子宮內膜異位癥合并不孕患者卵泡液中ENA-78的意義

張嶺梅 劉風華 王沂峰 姚吉龍

上皮中性粒細胞活化肽-78(epithelial neutrophil-activating peptide-78，ENA-78)屬于C-X-C超家族，由78個氨基酸組成，相對分子量為83 000，是一種重要的炎性介質，具有趨化和激活中性粒細胞的作用［1］。其作為復雜炎性網絡的一個重要環節，在生殖過程中也有重要作用。本研究旨在檢測ENA-78在子宮內膜異位癥合并不孕患者及輸卵管因素不孕癥患者卵泡液中的表達水平，探討ENA-78在子宮內膜異位癥致不孕中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年12月至2011年8月于深圳市婦幼保健院行體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET)子宮內膜異位癥合并不孕患者及輸卵管因素不孕癥患者82例，年齡24～35歲;卵巢功能正常:月經第2～5天基礎FSH水平4～10 U/L，LH水平4～10 U/L，E2水平200～293 pmol/L，陰道B超下每側卵巢竇卵泡數均為5～9個;排除乙肝等感染性疾病;排除多囊卵巢綜合癥、糖尿病等其他內分泌疾病。其中經腹腔鏡或開腹手術證實為子宮內膜異位癥患者36例作為研究組，年齡(30±3)歲，不孕年齡(5.53±1.40)年。經腹腔鏡或開腹手術證實為輸卵管因素不孕患者46例作為對照組，年齡(30±3)歲，不孕年齡(4.87±1.17)年。IVF前及促排卵過程中B超下未發現雙側輸卵管積液情況。2組一般資料具有均衡性。

1.2 方法 所有患者均選擇黃體期降調節長方案。取卵時，實驗室人員揀卵后回收第1管無血液污染的卵泡液。卵泡液經1 000×g離心10 min，取上清液分裝至無菌小試管中，－20℃保存，酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測卵泡液ENA-78水平。人ENA-78試劑盒(美國 ADL公司):檢測范圍 0～800 pg/ml，靈敏度1.0 pg/ml。嚴格按照說明書進行試劑配制和操作。

1.3 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件，計量資料正態性檢驗用Kolmogorov Smirnov法，采用兩獨立樣本均數t檢驗進行數據處理，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

研究組卵泡液ENA-78水平平均為(185±65)pg/ml，對照組為(140±58)pg/ml，2組比較差異有統計學意義(P＜0.01)。見表 1。

表1 2組患者卵泡液ENA-78水平及IVF-ET結局

3 討論

育齡女性子宮內膜異位癥發生率約為25%，其中30%～50%合并不孕［2］。子宮內膜異位癥引起不孕的機制復雜，目前尚無一個單一的因素可以解釋子宮內膜異位癥與不孕的關系。有研究認為子宮內膜異位癥患者體內免疫平衡異常是導致不孕的重要因素之一，異常的免疫調節可破壞腹腔液或卵泡液的微環境，導致卵泡發育異常、卵子質量下降，而對其受精過程產生不良影響，造成不孕［3，4］。ENA-78作為一種重要的炎性介質，在女性生殖系統的表達及作用已得到初步闡明。有學者發現女性生殖系統如輸卵管上皮、卵巢組織、在位及異位子宮內膜間質細胞、腺細胞及胎膜組織等均可表達分泌ENA-78［5－8］。而在一些炎性等異常病變時其表達分泌會明顯升高，Chegini等［7］通過體外實驗證實TNF-α可以誘導子宮內膜間質細胞ENA-78分泌增加，IL-1β、內毒素、脂多糖等也可使相關組織細胞分泌ENA-78增加。ENA-78作為中性粒細胞趨化及活化的關鍵因子，其水平升高可導致中性粒細胞增多，并分泌相關細胞因子，損害正常組織或破壞局部微環境［6］。

本實驗對子宮內膜異位癥患者卵泡液中ENA-78水平進行ELISA檢測發現，子宮內膜異位癥合并不孕患者卵泡液ENA-78水平較輸卵管因素不孕患者明顯升高，這也與Dorothea M的實驗結果基本一致［9］。同時對2組患者IVF-ET的隨訪發現，研究組與對照組相比，其胚胎種植率、妊娠率及流產率無降低，但其獲卵數及受精率明顯下降，提示子宮內膜異位癥患者卵母細胞質量異常。卵巢排卵使卵泡液成為腹腔液主要來源之一，腹腔液成份的變化可能來自于卵泡液成份的變化，并與之變化相一致，本實驗結果與既往發現內異癥患者腹腔液ENA-78水平變化一致［10］。腹腔液中ENA-78可以刺激中性粒細胞及淋巴細胞分泌生長因子及細胞因子，促進內異癥形成，破壞腹腔局部微環境，因此ENA-78可以作為子宮內膜異位癥及其嚴重程度的評價指標。而卵泡液中ENA-78水平升高，與使之分泌增加的TNF-α、IL-1β，及由其所引起的炎性細胞及其分泌細胞因子協同，可使卵母細胞生長的微環境發生改變，從而影響卵母細胞的質量，并可使其受精能力及所形成的胚胎后續發育能力降低。

1 Walz A，Burgener R，Car B，et al.Structure and neutrophil-activating properties of a novel inflammatory peptide(ENA-78)with homology to interleukin 8.J Exp Med，1991，174:1355-1362.

2 Gianetto-Berrutti A，Fcyles V.Endometriosis related to infertility.Minerva Gineco1，2003，55:407-416.

3 林蕓，周燦權，莊廣倫，等.子宮內膜異位癥影響體外受精-胚胎移植結局的初步探討.中國實用婦科與產科雜志，2004，10:729-731.

4 Garrido N，Navarro J，García-Velasco J，et al.The enodmertrium versus embryonic quality in endometriosis-related infertility.Hum Reprod Update，2002，8:95-103.

5 Nakayama S，Mukae H，Ishii H，et al.Comparison of BALF concentrations of ENA-78 and IP10 in patients with idiopathic pulmonary fibrosis and nonspecific interstitial pneumonia.Respir Med，2005，99:1145-1151.

6 Itoh H，Nasu K，Nishida M，et al.Human oviductal stromal fibroblasts，but not oviductal epithelial cells，express Toll-like receptor 4:the site-specific mucosal immunity of the human fallopian tube against bacterial infection.Am J Reprod Immunol，2006，56:91-101.

7 Chegini N，Luo X，Pan Q，et al.Endometrial expression of epithelial neutrophil-activating peptide-78 during the menstrual cycle or in progestinonly contraceptive users with breakthrough bleeding and the influence of doxycycline therapy.Hum Reprod，2007，22:427-433.

8 Nishida M，Nasu K，Fukuda J，et al.Down-regulation of interleukin-1 receptor type 1 expression causes the dysregulated expression of CXC chemokines in endometriotic stromal cells:a possible mechanism for the altered immunological functions in endometriosis.J Clin Endocrinol Metab，2004，89:5094-5100.

9 Wunder DM，Mueller MD，Birkhuser MH，et al.Increased ENA-78 in the follicular fluid of patients with endometriosis.Acta Obstet Gynecol Scand，2006;85:336-342.

10 馮利霞，徐韶杰，孔翠花.子宮內膜異位癥腹腔液中IL-2、IL-6的變化.河北醫藥，2010，32:1722-1723.