貓冠狀病毒的特性及診斷方法

(上海市外高橋出入境檢驗檢疫局，上海市郊 200137)

貓冠狀病毒在世界各地廣泛存在。感染貓冠狀病毒后的貓有可能患上一種名為貓傳染性腹膜炎的嚴重疾病。

由于目前尚無有效的疫苗及藥物治療該病，因此對該病的診斷顯得尤為重要。本文簡要介紹了貓冠狀病毒的特性及常見診斷方法，供參考。

1 病毒特性

貓冠狀病毒(FCoVs)是一種有囊膜的RNA病毒，基因組由29190個核苷酸組成。FCoVs屬冠狀病毒科，該科其他病毒還有豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV),犬冠狀病毒(CCV),貉冠狀病毒(RDCoV)及中國鼬獾冠狀病毒(CFBCoV)等。

病毒基因編碼病毒聚合酶(Pol)及四個結構蛋白(纖突，囊膜，膜，核衣殼蛋白)，順序為5′-Pol-S-E-M-N-3′，額外基因還包括(3a,3b,3c,7a,和7b)。

FCoVs有兩種已知的生物型，即貓傳染性腹膜炎病毒(FIPV)和貓腸道冠狀病毒(FECV)。據報導，FIPV和FECV都可引起病毒血癥，但只有FIPV能在巨噬細胞中復制并引起疾病。病毒，抗病毒的抗體，以及引起彌散性血管炎的補體之間的復雜免疫反應是FIP的重要特征。

FCoV感染在貓群中非常普遍。大約20%～60%寵物貓可以檢測到FCoV抗體。對于部分喂養多只寵物貓的家庭，有時抗體陽性率可達100%。FCoV具有高度傳染性，主要通過糞便及消化道途徑傳播。

2 病毒診斷

FECV感染通常只引起輕微的疾病癥狀。多數病例不表現臨床癥狀，部分幼貓會有連續數d輕微腹瀉癥狀，少數病例則可出現嘔吐癥狀。

通過電鏡觀察或RT-PCR方法可從糞便中檢測到病毒(FCoVs)。由于正常的健康小貓或成年貓都能從糞便中排毒，因此從糞便中檢測FECV的實際意義不大。

FIPV能引起致死的腹膜炎。細胞介導免疫反應較弱的貓可以發生這種疾病的“濕性”形式，這是一種免疫復合物性的血管炎，可以導致富含蛋白質的體液從血管流入腹腔。具有部分細胞介導免疫反應貓可發生這種疾病的“干性”形式，可引起多種組織發生肉芽腫性病變。當免疫系統崩潰時，“干性”FIP在疾病的最后階段也會變得具有一定的“濕性”。

由于缺乏具體的臨床癥狀，缺乏疾病特有的生化異?，F象，實踐中常用的檢測方法靈敏度和特異性較低，確診FIP比較困難。對于FIP的診斷一般基于疾病病史調查，血液學實驗及其他診斷方法，如血清學診斷、組織切片觀察、PCR等。

如果患貓出現發熱癥狀，使用抗生素治療沒有明顯效果，此時可以考慮其是否是患傳染性腹膜炎病(FIP)。大部分患FIP貓的年齡多為6至8周齡之間。此時，母源抗體已經消退，不足以保護再受致病微生物影響。

FIP是具有多種臨床表現的一種疾病。在“濕性”形式中，最典型的癥狀是有大量腔內積液。“濕性”FIP典型的病變是腹部器官的漿膜表面出現纖維素性病變及肉芽腫。呼吸困難，輕度發熱，心跳聲沉悶是常見癥狀。眼睛出現葡萄膜炎，角膜后沉淀以及虹膜著色變化。“干性”FIP病變通常發生在眼睛和中樞神經系統，肉芽腫則可能出現在腹腔，臨床癥狀多種多樣。

X光片顯示胸膜，心包，腹腔積液，肝腫大，腸系膜淋巴結腫大，可能導致部分患貓腹部出現腫塊。超聲波檢查可用于確認腹腔液的存在，判定胰腺，肝臟，淋巴結和腎臟等臟器是否正常。磁共振成像(MRI)可以顯示貓的腦室周圍對比度增強，心室擴張和腦積水。

3 血清學檢測

檢測血清抗體是檢測FCoV感染最常用的診斷方法。但因多數健康貓也會有針對FCoV的抗體，因此抗體檢測很難區分真正患病貓與健康貓。目前，已有商用抗體檢測試劑盒，其特異性及敏感性分別為95%和83%。

抗體檢測結果對確診有一定的局限性。有些患有“濕性”FIP貓的抗體滴度很低甚至為0。原因可能是貓體內病毒已經與抗體相結合，導致抗體不能同試劑盒內的抗原相結合。

由于FIP是一種免疫介導的疾病，抗原-抗體復合物能在血清和胸腔積液中循環存在。因此，通過競爭ELISA方法可用于檢測抗原-抗體復合物。

4 RT-PCR檢測

RT-PCR方法能較為敏感地檢測糞便樣品中的FCoV。糞便樣品需要仔細保存處理，以防環境中到處存在的RNA降解酶。樣品制備好后最好立即采用RT-PCR進行檢測。糞便樣品中RT-PCR的信號強度同腸道中存在的病毒數量有關。

病毒可以經各種組織及腹水中進行檢測，肝和脾是最容易檢測到病毒的組織器官。且新鮮組織中病毒的數量明顯高于經福爾馬林或乙醇處理后的組織。

用于檢測病貓FIP的引物也能用于擴增感染FCoV后仍為健康貓所攜帶的病毒。因此，RT-PCR檢測的結果要與臨床癥狀等結合診斷。

RT-PCR產生假陰性結果有很多原因，例如RNA降解、反轉錄失敗、FCoV基因組序列變異等?；旌细腥綜CV或TGEV有可能引起假陰性，因為這兩種病毒同FCoV有一段相同的保守序列。

5 組織學與免疫化學法檢測

采用H&E染色法對組織切片進行染色鏡檢是診斷FIP較好的一種方法。H&E染色可較好地定位巨噬細胞，中性粒細胞，淋巴細胞和漿細胞的局部炎癥。

血管病變周圍會有大量炎性細胞增殖，這是“濕性”FIP的典型特征。炎性細胞堆積及壞死增生性病變是“干性”FIP肉芽腫性病變的典型特征。

免疫組化方法也可檢測出組織內的FCoV 抗原，但不能區分FECV 和 FIPV。“干性”FIP時，病變組織中病毒抗原濃度要比“濕性”FIP低。