乳酸菌檢驗方法的探究

張全溫 馮云

乳酸菌檢驗方法的探究

張全溫 馮云

目的探究乳酸菌的檢驗方法，以求能更好地提高檢出率和準確率。方法 使用改良番茄汁瓊脂培養基檢驗自制酸奶中的乳酸菌，測定乳酸菌菌落總數，對乳酸菌菌種進行鑒定，對結果進行分析。結果桿菌和球菌外形特征明顯，桿菌菌落大小中等，直徑約為3 mm，淡白色，菌落濕潤、邊緣不整齊，棉絮狀;球菌菌顯淡白色，外形光滑，邊緣整齊。計算得出1 ml酸奶中的乳酸菌菌數大約為4.2×106cfu/ml。結論目前對乳酸菌的檢驗技術比較成熟，運用改良番茄汁瓊脂培養基培養乳酸菌，培養后平板內乳酸菌形態特征明顯。

乳酸菌;檢驗方法;顯微形態;改良番茄汁瓊脂培養基

乳酸菌是指發酵能產生大量乳酸的一類細菌，這類細菌有23個屬，200多種，分布廣泛，人體的腸道內也存在很多乳酸菌，是一種存在于人體內的益生菌，與人類的健康生活息息相關［1］。由于上述原因，如酸奶這樣的乳酸菌飲料在市場上很受人們的歡迎，但是隨著酸奶產量的加大，其質量常常不穩定，人們對乳酸菌飲料的質量問題也越來越關注，急需一種能有效檢驗乳酸菌的方法。本文通過分析研究先前學者的文獻，總結了目前國內外常用的各種乳酸菌的檢測方法，并進行了初步的探究，以期為后續乳酸菌的檢驗工作做出貢獻。

1 材料和方法

改良番茄汁瓊脂培養基：加入番茄汁50 ml、酵母提取液5 g、牛肉膏 10 g、乳糖 20 g、葡萄糖2 g、磷酸氫二鉀 2 g、聚山梨酯-80，1 g、乙酸鈉5 g、瓊脂15 g，加入適量蒸餾水加熱溶解后，加入蒸餾水定容到1000 m l處，進行PH值檢測應為(6.8±0.2)。然后進行滅菌操作備用。

嗜熱鏈球菌由哈爾濱美華生物技術股份有限公司生產提供，保加利亞乳桿菌由上海志研生物科技有限公司生產提供，純牛奶由蒙牛乳業股份有限公司生產提供。純牛奶90℃加熱10 min進行基本滅菌處理，期間加入適量白砂糖，待完全溶解后，冷卻至42℃左右，進行2%接種，之后放入恒溫箱內，40℃培養 3 d。

將制成的酸奶吸取1 ml加入到含有9 ml生理鹽水的試管內，輕輕混均，再從試管內吸取1 ml第一次稀釋液到另一只含9 m l生理鹽水的試管內，如此反復，將其稀釋到一個合適的濃度。之后吸取10-1、10-2、10-3、10-4、10-5稀釋液到平板內，然后加入50℃左右的改良番茄汁瓊脂培養基至平板中部略下位置，蓋上培養皿蓋，左右輕輕搖均，放入40℃恒溫箱內再培養3 d，然后取出進行觀察檢驗。以上操作都進行嚴格的無菌操作。

2 結果

通過觀察我們可以看到乳酸菌中的桿菌在培養皿內的菌落大小中等，直徑約為3 mm，顏色呈淡白色，菌落濕潤、邊緣不整齊，整體看上去就像一團棉絮一樣;球菌的菌落也顯淡白色，外形光滑，邊緣整齊。

在進行菌落計數時10-1、10-2、10-3稀釋度的菌落數都多到數不清，10-4、10-5稀釋度的菌落數分別為350和70。選取10-5稀釋度的培養皿進行顯微鏡觀察、革蘭氏染色和過氧化氫酶試驗。從70個菌落中隨機選取的5個菌落均為革蘭氏陽性無芽孢的球菌或桿菌，其中3個菌落為過氧化氫酶陰性，這樣我們就可以大約計算出1m l酸奶樣本中的乳酸菌數，70×3/5×105，為4.2×106cfu/ml。

3 討論

3.1 顯微鏡觀察 通過顯微鏡我們能觀察到細菌的一些形態特征，乳酸菌有一些形態特征，例如乳酸鏈球菌族，菌體通常呈球狀，通常成對或成鏈;乳酸桿菌族，菌體通常呈桿狀，有時也顯絲狀同時有假分枝產生。我們可以通過顯微鏡進行初步觀察，看菌體是否存在鞭毛和芽孢等，但是這種方法也只能局限于初步判斷。另外，不同的乳酸菌種對不同抗菌藥物都有不同的敏感性，例如對于同一種抗生素，不同的乳酸菌種都會表現出不一致的敏感性，根據這個我們可以制定出抗菌譜，從而進一步進行判斷。

［1］遲瓊，鄒澤紅，傅意玲，等.乳酸菌免疫調節功能的研究進展.中華生物醫學工程雜志，2011，17(4)：377-380.

454001 河南省焦作市第二人民醫院檢驗科

3.2 檢驗代謝產物 不同的菌體會產生不同的代謝產物，所以我們也可以根據菌體代謝產物的不同進行檢驗。乳酸是乳酸菌在厭氧的條件下的重要產物，同時二氧化碳和乙酸等也是其代謝產物，并且根據不同的種，這些代謝產物的產出比例也不一樣。因此我們要是可以檢測出乳酸菌的代謝產物種類及其產出比例，就可以對其進行分辨。

3.3 分子生物學的應用 乳酸菌與人們的生活息息相關，是一種益生菌，所以說對乳酸菌的檢驗也很重要。隨著科學技術的進步，乳酸菌的檢驗方法也在不斷地進步，從簡單地通過顯微鏡進行檢驗，到了更深層次的分子生物學和基因水平，目前主要有聚合敏鏈式反應方法、隨機擴增多態性DNA方法、DNA的G+C含量測定法、DNA-DNA同源性分析法、細菌DNA限制性核酸內切酶分析法和探針雜交法等。

高科技在提高了檢出率和準確率的同時，操作起來也相對復雜;傳統的檢驗方法雖然檢出率和準確率上不如這些新技術，但是操作起來相對簡單易行，我們應該根據具體情況，采用不同的檢驗方法。