鹽酸可樂定的含量測定方法研究進展

張榮發，楊宗發，江尚飛

(重慶醫藥高等?？茖W校，重慶 400030)

鹽酸可樂定又名氯壓定，具有降壓、鎮痛、止瀉等藥理作用，臨床上用于治療高血壓急癥、偏頭痛、絕經期潮熱、痛經、戒絕阿片癮毒癥狀以及糖尿病腹瀉等疾病。為了便于更深入地系統研究，現將鹽酸可樂定含量測定方法的研究進展作一綜述。

1 高效液相色譜(HPLC)法

HPLC法具有簡便、靈敏、快速、準確和重現性好等特點，已廣泛用于鹽酸可樂定復方制劑含量的測定和質量控制。

陳新善[1]采用HPLC法測定復方鹽酸多塞平膠囊中鹽酸可樂定的含量，結果鹽酸可樂定質量濃度在2～12 μg/mL(r=0.999 9)范圍內與峰面積呈良好線性關系，平均回收率為100.34%(RSD=1.63%)。鮑立曾等[2]采用 Kromasil ODS C18柱(250 mm × 4.6 mm， 5 μm)、流動相為乙腈 － 0.2% 磷酸溶液(8∶92)檢測波長為210 nm、流速為1.0 mL/min等色譜條件對鹽酸可樂定進行含量測定，結果鹽酸可樂定質量濃度在1.0～10 μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系(r=0.999，n=5)，平均回收率為 97.8% ， RSD 為 1.0%(n=9)。楊繼斌等[3]采用 Zorbax Extend C18分析柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，乙腈 －磷酸鹽緩沖液(15∶85)為流動相，流速為 1.0 mL/min，檢測波長為 210 nm，進樣量為20 μL，結果鹽酸可樂定的質量濃度線性范圍為2.0～12.0 μg/mL(r=0.999 9)，平均回收率為 99.2% 。許伯慧等[4]采用 Phenom enex fusion－RP 色譜柱(250 mm ×4.6 mm，4 μm)，流動相為甲醇 －水 －磷酸(25∶75∶0.08)，檢測波長為 220 nm，柱溫為25℃，流速為1 mL/min，結果鹽酸可樂定的質量濃度線性范圍為 75 ～1 500 ng/mL(r=0.999 9)，平均回收率為 99.2%。馬永貴等[5]采用 Hypersil C18色譜柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)，流動相為0.22%辛烷磺酸鈉 －甲醇 －磷酸(400∶600∶1，用 1 mol/L氫氧化鈉溶液或磷酸調 pH至3.0)，流速為 0.9 mL/min，檢測波長為220 nm，結果鹽酸可樂定的質量濃度線性范圍為1.37 ～ 6.85 μg/mL(r=1.000 0)，平均回收率為 100.5%(RSD=0.76%)。魯敏等[6]采用 C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)，流動相為乙腈 －0.2%磷酸(5∶95)，檢測波長為210 nm，結果鹽酸可樂定的質量濃度線性范圍為 7.132 ～142.64 ng(r2=1.000 0)，平均加樣回收率為 99.5% ，RSD 為 2.7%(n=9)。于文靜等[7]采用Kromonsil C18色譜柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流動相為 0.22%辛烷磺酸鈉溶液(用磷酸調節pH至2.7)－乙腈－甲醇(65∶19∶16)，檢測波長為215 nm，結果鹽酸可樂定線性范圍為0.016 4～0.328 μg(r=0.999 9，n=5)，平均加樣回收率為 99.0% ，RSD=1.38%。張建國等[8]采用 DiamonsilTMC18色譜柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，以0.01 mol/L磷酸二氫鈉溶液(pH=3)－甲醇 －乙腈(90∶2 ∶8)作為流動相，流速為 1.0 mL/min，檢測波長為 216 nm，結果鹽酸可樂定進樣量在0.03～0.15 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系，r=0.999 8，平均加樣回收率為 98.38% ，RSD=1.19%。許諳等[9]選用C18固相萃取小柱對樣品進行純化，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為0.22%辛烷磺酸鈉－甲醇－磷酸(450∶500∶1，用1 mol/L氫氧化鈉溶液調 pH至3.0)，檢測波長為220 nm，結果鹽酸可樂定質量濃度在1.03～6.18 mg/L范圍內與峰面積線性關系良好(r=0.999 2)，平均回收率為98.8%。

2 反相高效液相色譜(RP－HPLC)法

采用RP－HPLC法測定鹽酸可樂定的含量，具有簡便、快速、準確等優點。黃東慧[10]采用RP－HPLC法測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定含量，色譜柱為Kromasil－C8柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相為0.22%辛烷磺酸鈉溶液－甲醇－磷酸(540∶460∶1，用 1 mol/L氫氧化鈉溶液或磷酸調pH至3.0)，檢測波長為220 nm，外標法計算含量，結果鹽酸可樂定質量濃度在1.5～15.0 μg/mL 范圍內與峰面積呈良好線性關系(r=0.999 9)，平均加樣回收率為 99.58%，RSD=1.16%(n=6)。Ying－Qinwei等[11]對RP－HPLC法測定鹽酸可樂定含量的方法進行改進，不用液－液萃取法制備供試品溶液，而改用中性Al2O3層析柱對樣品精制后，再制備供試品溶液，也取得了較好的效果。結果鹽酸可樂定質量濃度在1.1 ～11.0 μg/mL 范圍內與峰面積呈良好線性關系(r=0.999 9)，平均加樣回收率為96.5% ～99.3%，RSD為2.1% ～4.8%。

3 高效液相色譜－電噴霧質譜聯用(HPLC－ESI/MS)法

HPLC－ESI/MS法具有樣品處理簡單、重現性好、選擇性好、抗干擾能力強、分析時間短、結果可靠等優點。盧亞玲等[12]采用Spherigel C18反相色譜柱，以0.005 mol/L甲酸銨緩沖鹽(pH為3.0)－乙腈－甲醇為流動相，梯度洗脫，質譜定性定量，對鹽酸可樂定進行測定，取得了較好效果。

4 毛細管電泳法

毛細管電泳法具有方法簡便、快速和重現性好等優點，可用于鹽酸可樂定的含量測定。蘇圣民等建立毛細管電泳法測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定的方法，在未涂層毛細管中，20℃，20 kV電壓條件下運行，壓力進樣50 kPa，5 s，檢測波長210 nm;結果鹽酸可樂定的線性范圍為10～100 μg/mL，日間與日內精密度 RSD小于15%，加樣回收率為94.96%[13]。高蘇亞等[14]建立了帶毛細管電泳法分離測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定含量的方法，采用未涂層石英毛細管柱(75 μm×53 cm，有效柱長45 cm)，以20 mmol/L硼砂－5 mmol/L磷酸二氫鈉(pH=9.0)為運行緩沖液，檢測波長210nm，溫度20℃;結果鹽酸可樂定質量濃度在2.70～48.60μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好，回收率和重復性良好。

5 毛細管電泳－安培檢測法

毛細管電泳－安培檢測法具有選擇性好、操作簡單、儀器價廉、可同時實現包括鹽酸可樂定在內多種成分的檢測等優點。丁飛等[15]利用毛細管電泳－安培檢測法實現了珍菊降壓片中鹽酸可樂定、氫氯噻嗪和蘆丁的同時檢測。在25 mmol/L Na2B4O7－50 mmol/L NaH2PO4緩沖溶液中，3種電活性物質在15 min內實現完全分離。每片珍菊降壓片中3種有效成分鹽酸可樂定、氫氯噻嗪和蘆丁的含量差別很大，分別為0.03，5，20 mg。通過改變樣品稀釋溶劑，調整了3種活性物質在電極上的電流響應，實現了珍菊降壓片中含量差別百倍以上的3種電活性物質的同時檢測，測定結果與該藥片的每片標示值之間的相對偏差均小于2%。

6 離子對萃?。止夤舛确?/h2>

離子對萃取－分光光度法具有測定結果準確、抗干擾能力強、重現性較好等優點。魏世超等[16]運用離子對萃?。止夤舛确y定可樂保林片中鹽酸可樂定含量，檢測波長為412 nm，結果鹽酸可樂定質量濃度在10.3～61.8 μg/mL范圍內與吸光度呈線性關系，平均回收率98.6%，RSD=1.78%。

7 氣相色譜法

氣相色譜法具有靈敏、重現性好、分離效果好等特點，可用于鹽酸可樂定的含量測定。楊雪梅等[17]采用氣相色譜－電子捕獲檢測法測定家兔血漿中可樂定的質量濃度，以鹽酸普萘洛爾為內標，在堿性條件下用乙酸乙醋提取，提取物經，3，5－二(三氟甲基)苯甲酞氯衍生化后進行分析。結果樣品溶液與內標溶液分離較好，保留時間分別為16.5和21.4 min;測定質量濃度線性范圍為 20 ～800 ng/mL(r=0.999 91)，測定下限為 5 ng/mL;平均回收率為(92.8±2.0)%，日內和日間 RSD分別為2.3%和3.3%，血漿中內源性物質對測定未見干擾[17]。

[1]陳新善.HPLC測定復方鹽酸多塞平膠囊中鹽酸多塞平與鹽酸可樂定的含量[J].中國藥事，1998，12(4):223 －225.

[2]鮑立曾，劉法千，金 芳.HPLC測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定的含量及均勻度[J].中國藥品標準，2007，8(5):26－28.

[3]楊繼斌，湯曉樞.HPLC測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定的含量[J].藥物分析雜志，2006，26(12):1 854 －1 856.

[4]許伯慧，柯 學，王欲斌，等.HPLC法同時檢測氫氯噻嗪和鹽酸可樂定[J].藥學與臨床研究，2007，15(1):47 －50.

[5]馬永貴，李自明，閔 敏，等.高效液相色譜法測定可樂寶林片中鹽酸可樂定的含量[J].醫藥導報，2010，29(4):522－524.

[6]魯 敏，龔 青，金樟照，等.高效液相色譜法測定珍菊降壓片中綠原酸、鹽酸可樂定、氫氯噻嗪的含量及含量均勻度[J].中國現代應用藥學雜志，2006，23(6):495 －497.

[7]于文靜，王煥群.高效液相色譜法測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定的含量[J].中國藥品標準，2009，10(2):144 －146.

[8]張建國，李志浩，孫新建，等.高效液相色譜法測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定含量[J].醫藥導報，2008，27(5):602 －603.

[9]許 諳，姚琴紅.固相萃?。咝б合嗌V法測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定的含量[J].中國醫院藥學雜志，2010，30(11):981－982.

[10]黃東慧.反相高效液相色譜法測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定的含量[J].臨床和實驗醫學雜志，2009，8(4):68－69.

[11]Ying － QinWei，Hua － Bin Zou，Yi Ma，et al.LC Determination of Clonidine Hydrochloride in Chinese and Western Combine Compound Hypotensor Tablets of Zhenju Jiangya[J].Chromatographia，2006，64:215 － 218.

[12]盧亞玲，陳繼濤，陳 波，等.高效液相色譜－質譜法測定降血壓保健食品中的8種違禁添加成分[J].色譜，2009，27(1):44－49.

[13]SU Sheng min，YU Yun qiu.Simultaneous Determination of Clonidine Hydrochloride，Hydrochlorothiazide，and Rutin in Zhenju Jiangya Tablet by Capillary Electrophoresis[J].Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences，2005，14(3):173 － 175.

[14]高蘇亞，李 華，曹曉芹.區帶毛細管電泳法測定珍菊降壓片有效成分的含量[J].時珍國醫國藥，2008，19(11):2 656－2 657.

[15]丁 飛，陳黎明.毛細管電泳－安培檢測法同時測定中成藥珍菊降壓片中有效成分[J].理化檢驗·化學分冊，2008，44(5):430－432.

[16]魏世超，徐麗君，賀國芳，等.可樂保林片中鹽酸可樂定含量測定[J].醫藥導報，2002，21(9):583 －584.

[17]楊雪梅，陳顯瑤.血漿中鹽酸可樂定的氣相色譜測定法[J].藥物分析雜志，1994，14(2):24 －26.