木立蘆薈莖段離體培養再生植株的研究

摘要：以木立蘆薈（Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ）幼嫩莖段為外植體，進行了不定芽誘導及生根的研究。結果表明，以０．１ g/100mL升汞處理外植體１０ｍｉｎ的滅菌效果最佳；ＭＳ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ的激素組合的出芽率為３６％；篩選出木立蘆薈最佳生根培養基為ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．５ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ。

關鍵詞：木立蘆薈；莖段；誘導生根；植株再生

中圖分類號：Ｑ９４３．１文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）12－2565-03

Ｉｎ Vｉｔｒｏ Ｐｌａｎｔ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ

ＣＡＩ Ｘｉａｏ－ｄｏｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｊｉｎ－ｊｉｎｇ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｇａｒｄｅｎｉｎｇ，Ｙａｎｇｔｚｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎｇｚｈｏｕ ４３４０２５，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｙｏｕｎｇ ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｕｓｔｅｒ ｓｈｏｏｔｓ ａｎｄ ｒｏｏｔｓ． Ｉｔ ｗａｓ ｐｒｏｖｅｄ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｙｏｕｎｇ ｓｔｅｍｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ０．１ g/100mL ＨｇＣｌ2 ｆｏｒ １０ ｍｉｎ． ＭＳ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｃｌｕｓｔｅｒ ｓｈｏｏｔｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｓ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｓｈｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒｅａｃｈｅｄ ３６％． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｒｏｏｔ－ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ ｗａｓ ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．５ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ； ｓｔｅｍ； ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ； ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ

蘆薈（Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ）是百合科蘆薈屬多年生肉質草本植物，除具有觀賞價值外，在藥品、化妝品及食品等方面具有廣闊的研究和開發前景［１－３］。

我國的蘆薈生產發展潛力巨大，擁有著良好的資源開發優勢。發展蘆薈產業，首先要解決種苗繁殖問題。蘆薈一般不能自身授粉結實，雖然人工措施處理后可以獲得種子，但種子小而少，育苗困難。傳統扦插和分株繁殖速度較慢，而且易使病毒積累。影響植株生長，造成品種退化［４，５］，難以滿足蘆薈規模化種植發展的需要。組織培養方法具有用材少、方便﹑繁殖系數高﹑可周年生產并能保持優良種性等優點，目前蘆薈離體快繁技術已有一些報道［６－１０］。

本研究以木立蘆薈（Ａ． ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ）為試材，探討了不同激素及其濃度配比對其莖段離體培養再生植株的影響。

１材料與方法

１．１材料

木立蘆薈（Ａ． ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ． ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ）來源于長江大學設施園藝實習基地。

１．２外植體滅菌及芽誘導

取１～２年生幼苗，剝去外層老葉后，用洗衣粉漂洗１０ ｍｉｎ，流水沖洗６０ ｍｉｎ。切取幼嫩莖段后先用體積分數為７５％的乙醇浸泡１０ ｓ，再用０．１ g/100mL升汞浸泡（設１０ ｍｉｎ和１５ ｍｉｎ兩種處理）后，用無菌水清洗５次。將滅菌后莖段切割成０．５ ｃｍ長后接種于芽誘導培養基ＭＳ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ中，每處理接種２４瓶（每瓶接種１個外植體）。培養室溫度為（２５±２）℃，光照強度為２ ０００～３ ０００ ｌｘ，每日光照１４ ｈ。３０ ｄ后統計污染率（接種污染數／接種總數）、死亡率（死亡數／接種總數）及啟動率（未污染外植體啟動數／接種總數）。

１．３生根誘導與移栽

共采用４種培養基用于生根誘導，每種培養基均添加０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，探討６－ＢＡ對根誘導的影響。４種培養基為Ａ． ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ﹑Ｂ． ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ﹑Ｃ． ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ以及Ｄ． ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．５ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ。所有培養基都添加８．０ ｇ／Ｌ瓊脂＋３０．０ ｇ／Ｌ蔗糖＋０．２ ｇ／Ｌ活性碳，ｐＨ值為５．８。將叢生芽切成單芽分別轉至上述培養基中。每處理接種８瓶（其中每瓶接種１個外植體），重復３次。待根長到１５．０ mｍ左右時，將培養瓶移到光照培養箱進行煉苗。先用流水洗凈試管苗根周圍的瓊脂，移栽到基質中。移栽基質為珍珠巖∶河沙∶草炭土＝１∶1∶１（Ｖ∶Ｖ∶Ｖ）。３０ ｄ后觀察成活率（成活率＝成活株數／總株數）。

２結果與分析

２．１不同滅菌時間對外植體的影響

0.1 g/100mL升汞處理時間長短對木立蘆薈莖段的成活及滅菌效果有十分明顯的影響。試驗結果表明（表１），使用７５％酒精處理１０ｓ后再用0.1 g/100mL升汞處理時間過長（１５ ｍｉｎ）雖然污染率較低（８．３％），但死亡率較高（５８．３％）；而用０．１ g/100mL升汞處理１０ ｍｉｎ的效果最佳，外植體啟動率達４１．７％。

２．２不定芽的再生

將莖段接種于ＭＳ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋４．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ培養基上，培養３０ ｄ后觀察發現，部分莖段再生了單芽（圖１ａ）和大量叢生芽（圖１ｂ），出芽率達３６％。這些芽顏色濃綠，生長旺盛。

２．３不同濃度６－ＢＡ對單芽生根的影響

不同濃度６－ＢＡ對單芽生根有較大影響。將叢生芽切割后轉移到生根培養基上培養，結果如表２所示，研究表明，就生根率而言，培養基Ａ﹑Ｂ及Ｄ上單芽生根效果較好，在培養基Ａ和Ｄ上幾乎所有單芽均再生了根，而培養基Ｂ上所有芽均成功誘導了根的再生；就開始生根天數而言，轉移到培養基Ｃ和Ｄ上單芽最早生根時間出現在培養后第５天，而另外兩種培養基上培養的芽均在１６ ｄ后才分化出根；就根系質量而言，６－ＢＡ的濃度越大，誘導生根的數量就越多（圖１ｃ），培養基Ｄ上單芽平均生根數最多，其次為培養基Ｃ和Ｂ，雖然培養基Ｂ上單芽平均生根數最少，但其平均根長達３５．３ ｍｍ。總而言之，在ＮＡＡ濃度為０．２ ｍｇ／Ｌ時，６－ＢＡ的濃度越高，單芽開始生根天數越短，平均生根數越多，而對生根率及平均根長影響較小。

根系的好壞直接影響移栽試管苗的成活率。如表２所示，木立蘆薈試管苗移栽成活率與再生根數量有關。單芽生根數越多，其植株移栽成活率也最高。綜上所述，培養基Ｄ是本研究中的最佳生根培養基。目前，這些木立蘆薈試管苗在溫室中生長良好。

３小結

蘆薈對外源激素的適應范圍較廣，不同外源植物激素對蘆薈組織培養有不同影響［１０－１２］。有研究表明，高濃度ＮＡＡ有利于提高生根條數，從而有利于提高移栽成活率［１２］。本試驗以木立蘆薈莖段為外植體誘導叢生芽，使用了４個濃度分別為０．０﹑１．０﹑３．０及４．５ ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ和０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ自由組合，以觀察其對蘆薈單芽誘導生根的影響。結果表明

６－ＢＡ的濃度越大，誘導生根的數量就越多。而只添加０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的培養基能長根，但根的長度不及添加了６－ＢＡ的培養基。促進木立蘆薈單芽再生根的６－ＢＡ最佳濃度有待進一步研究。此外，本研究中還發現木立蘆薈的玻璃化程度與0.1 g/100mL升汞消毒時間相關，這方面有待進一步研究。

參考文獻：

［１］ 龍文興，楊小波，戚美英，等．蘆薈組織培養研究進展（綜述）［Ｊ］．亞熱帶植物科學，２００７，３６（１）：７０－７４．

［２］ 任道群，熊洪，唐玉明，等．蘆薈快速繁殖技術［Ｊ］．廣西農業科學，２００１（２）：６９．

［３］ ＲＯＤＲ?魱ＧＵＥＺ Ｅ Ｒ，ＭＡＲＴ?魱Ｎ Ｊ Ｄ，ＲＯＭＥＲＯ Ｃ Ｄ． Ａｌｏｅ ｖｅｒａ ａｓ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ ｉｎ ｆｏｏｄｓ［Ｊ］． Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，２０１０，５０（４）：３０５－３２６．

［４］ 紀萍，司徒琳莉，趙偉東．三種蘆薈的組織培養及快速繁殖的研究［Ｊ］．中國林副特產，２００２（１）：９－１０．

［５］ 徐重益，傅術琳，程智慧．日本木立蘆薈離體快繁體系研究［Ｊ］．西北農林科技大學學報（自然科學版），２００４，３２（６）：８３－８６．

［６］ 于春葉，馬慧， 張麗，等． ４個蘆薈品種離體快繁技術研

究［Ｊ］．遼寧林業科技，２００９（４）：１３－１６．

［７］ 李余先，朱寶娣，吳南．木立蘆薈的試管繁殖技術［Ｊ］．吉林農業科技學院學報，２０１０，１９（２）：３５－３６，４４．

［８］ 安永輝，薛俊，魏健．蘆薈快繁體系建立的研究［Ｊ］．安徽農業科學，２００８，３６（２８）：１２１２３－１２１２４．

［９］ ＡＮＵＳＲＥＥ Ｄ，ＰＲＩＹＡＮＫＡ Ｍ，ＴＩＭＩＲ Ｂ Ｊ． Ｈｉｇｈ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｏｅ ｖｅｒａ Ｌ． Ｂｕｒｍ． ｆ． ａｓ ａ ｌｏｗ ｃｏｓｔ ｏｐｔｉｏｎ ｔｏｗａｒｄｓ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔ ＆ Ｂｉｏｔｅｃｈ，２０１０， ２０（１）：２９－３５．

［１０］ ＭＡＲＧＡＲＩＴＡ Ｖ，ＺＥＨＡＶＡ Ｆ，ＡＬＩＺＡ Ｖ Ｙ，ｅｔ ａｌ． Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ｖｉａ ｓｏｍａｔｉｃ ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｆｒｏｍ ｙｏｕｎｇ ｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｔｉｓｓ Ｏｒｇ Ｃｕｌｔ，２００５，８３（３）：

２９３－３０１．

［１１］ 王愛勤，何龍飛，裴潤梅，等．組培條件對不同品種蘆薈試管苗玻璃化的影響［Ｊ］．中國農學通報，２００２，１８（５）：４６－４８，５２．

［１２］ 豐鋒，李洪波，謝建英．蘆薈組培生根試驗［Ｊ］．廣西熱帶農業，２００１（４）：１４－１５．

注：本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內容請以PDF格式閱讀原文