保產達生片質量標準初步試驗研究

徐靜逍， 徐學艾， 熊麗娟

(云南中醫學院， 云南 昆明 650500)

保產達生片為昆明市制劑中心生產的醫院制劑，保產達生片主要由當歸(Angelica sinensis(Oliv.)Diels)、黃芪(Astragalus memeranaceus(Fisch.)Bge.var)等藥材組成，具有榮養氣血陰精，充盈胞脈沖任，強健母體的功效。臨床用于治療胎漏、胎動不安、滑胎、胎萎不長。當歸為方中主要藥物，具有補血活血，滋養氣血，調經止痛，潤腸通便等功效，古人稱之為血中之圣藥。佐之以補則補，能養營養血，補氣生精，安五臟，強形體，益神志，凡有形虛損之病，無所不宜。阿魏酸(Ferulic Acid)是當歸(Angelica sinensis(Oliv.)Diels)植物中的主要活性成分。為了更好地控制該制劑的質量，保證臨床用藥安全有效，本文探索建立本制劑定性鑒別當歸的薄層色譜(thin layer chromatography，TLC)法；采用高效液相色譜法(high performance liquid chromatog raphy，HPLC)法測定阿魏酸的含量。實驗結果表明本法簡便、快捷、準確，可用于該制劑的質量控制參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 戴安U3000高效液相色譜儀(HP-1110四元泵；HP-1 110 DAD檢測器；HP C13.(Chen station化學工作站，Agilent公司)；KQ3200超聲波清洗器(超聲功率120W，工作頻率40 KHz；昆山市超聲儀器有限公司)；UV-1601紫外分光光度儀(日本津島)；AE240分析天平。

1.2 試藥 保產達生片 (片劑)規格：0.3 g/片，批號：100304為昆明市中醫醫院制劑室生產〗阿魏酸對照品(純度均>98%.中國藥品生物制品檢定所，批號0773-9910)，對照藥材當歸(批號：YP20101103 云南白藥千草堂藥材公司 產地：甘肅)，甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

當歸的鑒別 取本品5 g，研碎，加石油醚(60～90℃)15 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)[1]試驗。吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。試驗結果見圖1：

1.陰性對照;2.當歸藥材;3.供試品

3 含量測定

高效液相色譜法(附錄Ⅵ D)[1]測定。

3.1 色譜條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：乙腈-0.085%磷酸(17∶83)；流速：1.0 mL/min；檢測波長316 nm；理論板數按阿魏酸峰計算應不低于5000。柱溫：室溫。進樣量：10 uL。

3.2 溶液的制備

3.2.1 供試品溶液 取重量差異項下的本品20片，研細，取約1.0 g，精密稱定。置具塞錐型瓶中，精密加入70%甲醇35 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min(功率100 W，頻率40 kHz)，放冷，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

3.2.2 對照品溶液 精密稱取阿魏酸對照品10 mg，置50 mL棕色量瓶中，加70%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.21 mg/mL的阿魏酸儲備液，精密量取3 mL，置50 mL棕色量瓶中，加70%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.0126 mg/mL的阿魏酸對照品溶液。

3.2.3 陰性對照溶液 按處方組成，制備不含當歸的陰性模擬制劑，按上述供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

3.3 系統適用性試驗 精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 uL，按上述色譜條件分別進樣測定，按外標法以峰面積計算供試品中阿魏酸的含量。結果見圖2.由圖可見，阿魏酸峰保留時間約 7.30 min，陰性對照溶液在阿魏酸峰位置無干擾峰，阿魏酸峰與其他組分可基本分離。理論塔板數按阿魏酸峰計算不低于5000。

a.對照品

b.供試品

c.陰性對照

4.4 線性關系考察 阿魏酸：精密吸取4.2.2項下阿魏酸對照品溶液(0.0126 mg/mL)，分別進樣2、5、7、10、15、20 μL，以進樣量(mg)為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，繪制標準曲線(見圖3)。試驗結果見表 1

得回歸方程：Y=82.629 X﹢0.037 r=0.9999

表1 線性關系考察

結果表明阿魏酸在0.0252～0.2520mg范圍內與峰面積具有良好的線性關系。

圖3 標準曲線圖

4.5 精密度試驗 精密吸取阿魏酸對照品溶液10 mL重復進樣連續測定5次，得峰面積的積分值RSD為0.31%，說明儀器的精密度良好。試驗結果見表2。

表2 精密度試驗結果

4.6 重復性試驗 按供試品測定方法測定，對同一批樣品(批號：100304)重復測定5份，結果保產達生片的平均含量為25.600 mg/片，RSD為0.61%，表明方法的重復性良好。試驗結果見表3

表3 重復性試驗結果

4.7 穩定性試驗 取供試品溶液(批號：100304)分別于配制后0、1、2、4、8 h依樣品測定法測定，記錄色譜圖(見圖4)。結果阿魏酸峰面積的RSD為0.31 %，表明供試品溶液在8 h內基本穩定。試驗結果見表4

表4 穩定性試驗結果

4.8 加樣回收率試驗 取同一批號(批號：100304)已知含量為0.998 mg/g樣品約0.25 g，共5分，精密稱定。分別精密加入阿魏酸對照品溶液(精密稱取阿魏酸對照品12mg，置50 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇使溶解，并稀釋得濃度為0.2400 mg/mL的溶液)1 mL，即0.2400 mg，再精密加入70%甲醇29 mL，進樣測定，計算回收率。試驗結果見表5，表明方法可行。

a.0 h色譜圖

b.8 h色譜圖

表5 加樣回收率試驗結果

4.9 樣品測定 分別精密稱取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀中，測定含量，計算阿魏酸的總量，即得。按外標一點法以峰面積測得樣品中阿魏酸的含量為50.875～51.296 mg/g。本制劑擬以阿魏酸的含量作為指標性成分，暫定保產達生片主要藥物當歸的阿魏酸含量不低于50 mg/g。試驗結果見表6。

表6 樣品測定試驗結果

5 討論

本品的薄層色譜鑒別通過多次實驗，斑點清晰，結果明顯。制劑中各藥的供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上至少顯一個相同顏色的斑點，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，而所有剛性樣品在此相應的化置上沒有斑點顯示，表明樣品中其他組分對鑒別無干擾。

當歸為保產達生片中的主要藥物，主要有效成分為阿魏酸，故選擇它作為本制劑的含量測定指標成分。

阿魏酸不穩定。遇光和熱易分解，據文獻報道。盛有阿魏酸對照品溶液的棕色瓶用黑紙包好放在4℃的環境中2周內基本穩定，在溶劑中加入1 mL流動相(含有酸性物質冰醋酸)，放置一月仍較穩定。故阿魏酸對照品容易置于棕色瓶中避光保存。

考察了超聲和加熱回流2種樣品提取方式，根據試驗結果，將提取方式選為超聲處理30 min，同時還考察了提取溶媒的種類、用量和提取時間，并進行了系統的分析和討論，結果表明本法簡便、快捷、專屬性強、重現性好，可用于保產達生片的質量控制。

[1]國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部[S].北京：化學工業出版社，2005：附錄Ⅵ B.