放大內(nèi)鏡聯(lián)合MUC2、MUC5AC、MUC6和CD10在早期胃癌診斷中的價值*

鄭倩，彭昌能，曹慧秋，張曉梅

（1.郴州市第一人民醫(yī)院 消化內(nèi)科，湖南 郴州 423000；2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 消化內(nèi)科，湖南 長沙 410008）

胃癌通常起源于胃黏膜上皮，好發(fā)于50 歲以上的人群，具有明顯地域差異[1]。我國是胃癌高發(fā)國家，發(fā)病率呈逐年上升趨勢，且病死率高，威脅人們的身心健康[2]。胃癌的診治時機與患者預(yù)后相關(guān)，進展期胃癌患者在行胃癌根治術(shù)等綜合治療后，5年生存率不及20%，給國家和家庭帶來了沉重的負擔(dān)[3]。因此，胃癌的早診早治對改善患者預(yù)后，具有重要臨床價值。放大內(nèi)鏡的原理是在常規(guī)內(nèi)鏡上增加變焦鏡頭，起到組織光學(xué)放大的作用，已逐漸用于早期胃癌的診斷，其不僅能夠觀察到胃小凹的變化，還能顯示胃黏膜的集合小靜脈[4-5]。近年來，有研究[6]發(fā)現(xiàn)，黏蛋白2（mucin 2，MUC2）、黏蛋白5AC（mucin 5AC，MUC5AC）、黏蛋白6（mucin 6，MUC6）和CD10 在多種惡性腫瘤中存在異常表達。本文旨在探討放大內(nèi)鏡聯(lián)合MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 在早期胃癌中的診斷價值，以期為胃癌的早期診斷和治療提供依據(jù)。現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年5月－2021年5月郴州市第一人民醫(yī)院擬行內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)（endoscopic submucosal dissection，ESD）治療的127例早期胃癌患者，收集癌組織及癌旁組織（ESD 標(biāo)本距腫瘤邊緣≥1 cm）。納入的127例患者中，男78例，女49例；年齡35～74歲，平均（58.72±9.81）歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①參考共識[7]的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②術(shù)前均行放大內(nèi)鏡檢查；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②中晚期胃癌；③臨床資料不全；④重要臟器嚴重異常者；⑤有精神和神經(jīng)疾病者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過。

1.2 主要試劑

艾博抗公司（Abcam）生產(chǎn)的兔抗人MUC2 單克隆抗體、兔抗人MUC5AC 單克隆抗體、兔抗人CD10單克隆抗體和兔抗人MUC6單克隆抗體。

1.3 放大內(nèi)鏡檢查

應(yīng)用Olympus GIF-H260Z電子放大內(nèi)鏡檢查，若見可疑病灶，對可見病灶進行充分沖洗，再用0.5%亞甲藍染色，使用變焦鏡頭仔細觀察胃小凹顏色、結(jié)構(gòu)、形態(tài)以及胃黏膜微血管，同時取活體組織標(biāo)本送檢。全部檢查由同組具有5年以上內(nèi)鏡檢查經(jīng)驗的主治醫(yī)師進行。

1.4 蛋白表達測定方法

采用免疫組化法測定癌組織與癌旁組織MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 的表達。取3 μm石蠟標(biāo)本切片、烤片、脫水和修復(fù)后，以3%過氧化氫處理，再用PBS溶液洗滌3次（每次5 min）。采用血清封閉30 min 后，甩去多余液體，加入MUC2 一抗（1∶500）、MUC5AC 一抗（1∶500）、MUC6 一抗（1∶500）和CD10 一抗（1∶200），在4℃下過夜；再加入二抗（1∶1 000），在37℃下孵育30 min，用PBS溶液洗滌3次（每次5 min）；顯色、復(fù)染、脫水、透明和封片后，在顯微鏡下觀察。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示；計數(shù)資料以例（%）表示，行χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 放大內(nèi)鏡診斷準(zhǔn)確率

127例早期胃癌患者，經(jīng)放大內(nèi)鏡診斷準(zhǔn)確率為85.03%（108/127）。

2.2 癌組織與癌旁組織的蛋白陽性表達率比較

癌組織MUC2 陽性表達率為61.42%（78/127），明顯高于癌旁組織的11.81%（15/127）；癌組織MUC5AC 陽性表達率為54.33%（69/127），明顯高于癌旁組織的14.17%（18/127）；癌組織MUC6 陽性表達率為48.03%（61/127），明顯高于癌旁組織的7.87%（10/127）；癌組織CD10 陽性表達率為73.23%（93/127），明顯高于癌旁組織的15.75%（20/127），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1和附圖。

附圖 癌組織與癌旁組織的蛋白陽性表達（免疫組化×200）Attached fig.Positive expression of protein in cancer tissues and adjacent tissues（SP×200）

表1 癌組織與癌旁組織的蛋白陽性表達率比較例（%）Table 1 Comparison of proteins positive expression rate between cancer tissues and adjacent tissues n（%）

2.3 放大內(nèi)鏡聯(lián)合MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10對早期胃癌的診斷效能

放大內(nèi)鏡聯(lián)合MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 診斷早期胃癌，靈敏度和特異度明顯高于放大內(nèi)鏡、MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 單獨診斷（P<0.05）。見表2。

表2 放大內(nèi)鏡聯(lián)合MUC2、MUC5AC、MUC6和CD10對早期胃癌的診斷效能 %Table 2 The diagnostic efficacy of magnifying endoscopy combined with MUC2，MUC5AC，MUC6 and CD10 protein for early gastric cancer %

3 討論

早期胃癌指僅限于胃黏膜及黏膜下層的病變，經(jīng)手術(shù)相關(guān)輔助治療，大部分可獲得良好的預(yù)后[8-9]。胃癌早期診斷尤為關(guān)鍵，可行ESD或內(nèi)鏡下黏膜切除術(shù)治療，大部分早期胃癌能夠治愈，能明顯提高患者的生存質(zhì)量[10]。正常胃黏膜組織無海星狀及微血管改變，而早期胃癌在放大內(nèi)鏡下通常表現(xiàn)為顏色改變，部分組織表現(xiàn)為毛細血管、集合靜脈消失，出現(xiàn)形態(tài)不規(guī)則的新生血管[11-14]。

MUC 是一類高分子量糖蛋白，能與脯氨酸、蘇氨酸、絲氨酸的跨膜糖蛋白結(jié)合，可形成凝膠狀結(jié)構(gòu)，發(fā)揮化學(xué)屏障作用[15]。同時，這些MUC 間接或直接介導(dǎo)不同的生理功能，可維持胃黏膜上皮的完整性，保護胃黏膜功能。基于MUC 的細胞表達模式，分為分泌型或結(jié)合型MUC。其中，MUC2、MUC5AC和MUC6等為分泌型MUC[16]。有研究[17]顯示，MUC的非調(diào)控表達是各種炎癥性疾病和癌癥的明顯特征，各種MUC 在不同的細胞機制中發(fā)揮著重要作用，能促使腫瘤細胞增殖和分化，促進腫瘤轉(zhuǎn)移。各種MUC的異常表達可作為多種惡性腫瘤診斷的分子標(biāo)志物。正常生理狀態(tài)下，MUC2是小腸和大腸腸上皮杯狀細胞分泌的一種黏液成分，若胃黏膜上皮發(fā)生腸上皮化生，則MUC2能夠在胃腸上皮化生的腺體中出現(xiàn)。而MUC5AC和MUC6通常表達于胃黏膜上皮，可作為判斷胃癌分化的標(biāo)志物。MUC5AC在早期胃癌細胞中表達上調(diào)；MUC5AC 高表達可促進腫瘤的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移；MUC6在胃竇及胃頸部黏膜細胞中表達，胃癌細胞中MUC6 明顯高于正常黏膜及腺瘤細胞的表達；MUC6 與腫瘤大小、淋巴管浸潤、轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)[18]。CD10是一種參與腫瘤-間質(zhì)相互作用的因子，與細胞表面糖蛋白金屬酶結(jié)合，在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中具有重要作用[19-20]。同時，CD10 可調(diào)節(jié)局部肽濃度，介導(dǎo)細胞對激素產(chǎn)生應(yīng)答；CD10 還可調(diào)節(jié)細胞的生長和分化，改變細胞間的信號通路。本研究顯示，癌組織MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 陽性表達率高于癌旁組織。這表明：MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 在早期胃癌中高表達。本研究還顯示，放大內(nèi)鏡聯(lián)合MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 診斷早期胃癌的靈敏度和特異度，明顯高于放大內(nèi)鏡、MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 單獨診斷。因此，MUC2、MUC5AC、MUC6和CD10可作為早期胃癌的腫瘤標(biāo)志物，聯(lián)合放大內(nèi)鏡能明顯提高早期胃癌的診斷準(zhǔn)確率。

綜上所述，放大內(nèi)鏡聯(lián)合MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 對早期胃癌的診斷具有良好的價值，聯(lián)合診斷可提高靈敏度和特異度。