不同產地青果中沒食子酸含量的比較研究

廖 婉,黃金珠,王繼森,徐曉秋,游 宇,傅超美

(1.成都中醫藥大學藥學院藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地

中藥材標準化教育部重點實驗室,四川成都 611137;2.成都市食品藥品檢測中心,四川成都 610045)

0 引 言

青果為橄欖科植物橄欖(Canarium albumRaeusch)的干燥成熟果實,具有清熱解毒、利咽、生津等功效,可用于治療咽喉腫痛、咳嗽痰黏、煩熱口渴、魚蟹中毒等癥[1].青果主產于四川、福建、廣東等地,但全國各地品種繁多,劃分標準不明確,容易混淆.青果在我國南方各地民間用量很大,它既為可食鮮果,又為藥膳、飲品、中藥的常用資源[2].隨著科研人員對青果食用與藥用研究的深入,青果的應用開發呈現出巨大的發展潛力.目前,1963年版～2005年版《藥典》均無青果指標性化學組分的定性和定量分析方法,而2010年版《藥典》也只增加了鑒別(理化鑒定)、檢查和浸出物3項,其含量測定尚為空缺,質量評價體系不完善,難以科學控制青果內在質量,其資源的開發與利用受到很大限制.研究發現,青果中沒食子酸是其主要有效成分[3],據此,本研究采用高效液相色譜法對26批不同產地青果中沒食子酸的含量進行比較研究,以期為青果的質量控制和合理開發利用提供科學依據.

1 儀器與材料

1.1 儀 器

實驗所用儀器包括:Waters 2695-2487高效液相色譜儀,Waters2487檢測器,Empower Pro色譜工作站,色譜柱為 Thermo Hypersil BDS C18柱(250×4.6 mm,5μm);Mettler AE240電子分析天平(Mettler Inc.);FA1104電子分析天平(上海天平儀器廠); K Q-500E型醫用超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司);數顯恒溫水浴鍋HH-4(國華電器有限公司).

1.2 材 料

表1 青果藥材來源

實驗所用材料包括:青果分別購于四川、福建、廣東、云南、安徽等地藥材市場或飲片公司,經鑒定為橄欖科植物橄欖的干燥成熟果實(見表1);沒食子酸對照品(批號0831-9501,中國藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純(Fisher Inc.),水為超純水,其余試劑均為分析純.

2 方法與結果

2.1 對照品與供試品溶液制備

精密稱取沒食子酸對照品適量,置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,配制成0.104 mg/mL的對照品溶液.

精密稱取青果藥材粉末5 g,置錐形瓶中,精密加入80%甲醇溶液50 mL,稱定重量,超聲提取20 min,放冷,再稱定重量,用80%甲醇溶液補足減失的重量,濾過,取續濾液5 mL至10 mL量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,得供試品溶液.

2.2 色譜條件

實驗的色譜條件為:色譜柱為 Thermo Hypersil BDS C18柱(250×4.6 mm,5μm),流動相為甲醇—0.1%磷酸(5∶95),流速1.0 mL/min,柱溫30℃.檢測波長254 nm,理論塔板數按沒食子酸峰計應不低于2 000.在上述色譜條件下,樣品溶液色譜圖中未見其他組分和輔料對測定組分沒食子酸的干擾(見圖1).

圖1 HPLC色譜圖

2.3 線性關系考察

分別精密吸取沒食子酸對照品溶液2、5、10、15、20μL注入高效液相色譜儀中,在上述色譜條件下測定,重復進樣2次,記錄色譜圖,測定峰面積值.以峰面積平均值(y)對進樣量(x)進行線性回歸,繪制標準曲線,計算得到回歸方程為,

數據表明,沒食子酸在0.0208～0.208 mg·mL-1范圍內呈現良好的線性關系.

2.4 精密度實驗

精密吸取沒食子酸對照品液,連續進樣6次,其RSD%為0.24%.結果表明,實驗所用儀器精密度良好.

2.5 穩定性實驗

精密吸取供試品溶液分別于0、2、4、6、8、12、18 h進樣10μL,測定峰面積,其RSD為0.27%.結果表明,樣品在18 h內穩定性良好.

2.6 重復性實驗

平行精密稱取同一批樣品5份,按“2.1”項供試品溶液制備項下操作,分別進樣10μL,計算求得平均含量為1.695 mg·g-1,其RSD為1.75%.結果表明,實驗方法重復性良好.

2.7 加樣回收實驗

精密稱取已知含量的樣品(1.702 mg·g-1)6份,各約2.5 g,分別精密加入沒食子酸對照品溶液(1.064 mg·mL-1)4 mL,按供試品項下操作并按含量測定方法進行測定,結果如表2所示.計算平均加樣回收率為100.5%,其RSD為2.75%,表明樣品回收率符合要求.

表2 加樣回收率試驗結果

2.8 樣品測定

取26批不同產地青果制備的供試品溶液,按“2.2”項色譜分離條件,進樣10μL,測定峰面積,計算含量,結果如表3所示.

3 結論與討論

由表3數據可看出:26批青果中沒食子酸的平均含量為1.752%,其中,沒食子酸含量最高的是產自四川瀘州合江甘雨村種植基地的青果,其沒食子酸含量為2.293 mg·g-1,福建產的青果沒食子酸含量次之,其他產地青果沒食子酸含量也均超過了1.0 mg·g-1;產于四川和福建的青果,沒食子酸含量普遍較其他產地高;產于四川的二白圓、自來圓、檀香和大梭子,云南的二白圓,安徽的檀香和大梭子,福建的自來圓、檀香和大梭子沒食子酸含量較高,均高于2.0 mg·g-1.表3數據也顯示:不同產地的青果中沒食子酸的含量存在明顯差異;同一產地,由于品種和采收期的不同,青果中沒食子酸的含量也存在一定差異.

表3 沒食子酸含量測定結果(n=3)

沒食子酸是青果中含量較多的化學成分之一,研究人員通常以沒食子酸作為指標成分對青果進行質量控制研究[4-5].本研究利用高效液相色譜法,對產于四川、福建、廣東、云南、安徽等地所產青果測定了其沒食子酸含量.實驗結果表明,樣品中各組分的色譜峰基本達到基線分離.該測定方法穩定、快速、重現性好、靈敏度高,實驗數據可靠,可為《藥典》下一步修訂青果項下質量標準提供科學參考依據.

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社,2010.

[2]廖婉,游宇,張臻,等.中藥青果在現代美容領域的研究進展[J].中藥與臨床,2012,3(2):60-62.

[3]王恒,宋良科,湯昊.不同種質青果清熱利咽化學組分的研究[J].中國中藥雜志,2010,35(6):669-672.

[4]諶立巍,陳思敏,吳小唯,等.兩種青果中沒食子酸和總鞣質的含量測定[J].內蒙古中醫藥,2008,27(5):51-52.

[5]何志勇,夏文水.中藥青果化學成分及藥理研究進展[J].中成藥,2006,28(7):1024-1026.