表達間的MVD分別為30.36±9.18，28.61±11.10，差異無統計學意義(t=0.45，P>0.05)。癌組織中，PEDF陽性表達的VEGFR-2陽性率為55%，陰性表達的VEGFR-2陽性率為87.5%，差異無統計學意義(P>0.05)。

3討論

本研究發現，NSCLC組織中PEDF陽性表達的癌組織中MVD低，而PEDF陰性表達的癌組織中MVD較高，提示PEDF的表達可能與NSCLC組織的MVD有關，這與Mahtabifard等報道PEDF通過降低MVD，可以明顯抑制原發性和轉移性肺癌的增長并延長小鼠的生存期的結果相一致。PEDF的抗血管生成作用是誘導內皮細胞凋亡。Vo1peR等研究表明，VEGF等血管生成誘導因子誘導產生的內皮細胞表達Fas受體，當被其配體Fasl激活時，即可啟動1種caspase依賴的細胞凋亡級聯反應，而VEGF等血管生成誘導因子對Fas受體表達的易受PEDF作用。現已證實VEGFR-2參與了大多數實體腫瘤的生長，如乳癌、神經膠質母細胞瘤等，是判斷這些腫瘤預后的獨立指標，提示VEGFR-2在腫瘤的血管生成方面起著重要作用。本研究發現，NSCLC組織中VEGFR-2陽性表達的癌組織中MVD高，而VEGFR-2陰性表達的癌組織中MVD較低，提示VEGFR-2的表達與NSCLC組織的MVD成正比。VEGFR-2在對照組織中呈低表達或不表達，而在癌組織中高表達，不僅表達于血管內皮細胞，還表達在腫瘤細胞。

本研究發現，VEGFR-2的陽性率在PEDF陰陽性表達間差異無統計學意義，而PEDF與VEGFR-2共表達的MVD與非共表達的MVD無顯著性差異，提示PEDF和VEGFR-2之間無直接關系。Crawford等[10]證明雪旺氏細胞和分化的神經母細胞瘤細胞分泌的PEDF可抑制由堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)或VEGF誘導的血管內皮細胞的移動，體外實驗結果表明PEDF能夠抑制VEGF誘導的內皮細胞移行，且具有劑量依賴現象，其活性比血管抑素、內皮抑素活性更高[11]，這可能是PEDF通過抑制VEGF誘導的內皮細胞移行來抑制NSCLC新血管的形成，具體機制還在進一步研究中。有學者指出PEDF抗血管生成的作用在一定程度上是通過與VEGFR-2的特異性結合而抑制VEGF實現的[12]，這與本研究中內皮抑素和PEDF可能不是通過減少VEGFR-2的表達來抑制血管新生的觀點相一致。

本實驗表明，NSCLC細胞中PEDF升高，VEGFR-2降低可能是抑制腫瘤血管新生的機制之一。

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(2014-12-20收稿，2015-02-05修回)

中文編輯： 吳昌學； 英文編輯： 趙毅

The Expression of PEDF and VEGFR-2 in Patients

with Non-small Cell Lung Cancer

WANG Shijun, HUANG Li, XIE Tingting, XIA Shuhua

(DepartmentofClinicalLaboratory,theAffiliatedHospitalofGuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective:To investigate the expression of pigment epithelium derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR-2) in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC), the function of PEDF in angiogenesis of non-small cell lung cancer and the relationship with VEGFR-2. Methods: The expressions of PEDF and VEGFR-2 were evaluated by immunohistochemical test in tumor tissues of 28 NSCLC patients and natural tissues. Comparing angiogenesis conditions of positive and negative expressions of PEDF and VEGFR-2 in cancer tissue by marking microvessel density (MVD) of CD34. Results: The positive rates of PEDF and VEGFR-2 were 71.43% and 64.29% respectively in tumor tissues, PEDF and VEGFR-2 didn't express in control group, there was statistical significance between the cancer group and control group(P<0.05); the synchronous expression rate of PEDF and VEGFR-2 in cancer group was markedly higher than that in natural tissue(39.29% and 0%), differences were statistically significant (P<0.01); MVD (29.30±3.80) in cancer group was lower than that of natural tissue group (98.86±18.87)，there was statistical significance(P<0.05); MVD in cancer tissue which positively expressed PEDF was remarkably lower than that of cancer tissue which negatively expressed PEDF, MVD in cancer tissue which positively expressed VEGFR-2 was remarkably higher than that of cancer tissue which negatively expressed VEGFR-2(P<0.05). Conclusions: The positive rate of PEDF and VEGFR-2 were high in NSCLC tissue, and there is a correlation of PEDF positive expression and VEGFR-2 negative expression with tissue MVD.

[Key words]carcinoma, non-small cell lung; pigment epithelium derived factor; vascular endothelial growth factor receptor 2; neovascularization, pathologic; immunohistochemistry

[中圖分類號]R734.2

[文獻標識碼]A

[文章編號]1000-2707(2015)03-0234-03

通信作者**E-mail:xsh523@126.com

[基金項目]*高等學校特色專業建設點[教高函(2010)15]；貴州省高等學校教改重點項目[黔教高發(2010)208]；貴陽醫學院科研基金(k2006-37)