HPLC法測定通脈養心丸中五味子醇甲的含量*

徐道情，閆曉楠，劉稚菲，耿 彤

(天津中新藥業集團股份有限公司，天津 300193)

HPLC法測定通脈養心丸中五味子醇甲的含量*

徐道情，閆曉楠，劉稚菲，耿 彤

(天津中新藥業集團股份有限公司，天津 300193)

目的建立HPLC法測定通脈養心丸中五味子醇甲含量的方法。方法色譜柱:Agilent XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.1%甲酸溶液(39∶61);檢測波長:250 nm;流速:1.0 ml/min。結果:線性范圍為 0.01 654 ～2.068 μg(r=0.999 9)，平均回收率為99.64%，RSD為0.81%。結論:方法穩定、可靠，可作為該制劑的質量控制方法。

通脈養心丸，五味子醇甲，HPLC

通脈養心丸收載于《中國藥典》2010年版一部，由地黃、雞血藤、麥冬、甘草、五味子、桂枝等11味藥組成，具有養心補血，通脈止痛的作用，用于治療胸痹心痛，心悸怔仲，心絞痛，心律不齊。其中五味子滋養陰血、益氣養陰，是處方中主要藥味。五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Baill的干燥成熟果實，其中含有揮發油、有機酸、木脂素、三萜、倍半萜及多糖等多種化學成分［1?。近代研究證明五味子中木脂素成分有加強和調節心肌細胞和心臟、腎小動脈的能量代謝、改善心肌營養和功能等作用，是五味子中最主要的藥理活性成分［2?。五味子醇甲是五味子中木脂素類的主要成分，同時也是《中國藥典》2010年版一部“五味子”含量測定項下的指標成分。本研究建立HPLC法測定通脈養心丸中五味子醇甲含量，結果準確，重復性好，快速簡便，可作為通脈養心丸質量標準的定量方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司生產)。METTLE MS－105型電子天平(德國梅特勒公司生產)。五味子醇甲對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號857－200102);通脈養心丸(為中新藥業集團股份有限公司樂仁堂制藥廠提供，濃縮丸，規格為每 10 丸重 1 g，批號 C107413、C107414、C107418);乙腈、甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司)，水為純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.1%甲酸溶液(39∶61);檢測波長:250 nm;流速:1.0 ml/min;進樣量:10 μl;理論塔板數按五味子醇甲峰計算應不低于12 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取五味子醇甲對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含16 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，取約2.5 g，精密稱定，精密加入甲醇 25 ml，密塞，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方和工藝制備不含五味子的樣品，按供試品溶液制備方法制備。

2.3 空白試驗 精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液10 μl，依“2.1”項下色譜條件進樣，測定無干擾，見圖1。

圖1 對照品(A)供試品(B)陰性對照(C)HPLC色譜圖

2.4 標準曲線的制備 取五味子醇甲對照品適量，精密稱定，分別加甲醇配制成 0.001 654、0.004 136、0.008 272、0.016 54、0.041 36 和 0.206 8 mg/ml的對照品溶液。分別精密吸取上述6種濃度的溶液各10 μl，注入液相色譜儀，按照“2.1”項下中色譜條件測定五味子醇甲峰面積，以對照品系列濃度為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，并以最小二乘法計算得標準曲線為:Y=1 939.8 X+2.035 4(r=0.999 9)，結果顯示五味子醇甲對照品在0.016 54～2.068 μg的范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 儀器精密度試驗 取同一供試品溶液，按以上色譜條件重復進樣6次，測定峰面積，結果 RSD為1.16%(n=6)。

2.6 樣品溶液的穩定性試驗 取供試品溶液，按以上色譜條件在 0、2、4、6、8、10、12 h 分別進樣測定峰面積，供試品溶液峰面積RSD為0.69%。結果表明供試品溶液在12 h內基本無變化，穩定性良好。

2.7 重復性試驗 精密稱取同一批號樣品6份，制備供試品溶液，測定峰面積并計算五味子醇甲含量，結果五味子醇甲平均含量為0.1687 mg/g，RSD為1.12%(n=6)。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量樣品6份，每份約0.5 g，精密加入五味子醇甲對照品適量，制備加樣回收溶液，測定峰面積并計算含量，結果表明平均回收率為99.64%，RSD 為0.81%，見表1。

表1 回收率試驗結果

2.9 樣品含量測定 取三批供試品，按“2.2.2”項下操作。精密吸取供試品溶液與對照品溶液10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算樣品的含量。測得3批供試品中五味子醇甲的平均含量分別為 0.168 7、0.178 2 和0.177 3 mg/g。

3 討論

3.1 流動相的選擇 根據文獻報道，采用乙腈－0.1%甲酸溶液(39∶61)、乙腈 －0.05% 磷酸(40∶60)、甲醇－水(35∶65)等不同流動相組成與配比實驗［3－5?，結果乙腈 －0.1%甲酸溶液(39∶61)的分離效果最佳，保留時間適中，故選用為流動相。

3.2 色譜柱的選擇 使用不同的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱進行測定，如Agilent SB－Aq C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm)、Phenomenex Luna C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)色譜柱，其色譜峰峰型和分離度良好，測定結果均不受影響，證明本方法耐用性良好。

通過方法學考察建立了高效液相色譜法測定通脈養心丸中五味子醇甲含量的方法。本方法簡便易行，結果準確，重復性好，可作為通脈養心丸質量標準的定量方法。

1 官艷麗，曹沛，郁開北，等.北五味子化學成分的研究.中草藥，2010，37(2):185

2 杜國成.五味子化學成分及藥理研究進展.中國醫藥科學，2011，1(20):32

3 廖彩霞，戴德雄，諸葛周.HPLC法測定參芪五味子分散片中五味子醇甲.中草藥，2012，43(3):505

4 秦建平，吳建雄，畢宇安，等.HPLC同時測定益心舒片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹參酮Ⅱ－A的含量.中國實驗方劑學雜志，2012，18(2):77

5 張廣春，陳明明.高效液相色譜法測定安神養心丸中五味子醇甲的含量.時珍國醫國藥，2011，22(7):1783

HPLC determination of schizandrol A in Tongmai Yangxin Pill

Xu Daoqing，Yan Xiaonan，Liu Yafei，Geng Tong
(Tianjin Zhongxin Pharmaceutical Group Corporation Ltd，Tianjin 300193)

Objective:To establish an HPLC method to determine Schizandrol A in Tongmai Yangxin Pill.Methods:schizandrol A was assayed on an Agilent XDB(250 mm ×4.6 mm，5 μm)column;the mobile phase composed of acetonitrile －0.1%formic acid solution(39∶61)at a flow rate of 1.0 ml/min;the determination wavelength was 250 nm.Results:The calibration curves were linear in the range of 0.016 54 ～2.068 μg(r=0.999 9)for schizandrol A.The average recoveries(n=6)of schizandrol A was 99.65%(RSD was 1.56%).Conclusion:The method is proved to be simple and reliable，accurate，repeatable and can be used for quality control of Tongmai Yangxin Pill.

Tongmai Yangxin Pill，schizandrol A，HPLC

R927.2

A

1006-5687(2012)04-0006-03

2012-05-28