Wnt2與β-catenin蛋白在食管癌中的表達特點及病理意義

李 韶，張云慶，徐 飛

(1.鞍山市第四醫院 內科，遼寧 鞍山 114034；2.大連醫科大學 解剖學教研室，遼寧 大連116044)

食管癌發生與發展涉及多基因、多途徑的改變[1-2]。篩選特異敏感的分子指標用于食管癌的人群篩查，將對早期診斷和治療食管癌，降低食管癌罹患及減少患者死亡、延長生存時間均有重要的意義。Wnt/β-catenin途徑是經典的Wnt信號途徑，其關鍵蛋白分別為Wnt蛋白、β-catenin 蛋白等。近年來諸多研究業已證實，Wnt2及β-catenin 與腫瘤的發生發展、侵襲轉移以及患者預后不良關系密切。胃癌、肝癌、結直腸癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌和乳腺癌等癌癥中均已證實上述結論[3-5]，即Wnt與β-catenin正常表達的罹癌患者，其預后要優于那些Wnt與β-catenin表達上調的病人。提示Wnt與β-catenin表達失調可作為腫瘤惡性程度以及患者預后預測的生物標志物和早期診斷的重要候選分子指標。本研究通過組織芯片免疫組織化學技術，以癌旁相對正常食管上皮、癌前病變、食管癌組織為研究對象，檢測Wnt2及β-catenin在上述組織中的表達情況和分布特點，分析其表達與食管癌各病理特征之間的關系。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

9例癌旁相對正常食管組織(癌旁正常組)、38例癌前病變(癌前病變組)及83例食管癌(食管癌組)標本均選自鞍山市腫瘤醫院1999-2008年未經放化療的診斷明確的食管癌手術切除標本。其中83例腫瘤患者中，男性70例，女性13例，年齡31～78歲，平均年齡(59.8±10.83)歲。鱗癌68例，腺癌15例，高分化27例，中分化40例，低分化16例，無淋巴結轉移39例，有淋巴結轉移44例。

1.2 實驗方法

石蠟組織制成微陣列，采用免疫組織化學染色(Immunohistochemical，IHC)法，按照SP試劑盒說明書進行免疫組化染色，抗體為山羊抗人Wnt2與兔抗人β-catenin (Santa Cruz，1:100)，DAB顯色，蘇木精復染，鏡下觀察。

1.3 結果判定

染色陽性反應為呈現棕黃色顆粒，Wnt定位于細胞漿中，β-catenin在細胞漿及胞核中。判定的標準是：胞漿無著色的為陰性(-)；與未加一抗的陰性對照比較，著色略深的為弱陽性(+)，較深的為陽性(++)，明顯加深的則為強陽性(+++)[6]。其中前二者記為低表達，后二者為高表達。本文將高表達記為表達。

1.4 統計學方法

采用SPSS11.0統計軟件，應用Kruskal-Wallis、Mamm Whitney及相關性Spearmen的檢驗方法，對Wnt2與β-catenin在不同病變組織中的表達、分布與相關關系進行統計分析，以P<0.05為差異有顯著性意義。

2 結 果

2.1 Wnt2與β-catenin在不同病變組織中的表達特點

免疫組織化學染色結果見表1和圖1。從癌旁相對正常組織、癌前病變到食管癌組織，Wnt2表達率分別為22.2%、50.0%和72.3%；β-catenin蛋白的表達率分別為33.3%、47.4%和69.9%，二者均呈現逐漸升高的趨勢，差異有顯著性意義(P<0.05)。食管癌組同癌旁正常組、癌前病變組比較，差異均有顯著性意義(P<0.05)，食管癌癌旁正常組和癌前病變組比較，差異無顯著性意義(P>0.05)。鱗癌中兩種蛋白表達率(77.9%、75.0%)均顯著高于腺癌(46.7%、46.7%)，P<0.05。

2.2 Wnt2與β-catenin的表達與腫瘤臨床病理參數的關系

Wnt2與β-catenin的表達在性別、年齡、分化程度和病變大小的比較中，差異無顯著性意義(P>0.05)。但兩者在食管癌淋巴結轉移組表達率(86.4%、81.8%)顯著高于無淋巴結轉移組(56.4%、56.4%) (P<0.05)；侵潤深度 T3、4組表達率(81.0%、82.8%)也明顯高于T1、2 組(52.0%、40.0%)(P<0.05)；Wnt2蛋白表達在臨床I-II期及III-IV期患者標本中分別為62.8%和82.5%,后者顯著高于前者(P<0.05)，β-catenin表達在臨床I-II期(76.7%)高于III-IV期(62.5%)，但差異無顯著性意義(P>0.05)。見表2。

表1 不同病變食管癌組織中Wnt2與β-catenin的表達Tab 1 Wnt2 and β-catenin expression in different EC pathological lesion n(%)

Wnt2 β-catenin圖1 Wnt與β-catenin在不同病變組織中的表達Fig 1 Wnt and β-catenin expression in different tissues

2.3 Wnt2與β-catenin表達的相關性

Wnt2低表達時，β-catenin也低表達的有42例，高表達有7例；Wnt2高表達時，β-catenin也高表達的有72例，低表達有7例。經Spearman相關性分析顯示,二者呈正相關關系(P<0.05，r=0.740)。

3 討 論

癌基因和抑癌基因的發現，細胞信號通路的闡明，極大豐富了人們對細胞癌變機制的認識。目前報道中，Wnt途徑異常存在于人類多種腫瘤,如結直腸腺瘤和癌、乳腺癌、子宮內膜癌、胃癌、肝細胞癌、黑色素瘤、甲狀腺癌、內皮樣卵巢癌、前列腺癌、滑膜肉瘤、髓母細胞瘤等[3-4]。本研究的結果充分支持了Wnt信號途徑在食管癌中促癌生長、侵襲的作用。Wnt2、β-catenin蛋白在食管癌癌旁、癌前病變及癌組織中的表達率分別從22.2%、33.3%上調至72.3%、69.9%，差異具有顯著性意義，且Wnt2及β-catenin與食道癌侵襲轉移密切相關，淋巴結轉移組二者表達率分別為79.5%和81.8%，明顯高于未見淋巴結轉移組(56.6%、56.6%)，浸潤深度侵及漿膜者兩蛋白表達率(81.0%、82.8%)亦顯著高于未侵及漿膜層者(52.0%、40.0%)，這說明Wnt2、β-catenin蛋白可成為潛在的判斷食管癌病變程度以及預測腫瘤浸潤趨勢的分子指標，具有重要的病理學意義。

Wnt途徑是細胞發育和調節生長的一個關鍵途徑，不僅在胚胎發育中，在細胞癌變過程中亦具有重要作用[3,7]。這種變化可由Wnt基因本身或通路中任何成分發生改變而引發。Wnt途徑的異常激活大致有以下幾種情況：組成Wnt途徑的蛋白、轉錄因子或基因被破壞或變異，導致該途徑關閉或局部途徑異常活躍；過多Wnt信號使整個途徑異常活躍，細胞進行不必要的增殖；細胞內其他因素通過Wnt

表2 Wnt2與β-catenin的表達與臨床病理參數的關系Tab 2 The relationship between Wnt2, β-catenin expression and clinicopathological agents (n)

途徑來刺激或誘發細胞乃至機體產生異常反應。最終結果是Wnt 途徑的靶基因組成性激活及細胞增生的失控。Fu等[8]認為間質成纖維細胞分泌的Wnt2促進了Wnt途徑的激活從而導致了腫瘤的進展，Sato等[9]的研究則顯示Wnt抑制劑在腫瘤免疫治療中作用顯著，而體外SiRNA干預Wnt表達的實驗顯示腫瘤細胞對化療藥物敏感性有所增強，這些都為腫瘤治療提供了新的方法和思路。

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