農(nóng)產(chǎn)品中百速隆殘留量的液相色譜-質(zhì)譜法測定

蘇毅，陳其勇，章驊

（天津出入境檢驗(yàn)檢疫局，天津 300456）

農(nóng)產(chǎn)品中百速隆殘留量的液相色譜-質(zhì)譜法測定

蘇毅，陳其勇，章驊

（天津出入境檢驗(yàn)檢疫局，天津 300456）

建立了農(nóng)產(chǎn)品中除草劑百速隆殘留量的液相色譜-質(zhì)譜（GC/MS）檢測方法;樣品經(jīng)溶劑提取、固相萃取柱凈化，采用液質(zhì)聯(lián)用儀在選擇離子監(jiān)測模式下進(jìn)行快速定性定量分析，外標(biāo)法定量，方法檢出限為0.01 mg/kg。在大米、蘋果、洋蔥、豬肝中4種樣品中添加不同濃度的百速隆時，其平均添加回收率在78.9%～95.9%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n＝10）為 2.1%～8.4%。

百速隆;液相色譜－質(zhì)譜;農(nóng)產(chǎn)品;測定

百速隆[1]化學(xué)名稱為5-（4,6-二甲氧基嘧啶-2-基氨基甲酰氨磺酰）-1-甲基吡唑基-4-甲酸乙酯。主要化學(xué)性質(zhì)如下：原藥外觀為白色固體，比重1.44（20℃），熔點(diǎn)181℃～182℃，20℃時蒸氣壓0.0147MPa；溶解度（20℃）：在水、正己烷、氯仿、苯、丙酮中的溶解度分別為 2、0.2、234.4、15.6、31.7 g/L 原藥有效成分含量不低于97%，正常條件下貯存穩(wěn)定。本品屬低毒類農(nóng)藥，主要用于水稻移栽田雜草，如鴨舌草、節(jié)節(jié)菜、丁香蓼、異型莎草等一年生闊葉草和莎草，對稗草也有抑制作用。

截止到2009年底，檢測百速隆的方法主要有：液相色譜法及質(zhì)譜聯(lián)用等。而我國尚沒有農(nóng)產(chǎn)品中百速隆測定的國家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法,也沒有制定相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)限量。由于在2006年開始實(shí)施的“日本肯定列表制度”中，嚴(yán)格規(guī)定了農(nóng)產(chǎn)品中百速隆的殘留限量為0.01 mg/kg。為彌補(bǔ)在百速隆檢測方面缺少國標(biāo)或行標(biāo)的不足，我們在借鑒國內(nèi)外檢測方法[2-7]的基礎(chǔ)上，經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究，提出了以丙酮—正己烷提取、固相萃取柱凈化、液相色譜/質(zhì)譜法（GC/MS）測定農(nóng)產(chǎn)品中百速隆殘留量的可靠的檢驗(yàn)方法，該方法的檢測低限為0.01 mg/kg，完全滿足目前“日本肯定列表制度”中百速隆的限量要求。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

Platform型液相色譜/儀質(zhì)譜儀[固相萃取柱（二乙烯基苯基-N-乙烯基吡咯烷酮共聚物固相萃取柱，200 mg，6 mL）]：美國 Waters公司；配置大氣壓化學(xué)電離源（APCI）；AtlantisdC18柱，150mm×2.1mmi.d.3μm：美國Waters公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置、振蕩器、T-25型組織勻漿機(jī)：德國IKA公司；氮吹儀：美國Organomation公司；固相萃取裝置：法國Gilson公司。

1.1.2 試劑

乙腈、甲酸、甲醇：美國Fisher公司；色譜純、氯化鈉為分析純：天津化學(xué)試劑二廠；乙腈飽和正己烷：取500 mL正己烷與適量乙腈充分混合，取正己烷層備用；百速隆標(biāo)準(zhǔn)品：美國Sigma公司，以乙腈稀釋成100 μg/mL的儲備液，臨用時根據(jù)需要用乙腈稀釋成適當(dāng)含量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2 方法

1.2.1 樣品的提取

1.2.1.1 糧谷類樣品

準(zhǔn)確稱取10 g試樣（精確至0.01 g）于100 mL具塞離心管中，加入10mL水，混搖后放置1h。加入50mL乙腈，用均質(zhì)器10000 r/min勻漿提取1 min，加入10 g氯化鈉，再次勻漿提取1min，4000r/min下離心10min，將乙腈提取液轉(zhuǎn)移至250 mL的分液漏斗中，在乙腈提取液中加入25 mL乙腈飽和正己烷，振搖1 min，靜置分層后，棄去正己烷層，再用25 mL乙腈飽和的正己烷重復(fù)提取1次，收集乙腈層于具塞錐形瓶中。取上清液25 mL（相當(dāng)于5 g試樣）用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40℃下濃縮近干。加入3 mL水溶解，待凈化。

1.2.1.2 蔬菜及水果類樣品

稱取試樣約10 g（精確至0.01 g）于100 mL具塞離心管中，加入50 mL乙腈，用均質(zhì)器10000 r/min勻漿提取1 min，加入10 g氯化鈉，再次勻漿提取1 min，4000 r/min下離心10 min，取乙腈層25 mL（相當(dāng)于5 g試樣），用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40℃下濃縮近干。加入3 mL水溶解，待凈化。

1.2.1.3 動物源性食品類樣品

稱取試樣約10 g（精確至0.01 g）于100 mL具塞離心管中，加入25 mL乙腈，用均質(zhì)器10000 r/min勻漿提取1 min，于4000 r/min速率下離心10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至250 mL的分液漏斗中，殘?jiān)儆?5 mL乙腈重復(fù)提取1次，合并上清液。在乙腈提取液中加入25 mL乙腈飽和的正己烷，振搖1 min，靜置分層后，棄去正己烷層，再用25 mL乙腈飽和的正己烷重復(fù)提取1次，收集乙腈層于具塞錐形瓶中，加入10 g氯化鈉，振搖3 min，取乙腈層25 mL（相當(dāng)于5 g試樣），用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40℃下濃縮近干。加入3 mL水溶解，待凈化。

1.2.2 樣品的凈化

HLB固相萃取柱依次用5 mL甲醇和5 mL水進(jìn)行活化，然后將提取液全部過柱，用5 mL 20%甲醇溶液淋洗，棄去全部流出液。再用5 mL甲醇溶液洗脫HLB柱并收集流出液于10 mL試管中，40℃以下氮?dú)獯蹈伞Ｓ?.0 mL乙腈:水（1:1，體積比）混合溶液溶解殘?jiān)?jīng)0.22 μm濾膜過濾后供液相色譜-質(zhì)譜儀測定。

1.2.3 液相色譜-質(zhì)譜條件

色譜柱：Atlantis d C18，3 μm，2.1 mm×150 mm；流動相：乙腈+0.1%甲酸溶液（5+3）；流速：0.8 mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣口溫度：290℃；進(jìn)樣方式：不分流；開閥時間：0.75 min；進(jìn)樣量：1 μL；電離方式:APCI；源內(nèi)電壓：34 V；離子源溫度:150℃；探頭溫度：550℃；溶劑延遲:3 min；離子檢測模式：選擇離子監(jiān)測,條件見表1。

表1 選擇離子和相對豐度Table 1 Selected ions and relative intensity

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的選擇

結(jié)果研究表明：ESI源與APCI源均適用于百速隆的檢測，而大氣壓化學(xué)電離源（APCI源）電離方式在抗基體干擾和靈敏度方面能達(dá)到理想的檢測效果，因此本研究最終采用APCI作為離子源。在上述質(zhì)譜條件下，百速隆總離子流圖見圖1，百速隆標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖見圖2，保留時間約為6.1 min。

圖1 百速隆標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)總離子流圖Fig.1 GC-MS total ion chromatogram of pyrazosulfuron-ethyl standard

2.2 提取及凈化方法的選擇

提取研究結(jié)果表明：用丙酮和乙酸乙酯提取樣品后，在液-液分配時出現(xiàn)不同程度的乳化現(xiàn)象，而且許多雜質(zhì)也同時被提取，干擾色譜分析；采用乙腈、乙腈-水、乙腈-0.01 mol/L HCl的提取方式，均能使百速隆從基質(zhì)中轉(zhuǎn)移到乙腈中，考慮到水的介入將增加后續(xù)凈化的步驟，故選用乙腈作為提取劑，提取效率在96%以上。

圖2 百速隆標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖Fig.2 Mass spectrum of pyrazosulfuron-ethyl standard

由于糧谷類及動物源性食品類提取液中含有大量的蛋白質(zhì)和脂類等干擾組分，影響了百速隆在固相萃取柱上的保留，導(dǎo)致回收率降低，所以在凈化和富集前必須對提取液進(jìn)行脫脂處理，采用極性較小的乙腈飽和的正己烷進(jìn)行液-液分配方法可以有效去除提取液中的脂類雜質(zhì)。而對于蔬菜和水果類樣品可省去該步驟。

凈化研究結(jié)果表明：如果僅采用Envi-18柱進(jìn)行固相萃取，能去除大部分雜質(zhì)干擾，但有時會有雜質(zhì)峰干擾正常分離，影響測定，而采用中性氧化鋁柱與Envi-18柱串接可以有效去除干擾，但前處理過程較為煩瑣,而采用二乙烯基苯基-N-乙烯基吡咯烷酮共聚物固相萃取柱可以達(dá)到理想的凈化效果，回收率良好。

2.3 線性范圍與定量下限

本實(shí)驗(yàn)條件下，對百速隆進(jìn)行測定，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明 0.001 μg/mL～0.1 μg/mL 范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度與色譜響應(yīng)值均有良好的線性關(guān)系。根據(jù)實(shí)際樣品添加回收測定，在不同農(nóng)產(chǎn)品中其定量下限均為0.01 mg/kg，其線性方程為y=44474x+21.658，相關(guān)系數(shù)為0.998。

2.4 方法的回收率與精密度

分別用大米、蘋果、洋蔥、豬肝空白樣品進(jìn)行3個水平加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。每個水平取10個平行樣，其回收率和精密度數(shù)據(jù)見表2，平均添加回收率在78.9%～95.9%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍（n＝10）為2.1%～8.4%，大米樣品空白及檢出限水平樣品添加譜圖見圖3。

3 結(jié)論

通過對農(nóng)產(chǎn)品中百速隆地提取、凈化、分析測定的方法研究，建立了可靠、靈敏、準(zhǔn)確、快速的氣相色譜-質(zhì)譜法測定農(nóng)產(chǎn)品中的百速隆殘留量，方法的靈敏度達(dá)到0.01 mg/kg，完全滿足目前日本、歐盟等國際上對百速隆的殘留分析要求。

表2 農(nóng)產(chǎn)品中空白樣品添加回收率表Table 2 The corresponding recoveries of fortifying concentrations in agriculture products

圖3 大米樣品空白及添加0.01 mg/kg百速隆標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖Fig.3 Chromatograms of blank rice sample and spiked with0.01 mg/kg pyrazosulfuron-ethyl standard

[1]李鵬,劉鳳英,李會芹，等.除草劑吡嘧磺隆的研制[J].精細(xì)與專用化學(xué)品，2006，14(15)：11-13

[2]李軍，隋凱，于靈，等.糧谷中四唑嘧磺隆、啶嘧磺隆和氯吡嘧磺隆殘留的高效液相色譜檢驗(yàn)方法[J].檢驗(yàn)檢疫科學(xué)，2005，15(1)：24-27

[3]日本厚生勞動省.食品中農(nóng)用化學(xué)品殘留檢測方法：增補(bǔ)本[M].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007

[4]王和興,黎源倩，雍莉,等.固相萃取-高效液相色譜法同時測定大豆和大米中的磺酰脲類和二苯醚類除草劑殘留[J].色譜，2007，25(4)：536-540

[5]祁彥，占春瑞，張新忠，等.高效液相色譜法同時測定大豆中10種磺酰脲類除草劑的殘留量[J].色譜，2004，22(6)：634-638

[6]龐國芳，范春林，連玉晶，等.GB/T20769-2006水果及蔬菜中405種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社

[7]龐國芳，曹彥忠，張進(jìn)杰，等.GB/T 19650-2005動物組織中437種農(nóng)藥多殘留測定方法氣相色譜-質(zhì)譜和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社

Determination of Pyrazosulfuron-ethyl in Agriculture Products by LC/MS

SU Yi,CHEN Qi-yong,ZHANG Hua
（Tianjin Entry－Exit Inspection and Quarantine Bureau，Tianjin 300456，China）

A LC-MS method for the determination of pyrazosulfuron-ethyl in agriculture products is eatablished.Pyrazosulfuron-ethyl in the test sample are extracted with the solvent,then cleaned up with solid phase extraction column.Rapid qualitative and quantitative analyses were carried out by liquid-chromatography-mass spectromery under the seletive-ion monitoring mode,quantitative by using the external standard.The detection limits of this method were 0.01 mg/kg.The mean recoveries range from 78.9%-95.9%of fortifying different concentrations in rice,apple,onion and liver,and the RSD（n=10）was 2.1%-8.4%.

pyrazosulfuron-ethyl;liquid chroma to graphy-mass spectromery;agriculture products;determination

蘇毅（1964—），男（漢），工程師，本科，主要從事毒素及食品添加劑殘留檢測技術(shù)研究。

2010-10-27