HPLC-ELSD法測(cè)定銀杏酮酯軟膠囊中萜類內(nèi)酯的含量

白娟，張潔，李成網(wǎng)

(安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院，合肥 230061)

HPLC-ELSD法測(cè)定銀杏酮酯軟膠囊中萜類內(nèi)酯的含量

白娟，張潔，李成網(wǎng)

(安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院，合肥 230061)

建立銀杏酮酯軟膠囊中萜類內(nèi)酯含量的測(cè)定方法。采用HPLC-ELSD法，色譜條件為Diamonsil C18柱(250mm×4.6 mm，5μm)，正丙醇-四氫呋喃-水（體積比1∶25∶74）為流動(dòng)相，ELSD漂移管溫度107℃，空氣流速3.0L/min。銀杏內(nèi)酯 A、銀杏內(nèi)酯 B、銀杏內(nèi)酯 C、白果內(nèi)酯分別在 4.008 8～20.044 0，3.928 4～19.642 0，3.834 8～19.174 0，3.788 8～30.3104 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)分別為 0.999 2，0.999 9，0.999 5，0.999 8，回收率分別為98.48%，97.62%，97.54%，97.24%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 0.99%，1.13%，1.17%，0.83%(n=5)。該方法準(zhǔn)確可靠，可用于銀杏酮酯軟膠囊的質(zhì)量控制。

高效液相色譜；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；銀杏酮酯軟膠囊；萜類內(nèi)酯

銀杏酮酯軟膠囊是由原料銀杏酮酯和聚乙二醇400和甘油等制成的軟膠囊劑，主要含有銀杏黃酮和萜類內(nèi)酯等有效成分，能夠活血化瘀、增加腦血流量，有效改善腦營養(yǎng)及促進(jìn)腦代謝等功能。為有效控制該制劑的質(zhì)量，筆者采用HPLC-ELSD法測(cè)定其萜類內(nèi)酯的含量，該法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1100型，附帶化學(xué)工作站（chimstation system工作站），美國Agilent公司；

檢測(cè)器：A lltech2000ELSD型；美國奧泰公司;

電子天平：AD-2 型，0.001 mg，美國 PE 公司；

電子天平：BP210S 型，0.1 mg，德國賽多利斯儀器公司；

銀 杏 酮 酯 軟 膠 囊（批 號(hào) 為 080412，080413，080414）和陰性制劑：蕪湖悅盛制藥有限公司；

銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C及白果內(nèi)酯對(duì)照品：批號(hào)分別為0862-200004，110863-200305，110864-200304，110865-200404，中國藥品生物制品檢定所；

甲醇：色譜純；

實(shí)驗(yàn)用水：重蒸餾水；

一般微信公眾號(hào)每周推送3-4次新消息，每次推送2-3條消息，即每個(gè)月推送24-48條消息比較容易引起讀者的興趣。根據(jù)對(duì)288個(gè)樣本月推送頻率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)表明，73.9%的調(diào)查樣本月推送頻率不足2條,僅有“SHUTCM麒麟龍舟隊(duì)”、“張偉毽球工作室”、“摔跤”3個(gè)微信公眾號(hào)月推送頻率超過24條。通過對(duì)調(diào)查樣本推送消息的時(shí)間特征進(jìn)行梳理發(fā)現(xiàn)，少數(shù)民族傳統(tǒng)體育微信公眾號(hào)的存續(xù)周期越長(zhǎng)，其月推送頻率就越低，其根本原因在于目前少數(shù)民族傳統(tǒng)體育微信公眾號(hào)由個(gè)人運(yùn)營的比例較高，而由于時(shí)間、個(gè)人技術(shù)儲(chǔ)備、收集消息來源渠道等因素的制約，部分個(gè)人賬號(hào)一般只在開通的早期能推送消息。

實(shí)驗(yàn)所用其它試劑均為分析純。

1.2 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱 (250mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：正丙醇-四氫呋喃-水（體積比1∶25∶74）；柱溫：30℃；漂移管溫度：107℃；空氣流速：3.0L/m in ；進(jìn)樣量：10μL。

1.3 對(duì)照品溶液及供試品溶液制備

(1)對(duì)照品溶液

精密稱取白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C對(duì)照品適量，分別加入甲醇制成濃度為2，1，1，1 mg/m L 的溶液。

(2)供試品溶液

取銀杏酮酯軟膠囊內(nèi)容物適量，精密稱定，加水10m L，加入2%的鹽酸2滴，用乙酸乙酯振搖提取 4 次（用水量分別為 15，10，10，10m L），合并提取液，用20m L 5%乙酸鈉溶液洗滌。分取乙酸鈉溶液，用10m L乙酸乙酯洗滌，合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗滌2次，每次20m L，分取水洗液，用乙酸乙酯10m L洗滌，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，殘?jiān)帽芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 m L的量瓶中，加丙酮至刻度，搖勻，用 0.45 μm 濾膜過濾，即得。

(3)陰性對(duì)照品溶液

2 結(jié)果與討論

2.1 專屬性試驗(yàn)

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，色譜圖分別見圖1-3。由圖1-3可知，各內(nèi)酯成分可基線分離，銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B各色譜峰之間分離度大于1.5，陰性對(duì)照無干擾，方法專屬性良好。

圖1 對(duì)照品高效液相色譜圖

圖2 供試品高效液相色譜圖

圖3 陰性對(duì)照干擾高效液相色譜圖

2.2 流動(dòng)相及其配比

通過對(duì)甲醇-四氫呋喃-水、甲醇-水、正丙醇-四氫呋喃-水等多種流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫比較試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)正丙醇-四氫呋喃-水（體積1∶25∶4）溶液的系統(tǒng)分離效果最好，且柱效高。

2.3 檢測(cè)器漂移管溫度及空氣流速

ELSD兩個(gè)關(guān)鍵的參數(shù)為檢測(cè)器的飄移管溫度和空氣流速，對(duì)飄移管溫度進(jìn)行了選擇。在空氣流速固定的條件下，溫度從95～125℃，每隔3℃進(jìn)樣1次，觀察信噪比。結(jié)果表明，在飄移管溫度107℃，空氣流速3.0L/m in的條件下，有較低的信噪比和較高的信號(hào)響應(yīng)值。

2.4 萃取次數(shù)

制備供試品溶液用乙酸乙酯萃取萜類內(nèi)酯時(shí)，為保證充分提取總萜類內(nèi)酯成分，對(duì)萃效果進(jìn)行了5次考察，前3次萃取液中均含有萜類內(nèi)酯，后兩次萃取液均未檢出萜類內(nèi)酯成分，為保證萜類內(nèi)酯成分提取完全，確定萃取次數(shù)為4次。

2.5 線性方程

分別精密吸取銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯 C 對(duì)照品溶液 4，8，12，16，20μL ；白果內(nèi)酯對(duì)照品溶液 2，4，8，12，16 μL。注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，分別以進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)(x)為橫坐標(biāo)，峰面積的自然對(duì)數(shù)(y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。各成分線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍見表1。

表1 回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀測(cè)定，重復(fù)6次。銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯色譜峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 1.37%，1.52%，1.49%，1.33%，表明該法精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的樣品5份，分別按供試品溶液配制方法制備樣品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程分別計(jì)算銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯含量。銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯含量測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.56%，1.21%，1.89%，0.96%，表明該法重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液6份，分別于0，2，4，6，8，10h進(jìn)樣分析。銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 1.44%，1.27%，1.73%，1.76%，表明供試品溶液在10h內(nèi)萜類內(nèi)酯含量無明顯變化，穩(wěn)定性良好。

2.9 回收試驗(yàn)

精密稱取已知內(nèi)酯含量的樣品5份，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，分別精密加入適量的的銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯對(duì)照品溶液，進(jìn)樣分析，結(jié)果見表2。

2.10 樣品測(cè)定

取3批銀杏酮酯軟膠囊（批號(hào)分別為080412，080413，080414），按 1.3 方法制備樣品溶液，在 1.2色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3。樣品中的其它物質(zhì)對(duì)萜類內(nèi)酯的測(cè)定無干擾。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 結(jié)語

銀杏酮酯中萜類內(nèi)酯無C＝C雙鍵和共軛結(jié)構(gòu)，無法采用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，本實(shí)驗(yàn)采用HPLCELSD法，在選定的色譜條件下，測(cè)定銀杏酮酯軟膠囊中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯的含量，分離良好且陰性對(duì)照溶液無干擾。該法重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確可靠，可用于銀杏酮酯軟膠囊的質(zhì)量控制。

表2 回收試驗(yàn)結(jié)果

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010:296.

［2］劉艷,王艷,張玉萍.HPLC－ELSD法測(cè)定銀杏酮酯膠囊中萜類內(nèi)酯的含量［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，28(6):63-65.

［3］熊穎,袁偉彬,吳雪茹,等.銀杏酮酯自微乳化軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中藥材，2009，32(4):610-612.

［4］郭洪,羅瑛,余國華,等.銀杏磷脂膠囊的制備與質(zhì)量控制［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28(7):574-575.

［5］李欽,馬鳳仙,程鐵峰.HPLC－ELSD法測(cè)定銀杏酮酯滴丸中萜類內(nèi)酯的含量［J］.中成藥，2007，29(6):836-839.

［6］張亞中,周亞球,王娟,等.HPLC－ELSD法測(cè)定銀杏葉軟膠囊中萜類內(nèi)酯的含量［J］.中成藥，2005，27(1):22-24.

Determ ination of Terpene Lactones in Yinxingtongzhi Soft Capsule by HPLC–ELSD M ethod

Bai Juan，Zhang Jie，Li Chengwang
（Anhui Academy of Medical Sciences，Hefei 230061，China）

A method for the determ ination of terpene lactones in Yinxingtongzhi soft capsules was established.HPLC-ELSD method was used in the quantitative analysis by using a Diamonsil C18(250mm×4.6 mm，5μm)column. The mobile phase was n-propanol-tetrahydrofuran-water(volume ratio was 1∶25∶74)，ELSD evaporator tube temperature was 107℃，and air fl ow rate was 3.0L/min. The calibration curve had good linear relationship in the range of 4.008 8-20.044 0, 3.928 4-19.642 0, 3.834 8-19.174 0, 3.788 8-30.3104 μg for ginkgolide A，ginkgolide B，ginkgolide C and bilobalide, respectively (r=0.999 2，0.999 9，0.999 5，0.999 8). The recoveries were 98.48%，97.62%，97.54%，97.24%，and RSD were 0.99%，1.13%，1.17%，0.83%(n=5), respectively. This method was accurate and reliable，it can be used for the quality control of Yinxingtongzhi soft capsules.

HPLC; ELSD; Yinxingtongzhi soft capsule; terpene lactone

065707+2

A

1008-6145(2012)01-0064-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2012.01.020

聯(lián)系人：白娟；E-mail:baijuan8605@163.com

2011-11-23