醒神健腦顆粒對血管性癡呆大鼠的作用研究

郭閆葵 賈 敏 張曉燕 高 琛

（山東省濟南市中醫醫院，山東 濟南 250012）

隨著年齡的增加，血管性癡呆的患病率逐年增長，國內調查顯示：60歲以上老人的血管性癡呆的患病率為32.4/10萬，給個人和社會帶來巨大的負擔。筆者以中醫藥理論為基礎，結合多年臨床經驗，認為血管性癡呆的病位在腦，腎虛為本，痰濁瘀血蘊積，化熱生風，釀生濁毒為本病發病過程中的基本環節。因此，本研究提出了補腎瀉濁法作為治療的基本法則，觀察醒神健腦顆粒對血管性癡呆的防治作用。

1 材料與方法

1.1 動物 Wistar大鼠由山東中醫藥大學動物中心提供，動物合格證：魯動字200500201。

1.2 藥物 醒神健腦顆粒由濟南市中醫醫院提供，每克相當于含生藥2.1 g，使用前用生理鹽水適當稀釋。實驗動物所用醒神健腦顆粒按高、低劑量分別配成 20%、10%（4、2 g/kg）藥液，分別相當于臨床人用劑量的10、5倍，于4℃儲藏備用。實驗用陽性對照藥石杉堿甲，河南太龍藥業股份有限公司生產，產品批號20090205，50 mg/片。實驗動物用藥劑量為15.0 mg/kg，相當于臨床人用劑量的5倍。

1.3 試劑及儀器 UV2100紫外、可見光分光光度計，上海尤尼卡公司。LDZ4-0.8醫用低速離心機，北京醫用離心機廠。FA1104型電子分析天平，上海天平儀器廠。WKY型移液器，上海榮泰生化工程有限公司。XZC－5A小鼠跳臺儀，山東省醫學科學院設備站。實驗用超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）藥盒，南京建成公司提供。鹽酸腎上腺素注射液，天津金耀氨基酸有限公司0708051。戊巴比妥鈉，上海化學試劑公司進口分裝。氨基乙酸，湖南洞庭制藥廠，990526.伊文思蘭，Fluka進口。

1.4 模型制備 健康大鼠50只，隨機均勻分為5組。分別是空白對照組和模型對照組 （灌胃生理鹽水）、醒神健腦高劑量組（灌胃醒神健腦液4 g/kg）、醒神健腦低劑量組（灌胃醒神健腦液2 g/kg）、石杉堿甲組（灌胃石杉堿甲15.0 mg/kg）。每日1次，連續5 d。末次給藥后1 h進行實驗。除空白對照組外，其余各組稱體質量后，腹腔注射戊巴比妥鈉30 mg/kg麻醉，仰臥固定，解剖頸部；分離左頸總動脈，穿線結扎近心端，遠心端插入頭皮針并固定。通過頭皮針緩慢注入氨基乙酸腎上腺素混合液（每毫升含氨基乙酸75 mg，腎上腺素37.5 mg）0.2 mL，以誘發腦血管內多發性腦血栓形成（空白對照組不注射）。4min后注入1.5%伊文思蘭0.2mL。8 min后處死動物，取左側大腦半球，稱質量。

1.5 標本采集與檢測 （1）抗血栓實驗：大鼠取適量腦組織用丙酮勻漿，勻漿室溫下靜置2 h，3000 r/min離心10 min，上清液于分光光度計620 nm測OD值（該值高低代表腦內血栓形成的多少）。（2）生化指標：測定多發性腦栓塞模型大鼠腦組織SOD、MDA含量。（3）組織形態學觀測:將處死大鼠部分腦組織常規固定，石蠟包埋，HE染色，進行病理學光鏡檢查。

1.6 統計學處理 應用SPSS11.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，比較組間差異。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 醒神健腦顆粒抗血栓作用 見表1。結果顯示兩種劑量的醒神健腦顆粒及石杉堿甲均可顯著減少腦內血栓形成，明顯減少伊文思蘭在腦內的儲留量（P＜0.05），大劑量的醒神健腦顆粒作用更加突出。

表1 各組大鼠在體腦血栓比較（±s）

表1 各組大鼠在體腦血栓比較（±s）

與模型對照組比較，*P＜0.05。下同。

組 別空白對照組n 10光密度值0.0131±0.0032模型對照組 10 0.4380±0.0651醒神健腦高劑量組 10 0.1724±0.0354醒神健腦低劑量組 10 0.1198±0.0291石杉堿甲組 10 0.1390±0.0117

2.2 醒神健腦顆粒神經生化學指標的影響 見表2。醒神健腦高、低劑量組SOD含量均高于模型對照組（P＜0.05），醒神液高劑量組MDA含量高于醒神液低劑量組和石杉堿甲組 （P＜0.05）。

2.3 組織形態學觀察 左側海馬區組織形態光鏡檢查結果示，空白對照組：海馬組織結構正常，無充血、水腫現象。錐體細胞分層整齊排列。細胞形態正常，邊界清晰；核仁、核膜清晰可見。細胞間質均勻，核周體與基質間未見明顯間隙。模型對照組：海馬組織細胞水腫明顯，細胞帶排列紊亂，細胞間隙明顯增寬。大部分錐體細胞呈缺血改變，表現為胞體腫脹變形，細胞漿呈空泡狀，胞核固縮，核仁、核膜模糊；細胞間質水腫明顯。部分神經元壞死、破碎或消失。醒神健腦高劑量組：海馬組織無明顯水腫、充血；多數神經元結構較完整，形態相對正常；細胞及間質水腫程度輕；少量神經元變性壞死。醒神健腦低劑量組：海馬組織無明顯充血、水腫；錐體細胞層數有所減少，細胞間隙稍大，層次結構不清；但細胞帶排列比較規整，細胞形態略不規則，多呈輕度缺血改變。少量神經元水腫、變性，細胞核固縮或消失。石杉堿甲組：海馬組織輕度充血、水腫；可基本保持錐體細胞，但細胞形態欠規則，多部分細胞呈輕度缺血改變；細胞輕度固縮，核仁、核膜結構尚清晰；少量神經元變性壞死。見圖1。

表2 各組大鼠腦內SOD、MDA含量比較（±s）

表2 各組大鼠腦內SOD、MDA含量比較（±s）

與醒神健腦高劑量組比較，△P＜0.05。

組 別空白對照組n 10 SOD（U/mL） MDA（mmol/mL）3.0210±0.9912 10.013±1.128模型對照組 10醒神健腦高劑量組 10 2.0098±0.0671 14.560±1.310 3.8841±0.1029* 9.301±0.731*醒神健腦低劑量組 103.3270±0.0563* 9.105±0.873*△石杉堿甲組 102.9983±0.0975* 9.016±0.904*△

圖1 各組大鼠腦海馬區組織細胞形態（HE染色，×400）

3 討 論

大腦是氧需求量很高的組織器官，缺血再灌注后產生大量的自由基，可發揮強氧化作用，它可以與生物大分子，尤其是膜上的不飽和脂肪酸反應，形成脂質過氧化物，破壞生物膜系統［1］，對神經細胞有明顯的毒性作用。SOD為機體直接清除自由基防止氧化損傷的重要酶類，其主要功能是將氧的單價還原產物O2－歧化成水，從而阻斷脂質過氧化連鎖反應，抑制脂褐素形成，保護細胞免受毒害作用［2］。研究表明，衰老動物體內有大量脂質過氧化產物，并伴有SOD的降低。脂質過氧化物的生成和沉積可以引起一系列的衰老癥狀，因此脂質過氧化物的含量是評價衰老的主要指標之一。MDA是脂質過氧化反應的最終產物，故MDA水平間接反映了組織中自由基含量及脂質過氧化程度。研究發現，腦缺血后腦組織中MDA及含水量明顯增加，而抗氧化酶活性明顯降低，意味著腦缺血后過多產生的自由基導致了缺血性腦損傷［3］。在中樞神經系統中，海馬屬邊緣系統，是與學習記憶和情緒、行為功能密切相關的重要腦區，是對腦缺血最敏感的區域之一［4］。血管性癡呆智能衰退，與腦缺血造成海馬損傷密切相關。研究發現，即使短暫的腦缺血也可造成海馬CAI區錐體細胞延遲性神經元死亡［5］。

醒神健腦顆粒由何首烏、膽南星、女貞子、遠志、赤芍、丹參、地龍等組成，具有補腎益精、活血化痰、開竅醒神之功效。本實驗結果顯示：一定劑量的醒神健腦顆粒可減少大鼠在體腦血栓形成；升高SOD活性，降低組織內MDA水平，體現其抗氧化、清除自由基的作用；同時對缺血缺氧狀態下腦組織細胞、神經元呈現明顯保護作用。

［1］龔秀云，吳曉光，高維娟，等.益腎降濁湯對大鼠腦缺血再灌注損傷腦組織抗氧化酶活力的干預效應［J］.中國臨床康復，2006，10（19）：41-43.

［2］戴恩來，馬鴻斌，歐秀梅，等.通絡益智散對擬血管性癡呆大鼠AchE，MSA 和 SOD 的影響［J］.甘肅中醫，2006，19（5）:38-40.

［3］王松林，王桂敏，楊霄鵬.首烏延壽丹對大鼠局灶性腦缺血的保護作用［J］.中國實用神經疾病雜志，2007，10（1）：33-34.

［4］趙衛國，呂素君.中醫藥治療血管性癡呆作用機制的實驗研究探討［J］.實用中醫內科雜志，2005，19（6）：504-506.

［5］趙建新，田元祥，李國明，等.腦缺血再灌注擬血管性癡呆小鼠皮層及海馬細胞病理形態學動態觀察［J］.中風與神經疾病雜志，2000，17（4）:200.