HBsAg采用膠體金試紙法檢測時的漏檢情況探討

王業坤

郴州市中心血站，湖南郴州 423000

病毒表面抗原（HBsAg）作為輸血相關傳染病主要篩查項目之一，廣泛開展應用酶聯免疫吸附試驗（ELISA），在經血傳播疾病篩查中起到重要作用，如乙肝、丙肝、艾滋、梅毒檢測等。 并取得顯著成效，其靈敏度和特異性得到國家認可。 同時我國作為乙肝大國，乙肝是無償獻血不合格比率主要組成部分之一，如能提高在血液采回血站之前的檢出率，將進一步降低經血傳播的風險，節約血液資源，降低采供血的各種成本。 隨著目前醫療科技的進一步發達，膠體金試紙法因不需特殊檢測設備和儀器，方便操作的優勢，在HBsAg 篩查中發揮了較為重要的作用。但當標本中HBsAg 在ELISA 酶標法測定時滴度太高，易有假陰性情況出現，而導致漏檢發生[1]。對HBsAg 標本為低滴度時，采用膠體金試紙法進行檢測，因檢測不出有假陰性情況存在，導致漏診發生。該研究選擇2011年5—10月該站無償獻血者標本，采用國產和進口兩種ELISA 酶標試劑篩查HBsAg 均為陽性的標本185 例。分男女兩組分別行膠體金試法檢測， 對兩組漏檢資料進行回顧性對比分析， 再與文獻提供的ELISA 酶標法提供的漏檢情況進行比較，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該站14 309 例無償獻血篩查中用國產和進口兩種試劑HBsAg 均檢測為陽性標本185 例。 為無償獻血者，對其血清標本進行膠體金試紙法對比檢測。 男性110 例，女性75 例。

1.2 方法

1.2.1 ELISA 酶標法 國產試劑采用珠海麗珠生物工程有限公司生產的（HBsAg）酶標試劑盒，進口試劑采用意大利索林公司生產的（HBsAg）酶標試劑盒，嚴格按說明書在有效期內操作，行實驗同時均行質控檢測。 結果評定：陽性為OD 值>cut off 值。 洗板機：瑞士FAME24/20 型全自動酶免儀。 酶標儀：瑞士FAME24/20型全自動酶免儀。

1.2.2 膠體金試紙法 采用膠體金試紙條， 在試紙條箭頭區內滴2 滴全血，后加1 滴推進液，行5 min 靜止后對結果進行判斷，只1 條紅色對比線在測試區為陰性，2 條為陽性。

1.3 統計方法

采用SPSS13.0 統計軟件，計數資料行χ2檢驗。

2 結果

2.1 ELISA 酶標法

185 例血清標本檢測中，HBsAg 陽性185 例。

2.2 膠體金試紙法

185 例血清標本檢測中，110 例男性樣品中HBsAg 陽性65例，陽性率為59%。 75 例女性樣品中HBsAg 陽性40 例，陽性率為53%。

HBsAg 陽性標本采用膠體金試紙法未檢出的80 例采用ELISA 酶標法檢測，OD 值較低，但全部為陽性，與cut off 值接近，表明此例標本HBsAg 濃度相對較低。而現有膠體金法對此例標本靈敏度不夠，而造成漏檢。 根據資料，標本中HBsAg 滴度太高，對原血清采用ELISA 酶標法檢測有后滯現象發生，而導致漏診出現。

2.3 膠體金試紙法與ELISA 酶標法的漏檢情況比較

兩者比較差異有統計學意義（P＜0.05）,兩種方法的漏檢情況比較，差異有統計學意義。

2.4 不同性別組比較

ELISA 酶標法105 例陽性患者中，膠體金試紙法陽性患者中，性別組差異無統計學意義，兩組比較差異無統計學意義（P﹥0.05）。

3 討論

目前，在臨床肝炎病毒中，乙肝發病率占有較高比例，對患者的生命健康和社會穩定造成嚴重影響，人群中受感染的患者慢性攜帶者占10%，且乙肝攜帶患者中大部分將發展至慢性肝炎，具有較嚴重的危害型。 據國內外醫學報道，目前判斷乙肝患者病情變化以檢測乙肝二對半和HBV-DNA 的定量作為治療效果和預后成效的分析依據。但由于乙肝二對半比較復雜和HBVDNA 的特異性指標，檢測判斷相對棘手。以往對乙肝進行診斷過程中，酶聯免疫法為對乙肝兩對半進行檢測的主要方法，但由于檢測結果是患者在對HBV 感染后的免疫狀態，血清中抗體蛋白存在變性狀況，直接影響檢測后的結果。 有報道采用熒光定量PCR 熒光探針法（FQ—PCR）進行實時熒光檢測，對反應體擴增后的熒光信號進行捕捉。 熒光信號變化到某一值，會呈循環狀，利于循環次數與DNA 量進行定量，有效對乙肝病毒本身進行檢測。 采用此方法可直接可靠的對HBV 復制情況進行反應，成為有效的判斷依據。 相關研空顯示[2]，采用ELISA 進行乙肝兩對半進行檢測的幾種常見模式中，大三陽患者有較高的PCR 檢測符合率，小三陽符合率表現普通。 表明HBeAb 有較低的復雜HBV能力。 在PCR 法檢測之下，檢測出患者有較低的病毒復制，小三陽對乙肝病毒的復制變化情況表現不明顯。 通過酶聯免疫法檢測乙肝二對半為全陰，在PCR 法檢測的時候，在PCR 的高靈敏度檢測之下，可以檢測變異的HBV 變異體，彌補酶聯免疫法的不足。

目前，因膠體金試紙條法檢測快速，操作方便，在大量樣本現場檢測中較為適用，膠體金試紙法有較低敏感性，HBsAg 低濃度陽性標本敏感度低，有較高漏檢率，ELISA 酶標法相對敏感，0.1～0.2 ng/mL 的HBsAg 采用ELISA 酶標法即可檢測，有較低漏診率，但該研究結果中，ELISA 酶標法14 309 例無償獻血者血清標本檢測中，HBsAg 陽性185 例，陽性率為1.29%。膠體金試紙法185 例ELISA 法陽性血清標本檢測中，HBsAg 陽性105 例，陽性率為56.8%，其中假陰性80 例，為43.2%。 兩組比較差異有統計學意義 （P＜0.05）。 膠體金試法檢測的HBsAg 陽性結果中，與ELISA 法檢測結果有差異性，故采用金試紙測法檢測容易造成漏診。

目前，在國內采供血機構及各大醫院中對血液標本檢測HBsAg 時通常應用ELISA 酶標法，但因所用ELISA 酶標試劑盒內反應孔里有一定的抗體量包被，各標本抗原量存在差異，其OD 值在含量與試劑盒相近時，與標本含量成正比，而抗原在血清中呈較高水平時，則有后滯現象出現，可導致假陰性發生，造成漏檢發生。 故在采用ELISA 酶標法對血清標本進行檢測時，需采用衛生部臨檢中心提供的低值質控血清測定值，宜在cut off 值比值2～3 間的ELISA 酶標試劑盒為佳，為1 ng/mL。 再聯合0.5 ng/mL 低界值血清做質控，保證HBsAg 檢出低值弱陽性標本。

總之，臨床采用ELISA 法檢測無償獻血者標本大概檢出比率在1%～2%，這樣給采供血的質量把關形成很大的壓力，同時造成很大的采供血物資、檢測成本、不合格血液處理等成本的上升。 如能將金標法作進一步的改進，提高其檢測的靈敏度，這樣在采血現場用金標法提高乙肝快檢的準確率，一是節約了獻血員的血液，降低了實驗室的風險，二是降低了采供血的成本，提高了采供血的質量和效率。 故針對膠體金試紙法和ELISA 檢測HBsAg 的漏診情況，用膠體金試紙法檢測陽性的標本在成一定倍數稀釋后，采用ELISA 酶標法進行檢測，可使對強陽性標本的漏檢降低，同時在利用ELISA 酶標法對HBsAg 進行檢測時，需應用相關部門提供的血清臨界值做質控，以降低漏檢發生率。

[1] 李宏杰.膠體金免疫層析試驗檢測HBsAg 等項目與醫療安全[J].中國醫學文摘·檢驗與臨床，2006，20(6)：321.

[2] 李文新.金標法測HBsAg 漏檢原因分析[J].檢驗醫學，2004，19(2)：92.