野菊花天然活性成分蒙花苷的提取

摘要：選用基質固相萃取技術，采用正交優化設計試驗，研究野菊花中天然活性成分蒙花苷提取的最佳工藝。在四氟芯層析柱中加入硅膠氧化鋁野菊花花序粉，用正己烷－乙酸乙酯－丙酮的溶液組合進行極性洗脫，并采用高效液相色譜法測定蒙花苷的含量。結果表明，野菊花花序中蒙花苷的最佳工藝條件為萃取時間１．５ ｈ，萃取溫度為３０℃，洗脫劑體積比為１∶2∶3。

關鍵詞：野菊花花序；蒙花苷；正交試驗；高效液相色譜法

中圖分類號：Ｒ２８４．２文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）08－1663-03

Extracting Linarin， a Natural Active Ingredient from Wild Chrysanthemum

ＣＨＡＩ Ｈｏｎｇ－ｌｉｎｇ，ＷＵ Ｌｉｎ－ｓｅｎ，ＪＩＮ Xｉａｏ－ｃｈｕｎ

（Ｂｒａｎｃｈ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｌｉｓｈｕｉ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｌｉｓｈｕｉ ３２３０００，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｌｉｎａｒｉｎ ｆｒｏｍ ｗｉｌｄ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｂｙ ｍａｔｒｉｘ ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｗａｓ ａｄｄｉｎｇ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ－Ａｌｕｍｉｎａ－Ｐｏｌｌｅｎ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ＰＴＦＥ ｃｏｒｅ ｆｉｒｓｔｌｙ， ｔｈｅｎ ｐｏｌａｒｉｔｙ ｅｌｕｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｘａｎｅ－ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ－ａｃｅｔｏｎｅ， ａｎｄ ｆｉｎａｌｌｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｌｉｎａｒｉｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｂｙ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｌｉｎａｒｉｎ ｆｒｏｍ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ １．５ ｈ ａｔ ３０℃ ｗｉｔｈ ａｎ ｅｌｕｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｏｆ １∶2∶3．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓ ｏｆ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ； ｌｉｎａｒｉｎ； ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ； ＨＰＬＣ

野菊花（Flos Chrysanthemi Indici）具有抗病原微生物、治療心血管系統疾病、降壓、降低血小板聚集的影響、抗炎、免疫、抗氧化等作用［１］。此外還用于治療腫瘤、高血壓和高血脂等癥，對感冒、流行性腦膜炎也有一定預防作用［２，３］。

蒙花苷是眾多黃酮類化合物中活性較高的化合物之一，由刺槐素和一個苷元組成，化學結構式見圖１。蒙花苷又稱刺槐苷、金合歡因、野菊花黃酮苷、刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－蕓香糖苷等，以兩種異構體形式的化合物α體和β體。蒙花苷及其衍生物在植物界分布廣泛，存在于許多植物的花、葉、果實中，多以苷的形式存在。其中以野菊花花序中含量最多，是野菊花中重要的藥效成分［６，７］。近年來國內外研究表明，蒙花苷具有非常廣泛的生理和藥理活性，對預防糖尿病和改善糖尿病有顯著的作用，還具有抑制磷酸二酯酶、醛糖還原酶、金黃色葡萄球菌、乙型溶血鏈球菌、抗菌等作用［４，５］，能保護肝臟，并對慢性氣管炎有一定療效［８］。

１材料與方法

１．１材料

１．１．１野菊花試驗用野菊花干燥花序購于浙江中醫院中藥房。將其放入研缽中研磨成粉狀，裝入燒杯并用保鮮膜封好，備用。

１．１．２試劑蒙花苷、正己烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、冰醋酸、氧化鋁、硅膠等。

１．１．３儀器ＹＰ２０２Ｎ電子天平，上海精密科學儀器有限公司；四氟芯層析柱，上海立亞太玻璃儀器制造有限公司杭州分公司；Ｗａｔｅｒｓ ＡｃＱｕｉｔｙ高效液相色譜儀，美國Ｗａｔｅｒｓ公司；ＵＶ ２５０１ ＰＣ紫外－可見分光光度計，日本導津；燒杯，研缽，漏斗，玻璃棒，移液管，容量瓶，干燥器等。

１．２方法

１．２．１蒙花苷的提取精密稱?。保?ｇ野菊花花序粉、２．４ ｇ硅膠和 ２．４ ｇ氧化鋁，加入２０ ｍＬ去離子水，攪拌均勻后裝入已固定在鐵架臺上的四氟芯層析柱中。每間隔１５ ｍｉｎ分別加入正己烷、乙酸乙酯、丙酮進行從小到大的極性洗脫。將洗脫液進行抽濾得到黃色濾液，用濾紙再次過濾，得到澄清的黃色濾液即為蒙花苷提取液，放置陰暗處備用。

１．２．２單因素試驗精密稱?。保?ｇ野菊花花序粉，在不同的萃取時間、萃取溫度、洗脫劑體積比（Ｖ正己烷∶Ｖ乙酸乙酯∶Ｖ丙酮）下進行單因素試驗。結束后將洗脫液進行抽濾得到黃色濾液。將黃色濾液用濾紙再次過濾，得到蒙花苷提取液，去離子水定容至５０ ｍＬ。測定蒙花苷在３２６ ｎｍ的吸光度，并計算出相應的蒙花苷的含量。

１．２．３正交優化試驗準確稱?。保?ｇ野菊花花序干粉末以不同的萃取時間、萃取溫度、洗脫劑體積比為考察因素，根據單因素試驗的結果，再選用

Ｌ９（３３）正交表進行正交試驗，因素與水平設計見表1，測定蒙花苷含量。

１．２．４高效液相色譜儀的檢測［９］色譜柱：Ｓｙｍｍｅｔｒｙ－Ｃ１８柱（３．９ ｍｍ×１５０．０ ｍｍ，５ μｍ），流動相∶甲醇－水－冰醋酸（５２∶４６∶２）；流速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，檢測波長：３２６ ｎｍ；柱溫：３０℃，進樣方式：手動進樣；進樣量：５ μＬ。

取蒙花苷標準品１．２ ｍｇ溶于甲醇，于５０ ｍＬ容量瓶中定容，得蒙花苷標準品液。從中?。?ｍＬ移至液相用小燒杯中，為標１。再從中分別取２ ｍＬ于４只試管中，分別稀釋成２、３、４、５倍，并移至小燒杯中，為標２、３、４、５。取定容的提取液各２ ｍＬ于５０ ｍＬ容量瓶中，用３０％乙醇稀釋至刻度，１５ ｍｉｎ后以空白標準液作對照，于３２６ ｎｍ處測定吸光度，計算提取液的蒙花苷含量。

２結果與分析

２．１高效液相色譜儀的檢測

２．１．１檢測波長的選擇取蒙花苷標準品，用甲醇配成溶液進行２００～４００ ｎｍ的光譜掃描。光譜圖顯示，其在２０７、２６７、３２６ ｎｍ附近均有較大吸收峰。在３２６ ｎｍ峰面積最大，為減少其他成分對蒙花苷測定的干擾，特選擇３２６ ｎｍ作為檢測波長。

２．１．２線性關系的考察將標１、標２、標３分別取樣５ μＬ，按1．２．4所述條件進行測定，結果表明，蒙花苷在進樣量為０．０４８～２．１３0 μＬ的范圍內與峰面積具有良好的線性關系。以峰面積（ｙ）為縱坐標，蒙花苷濃度（ｘ）為橫坐標，繪制標準曲線，得曲線的回歸方程＝１ ９８０ｘ－７．５６0，ｒ＝０．９９９ ９。

２．１．３精密度試驗精密吸取對照品溶液５ μＬ連續進樣６次，蒙花苷峰面積ＣＶ為０．７８％。

２．１．４重復性測定取樣品粉末約２．４ ｍｇ，按上述供試品溶液的制備方法和測定條件，制備６份供試液，蒙花苷含量測定結果的ＣＶ為１．３０％。

２．１．５穩定性試驗分別制備對照品溶液和供試品溶液，室溫下放置，分別于０、２、４、６、８、１２ ｈ進樣測定，記錄蒙花苷色譜峰峰面積，計算變異系數，結果表明，對照品溶液中蒙花苷色譜峰峰面積ＣＶ為０．４８％，供試品溶液中蒙花苷色譜峰峰面積ＣＶ為０．８１％，表明對照品和供試品溶液在１２ ｈ內穩定。

２．１．６回收率試驗采用加樣回收試驗，取已知含量的野菊花粉末０．１２ ｇ，共６份，精密稱定，按對照品加入量與所取供試品含量之比為１∶１的比例加入蒙花苷對照品，制備供試品溶液，分別測定，計算回收率。結果表明，蒙花苷的平均回收率為９７．４％，ＣＶ為２．４２％。

２．１．７色譜分析通過對圖２和圖３的比較，以及對照品的光譜，可以看出保留時間約在１．８９ ｍｉｎ左右，可以斷定這就是蒙花苷，即第３個吸收峰為蒙花苷的吸收峰。

２．２單因素試驗

２．２．１萃取時間對蒙花苷提取量的影響在常溫下，在不同的萃取時間下提取蒙花苷，測定提取液中蒙花苷含量，結果見圖４。由圖４可知，野菊花中蒙花苷提取量隨萃取時間的延長而增大，但萃?。保?ｈ后，蒙花苷的含量開始降低，故萃取時間為１．５ ｈ時提取效果最好。

２．２．２萃取溫度對蒙花苷提取量的影響在不同溫度下，用洗脫試劑體積比１∶１∶１的洗脫試劑提?。保?ｈ后，測定提取液中蒙花苷含量，結果見圖５。由圖５可知，野菊花中蒙花苷含量在提取溫度為２５ ℃時最高，故提取溫度以２５ ℃為宜。

２．２．３洗脫劑體積比對蒙花苷提取量的影響以不同洗脫劑體積比，在２５ ℃下，提?。保?ｈ，測定提取液中蒙花苷含量，結果見圖６。由圖６可知，在其他條件相同情況下，從經濟角度考慮，以洗脫劑體積比１∶２∶３提取為宜。

２．３正交優化試驗

由表２可以看出，最佳提取工藝為Ａ２Ｂ３Ｃ３，即萃取時間為１．５ ｈ，萃取溫度為３０ ℃，洗脫劑體積比為１∶２∶３。

３結論

利用新型的基質固相分散萃取技術提取野菊花干燥花序中天然活性成分蒙花苷，通過對樣品提取條件進行不同因素及水平比較，以及運用正交試驗設計進行多因素綜合分析，優選出了萃取時間、萃取溫度、洗脫劑體積比３個因素的最優試驗方案，建立了實用、簡單、方便、易行的基質固相分散萃取蒙花苷的流程。野菊花花序中蒙花苷的最佳提取工藝條件為：萃取時間1.5 h，萃取溫度為30 ℃，溶液比1∶2∶3。

參考文獻：

［１］ 王丹．藥用植物野菊花的研究現狀及發展前景［Ｊ］．現代中藥研究與實踐，２００７，２１（４）：５９－６２．

［２］ 劉國應．野菊花的藥理研究及臨床應用進展［Ｊ］．山東中醫雜志，１９９０，９（６）：３７－３９．

［３］ 華海清．野菊花臨床應用研究概況［Ｊ］．湖南中醫藥導報，１９９４，１（１０）：３６－３７．

［６］ 譚曉杰，賈英，李清，等．ＲＰ－ＨＰＬＣ法同時測定野菊花中木犀草素－７－Ｏ－葡萄糖苷和蒙花苷［Ｊ］．中草藥，２００６，３７（８）：１２６１－１２６２．

［７］ 陳蕾，霽虹． ＨＰＬＣ法測定野菊花中蒙花苷的含量［Ｊ］．中國藥事，２００５，１９（２）：９７－９８．

［４］ 崔蘭沖，李小芩，韓瑩，等．ＨＰＬＣ測定野菊花中蒙花苷與木犀草素的含量［Ｊ］．中國中藥雜志，２００７，３２（１）：３３－３５．

［５］ 李秀蘭，孫光潔．密蒙花／結香有效成分的抑菌作用［Ｊ］．西北藥學雜志，１９９６，１１（４）：１６５－１６６．

［８］ 陳惠芳．植物活性成分辭典［Ｍ］． 北京：中國醫藥科技出版社，２００１．１２－１３．

［９］ 魏娜，王強． 野菊花及其相關制劑中蒙花苷的含量測定［Ｊ］．藥學與臨床研究，２００７，１５（３）：２２１－２２３．