跌打生骨顆粒大鼠長期毒性試驗

　　摘 要：目的：觀察跌打生骨顆粒長期重復給藥對大鼠可能產生的蓄積性毒性和延遲性毒性反應。方法：跌打生骨顆粒以最大給藥量作為高劑量（10.0 g顆粒/kg/d=16.75 g生藥/kg/d，相當臨床日劑量0.279 g生藥/kg/d的60倍），另設中劑量（5.0 g顆粒/kg/d=8.37 g生藥/kg/d，相當臨床日劑量的30倍）和低劑量（2.5 g顆粒/kg/d=4.18 g生藥/kg/d，相當臨床日劑量15倍），給大鼠連續灌胃給藥6個月，觀察對大鼠可能產生的蓄積性毒性和延遲性毒性反應。結果：3個劑量組動物的體重增長、攝食情況正常，對大鼠血液學指標、血液生化指標和主要臟器系數無明顯影響，主要器官病理組織學檢查均未見異常。結論：跌打生骨顆粒對大鼠無明顯蓄積性毒性和延遲性毒性反應。
　　關鍵詞：跌打生骨顆粒；灌胃給藥；血液學指標、血液生化指標；臟器系數
　　中圖分類號：R965 文獻標識碼：A 文章編號：1007-2349（2011）04-0066-02
　　廣西歡寶藥業有限公司生產的跌打生骨顆粒，功能主治為活血祛瘀，消腫止痛，強筋健骨，用于骨折。臨床用法用量為開水沖服，1次10 g顆粒，1日1次。本文報導其對大鼠長期毒性試驗研究結果。
　　1 實驗材料
　　1.1 受試藥物 跌打生骨顆粒（上市藥品），國藥準字Z20025338，批號20081101，每袋裝10 g，性狀為棕黃色至棕褐色顆粒，臨床用法用量為開水沖服，1次1袋，1 d 1次（每g顆粒相當于生藥1.675 g，臨床日劑量為0.279 g生藥/kg/d），實驗時用水將顆粒劑配成糊狀物供大鼠灌胃。
　　1.2 實驗動物 清潔級Wistar大鼠160只，180~210g，雌雄各半，由廣西醫科大學實驗動物中心提供，生產許可證SCXK2003-0003，動物質量合格證0000925。
　　2 實驗方法與結果^［1］
　　2.1 一般情況與體重 實驗用Wistar大鼠160只，隨機分為4組，每組40只，雌雄各半。室溫（27±2） ℃，濕度50%~70%，自然采光，每天定時通風換氣。雌雄分開群養，每籠10只大鼠。灌胃給藥（20 mL/kg），每天1次，連續6個月，停藥觀察2周。給藥及停藥期間，跌打生骨顆粒高、中、低劑量組和空白對照組動物活動、攝食量及排泄等均未見異常，毛色光澤，動物生長良好，體重普遍增加。與對照組比較差異無統計學意義。表明，跌打生骨顆粒對大鼠攝食和體重增長無影響。[KG)]
　　試驗過程中由于操作失誤，造成少量動物死亡。經尸解證明誤灌入肺，與藥物中毒無關。
　　2.2 血液常規 給藥3個月后，對照組和高劑量組各取10只動物，雌雄各半；給藥6個月各組取20只，雌雄各半；和停藥2 w將剩下動物分別禁食12 h后，取血，進行血液學指標測定。在給藥3個月后的高劑量組、給藥6個月后及停藥14 d后的各劑量組大鼠各指標與對照組比較時，除了停藥14 d的低劑量雄性動物粒細胞減少和高劑量雄性動物凝血酶原時間延長，達到顯著性水平外，其余均無顯著性差異（表1）。表明跌打生骨顆粒對大鼠血液學指標無影響。
　　2.3 血液生化 跌打生骨顆粒給藥3個月后的高劑量組、給藥6個月后及停藥14 d后各劑量組大鼠各指標與對照組比較均無顯著性差異（表2）。表明跌打生骨顆粒對大鼠血液生化學指標無影響。
　　2.4 臟器指數 給藥3個月，對照組和高劑量組各取10只動物；給藥6個月后，各取20只動物，雌雄各半；停藥2 w將剩下動物分別禁食12 h后，取心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、睪丸、子宮、卵巢進行稱量，計算臟器系數（=器官重量×100/體重），給藥3個月后的高劑量組、給藥6個月后及停藥14 d后的各劑量組大鼠的臟器指數與對照組比較無顯著性差異（表3）。表明跌打生骨顆粒對大鼠主要臟器指數無影響。
　　2.5 病理學檢查 給藥3個月，對照組和高劑量組各取10只動物；給藥6個月后，各取20只動物，雌雄各半；停藥2 w將剩下動物分別禁食12 h后，取心、肝、脾、肺、腎、腦（大腦、小腦、腦干）、脊髓（頸、胸、腰段）、垂體、胸腺、食管、胃、小腸、大腸、腎上腺、附睪、睪丸、卵巢、子宮、膀胱、骨髓、腸系膜淋巴結等組織，先肉眼觀察各臟器外觀有無異常，再以10%的福爾馬林將全部器官組織固定，進行病理組織學檢查，檢查結果部分動物出現間質性心肌炎、間質性肝炎、間質性肺炎、間質性腎炎，給藥組及對照組均有出現，這些病變屬于動物的常見病及多發病，可排除因藥物毒性引起。
　　3 討論
　　本實驗采用大鼠最大給藥量作為高劑量（相當臨床日劑量的60倍），低劑量相當于大鼠等效劑量^［2］的2.4倍（相當臨床日劑量的15倍），每天灌胃給藥跌打生骨顆粒1次，連續給藥6個月。各組動物活動、攝食量及排泄等均未見異常，毛色光澤，動物生長良好，體重普遍增加；血液常規檢查低劑量雄性動物粒細胞減少和高劑量雄性動物凝血酶原時間延長，與對照組比較有顯著性差異，都是在大鼠的正常血常規值之內，且在過去的實驗中這種現象也經常出現，因此可排除是由藥物毒性所致。血液生化指標、主要臟器指數無顯著改變；病理組織學檢查雖然發現一些病變，但這些是動物的常見病及多發病，且給藥組與對照組均有出現，可以排除藥物毒性所致。提示跌打生骨顆粒灌胃給藥對大鼠無明顯蓄積性毒性和延遲性毒性作用。
　　參考文獻：
　　［1］國家藥品監督管理局.中藥、天然藥物長期毒性研究技術指導原則，指導原則編號：［Z］GPT2-1，2005年3月.
　　［2］U.S.Department of Health and Human Services，Food and Drug Administration，Center for Drug Evaluation and Research（CDER），Center for Biologics Evaluation and Research（CBER）.Guidance for Industry and Reviewers：Estimating the Safe Starting Dose in Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers，December，2002：7.
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