胃實熱證大鼠模型舌象診斷的建立及評價*

官宗華 宋捷民 張世亮 丁曉越

（浙江中醫藥大學，浙江 杭州 310053）

胃實熱證是中醫臨床常見證型，臨床表現為胃脘灼痛，拒按，渴喜冷飲，或消谷善饑，或見口臭，或牙齦腫痛潰爛，牙齒出血，大便秘結，小便短黃，舌紅苔黃，脈滑數。此證多因過食辛辣溫燥之品，以致胃火過旺而成。本研究應用病證結合理論，將胃實熱證的病與代表性病因嗜食辛辣相結合進行模型的實驗研究，依據舌象在胃實熱證診斷中占有十分重要的地位這一特點，參照相關研究進展［1-4］設定相關檢測指標，建立和評價胃實熱證大鼠病理模型及舌象診斷。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級wistar大鼠，20只，體質量220～240 g，雌性，由浙江中醫藥大學實驗動物中心提供，動物合格證號SYXK（浙）2008-0115。

1.2 藥物與試劑 吲哚美辛，石藥集團，批號：20120328；水合氯醛，天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20101218；干辣椒粉；白酒（體積分數 50%）；白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-8（IL-8）、白細胞介素-10（IL-10）、內皮素－1（ET-1）、環磷酸腺苷（cAMP）、前列腺素 E2（PGE2）酶聯免疫試劑盒均購于杭州弘健生物科技有限公司，批號：201203。

1.3 儀器 HC-3018型高速離心機，安徽中科中佳科學儀器有限公司；MK3型酶標儀，塞默爾飛世爾儀器有限公司。

1.4 造模方法 將大鼠隨機分為空白組、胃實熱組，每組10只。胃實熱組大鼠腹腔注射吲哚美辛（溶于5%NaHCO3液中），10 mg/kg；給予辣椒、白酒混合液10 mL/kg（干辣椒粉0.1 g/mL，白酒0.1 mL/mL）灌胃，每日2次。空白組灌胃等量的生理鹽水。連續1周。

1.5 標本采集與檢測

1.5.1 舌象取材方法 在足夠光照強度的固定光源下，固定拍攝環境、光照強度，固定焦距，盡量減少人為因素對照片色差的干擾。按50 mg/kg腹腔注射10%水合氯醛，待大鼠麻醉后，用鑷子輕輕夾住大鼠舌尖從左輕輕拉出，露出舌根部，使整個舌體與大鼠軀干成直線或小于15°的夾角。用photoshop圖片處理軟件，將大鼠舌象照片裁剪成980×490 px大小圖片，分別設置10條水平與垂直參考線，隨機選取6個x與y坐標交點記錄該點紅色、綠色、藍色成分數值。

1.5.2 酶聯免疫法檢測血清中 IL-6、IL-8、IL-10、ET-1、cAMP、PGE2含量 麻醉大鼠后，腹主動脈取血，分離血清待測。參照試劑盒說明，利用雙抗體夾心法，往抗體包被微孔板中加入待測樣品或標準品，與HRP標記的羊抗鼠抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。用酶標儀在450 nm波長下測定吸光度，通過標準曲線計算樣品中各個含量。

1.6 統計學處理 所有數據通過SPSS17.0軟件包用單因素方差分析LSD或S-N-K法進行比較檢驗，用（±s）表示。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 一般狀態 見表1。胃實熱證大鼠與空白組大鼠比較口唇、耳朵、尾巴逐漸變紅，呼吸逐漸變快，毛色不榮、背毛無光澤，分散，反應先過敏后遲鈍，活動先活躍后靜臥不動，活動量減少，體質量逐漸減輕，消瘦明顯，口鼻干燥，分泌物減少，食量減少，便質黑干硬。

表1 胃實熱證大鼠體質量變化（g，±s）

表1 胃實熱證大鼠體質量變化（g，±s）

與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。 下同。

第5日 第7日胃實熱組 209.83±12.30* 208.83±16.70*第1日 第3日227.70±17.63 215.44±13.51*空白組 10 229.13±11.05 229.00±11.36 228.63±11.66 229.00±11.81組 別n 10

2.2 舌象變化 見表2。與空白組相比，胃實熱證大鼠舌色呈紅色至絳紅色，部分大鼠舌體干燥，稍缺彈性，部分大鼠舌表面無苔。在舌象分析圖片中，胃實熱證組大鼠與空白組相比舌質多紅，暗。通過圖片分析軟件對其色差進行統計分析發現，胃實熱證大鼠的舌象與空白組大鼠的舌象在紅色、綠色、藍色成分上有明顯差異（P＜0.05），特別是紅色成分差別更加顯著，差異有統計學意義（P＜0.01）。

表2 胃實熱證大鼠舌象變化（±s）

表2 胃實熱證大鼠舌象變化（±s）

組 別 綠色 藍色胃實熱組 83.23±1.57* 89.24±19.56*空白組 89.82±3.95 99.95±3.84紅色10 105.59±8.32**10 115.06±3.02 n

2.3 血清生化指標的改變 見表3～表4。胃實熱證大鼠血清IL-6、IL-8、IL-10 與空白組相比含量明顯增加，cAMP、PGE2的含量減少，差異有統計學意義（P＜0.05或0.01）。

表 3 胃實熱證大鼠血清 IL-6、IL-8、IL-10、ET-1 含量變化（ng/L，±s）

表 3 胃實熱證大鼠血清 IL-6、IL-8、IL-10、ET-1 含量變化（ng/L，±s）

IL-10 ET-1胃實熱組 16.33±1.17** 51.30±3.18**IL-6 IL-8 77.29±3.43* 368.15±33.33*空白組 10 72.98±1.94 280.65±39.13 14.64±0.41 46.31±0.95組 別n 10

表4 胃實熱證大鼠血清cAMP、PGE2含量變化（±s）

表4 胃實熱證大鼠血清cAMP、PGE2含量變化（±s）

PGE2（ng/L）胃實熱組 62.50±10.63**空白組 103.19±28.57組 別cAMP（nmol/L）10 3.74±0.18**10 4.10±0.16 n

3 討 論

中醫動物模型必須符合中醫特色。中醫通過望、聞、問、切四診分析疾病，一般認為動物與小兒一樣，同為啞科，以觀為主，所以在建立模型時參考并移用中獸醫的診斷技術，盡可能對大鼠的呼吸、聞叫、體溫、大小便、皮毛、舌象進行觀察。舌診是觀察患者舌質和舌苔的變化以診察疾病的方法，是望診的重要內容。臨床實踐證明，在疾病的發展過程中，舌的變化迅速而又鮮明，凡臟腑的虛實、氣血的盛衰、津液的盈虧、病情的淺深、預后的好壞，都能較為客觀地從舌象上反映出來［5］。本實驗發現胃實熱證大鼠的舌象與空白組大鼠的舌象比較在紅色、綠色、藍色成分有明顯差異，而紅色成分差異更加顯著。胃實熱證大鼠舌象較正常紅，符合中醫診斷學中紅舌主實熱的臨床意義，病機是由于血得熱循行加速，舌體脈絡充盈；或因陰液虧乏，虛火上炎，故舌色鮮紅。而綠色、藍色成分出現明顯差異，使舌象略微呈現暗紅色，成絳舌，絳舌多由紅舌進一步發展而成。絳舌主里熱亢盛，陰虛火旺。本實驗則因久食辛辣之物，使胃有實熱及傷其陰血而致，所以除絳舌外，舌頭稍缺彈性，部分舌體表面無苔。

由此可見本實驗舌象診斷是符合《中醫診斷學》［5］舌象特征與臨床意義。大鼠其他相應的體征變化，如口渴、口鼻干燥，分泌物減少，便質黑干硬。口唇、耳朵、尾巴逐漸變紅，呼吸逐漸變快，毛發稀疏凌亂、喜歡仰臥，個體分散，躁動、興奮等也較符合熱證的診斷依據。

本研究應用“病證結合”理論，采用腹腔注射吲哚美辛與灌胃辣椒白酒相結合建立胃實熱證大鼠模型。吲哚美辛和白酒均可抑制胃黏膜環氧化酶，使前列腺素合成減少，致胃黏膜細胞屏障機能減弱，胃酸增高而誘發潰瘍［6-7］。辣椒和白酒都屬辛熱之品，且胃實熱證的產生也與長期食用二者關系密切，《癥因脈治·胃脘痛》云“飲食不節，傷其胃口……血分素熱，又喜辛辣之物，以傷其陰血，則停積于中，而成死血之痛”；有學者［8］認為食用花椒、辣椒、生蔥、生蒜、芥末等香料及調味品，刺激胃黏膜，形成急性或慢性損傷。炎性相關生化指標IL-6、IL-8、IL-10及血管內皮損傷因子ET-1含量明顯增加，神經內分泌激素cAMP及前列腺物質PGE2含量減少，符合胃實熱證胃黏膜主要以黏膜充血、潰瘍形成、炎性損傷的特征。因此本實驗采用熱因素結合腹腔注射吲哚美辛成功建立大鼠胃實熱證病理模型。

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