脫脂油棕果肉醇提物體外抗氧化活性研究

李 瑞 夏秋瑜 趙松林 陳衛軍 唐敏敏

(中國熱帶農業科學院椰子研究所1，文昌 571339)

(海南省椰子深加工工程技術研究中心2，文昌 571339)

脫脂油棕果肉醇提物體外抗氧化活性研究

李 瑞1，2夏秋瑜1，2趙松林1，2陳衛軍1，2唐敏敏1，2

(中國熱帶農業科學院椰子研究所1，文昌 571339)

(海南省椰子深加工工程技術研究中心2，文昌 571339)

本研究主要分析了脫脂嫩油棕果醇提物(YNE)及脫脂成熟油棕果醇提物(MNE)的體外抗氧化活性。結果表明，YNE清除DPPH·的能力顯著高于MNE，但二者的清除能力均顯著低于對照物Trolox、沒食子酸和BHT。YNE與Fe2+的絡合能力顯著高于MNE及3種對照物，MNE與Fe2+的絡合能力顯著高于Trolox，但與沒食子酸及BHT無顯著差異。在多酚含量為0.6 mg/mL以下，YNE清除ABTS+·的能力高于MNE，但當多酚含量在0.6 mg/mL以上時二者無顯著差異。MNE及YNE清除OH·的能力相當，均顯著高于3種對照物。MNE對脂質過氧化的抑制能力顯著高于YNE，但都顯著低于3種對照物。

脫脂油棕果肉 醇提物 體外抗氧化活性

油棕(Elaeis guineensis Jacq.)屬棕櫚科(Arecaceae)單子葉植物，是熱帶地區重要的木本油料作物之一［1］，也是世界上生產效率最高的產油植物，其畝產油量是花生的7～8倍、大豆的9～10倍，所以被人們譽為“世界油王”。油棕用途廣泛，經濟價值高，其主要產品是從果肉壓榨出的棕櫚油和從果仁壓榨出的棕櫚仁油，目前的研究熱點也主要集中在棕櫚油和棕櫚仁油［2－4］，而對脫脂后的油棕果肉研究較少。在油棕主產國，脫脂油棕果肉主要作為燃料利用，造成極大的浪費。

本文對脫脂成熟油棕果肉醇提物(MNE)及脫脂嫩油棕果肉醇提物(YNE)中多酚、黃酮含量進行了分析和比較，并初步探討了油棕果肉醇提物體外抗氧化活性，以期對油棕果肉的開發應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

油棕:中國熱帶農業科學院椰子研究所椰子大觀園。

1.2 主要試劑與儀器

DPPH、Ferrozine鐵試劑、Trolox、沒食子酸、BHT、2－脫氧核糖、抗壞血酸、卵磷脂、福林酚試劑、蘆丁:美國Sigma公司;其他試劑均為分析純。

US－32R冷凍高速離心機:德國Hettich Zentrifugen公司;Uvline 9400型紫外可見分光光度計:德國Schott儀器公司。

1.3 方法

1.3.1 脫脂油棕果肉提取液的制備

將油棕果肉削下，40℃干燥，磨碎，過40目篩，稱重。將成熟油棕果肉及嫩油棕果肉按照料液比1∶5(m/V)用正己烷提取數次，將棕櫚油充分提取，收集上層液體。將脫脂后的30 g嫩的及30 g成熟的油棕果肉分別用無水乙醇提取3次，每次料液比為1∶5(m/V)，分別合并提取液，旋轉蒸發，二者均用無水乙醇定容至250 mL，備用。

1.3.2 多酚含量測定

采用福林酚試劑法測定多酚含量。100 μL樣品加入2.0%Na2CO32.0mL，在室溫下放置2min，加入100 μL福林酚試劑，反應繼續保持30 min，在720 nm測定吸光度［5］。多酚含量標準曲線如圖1所示。

圖1 多酚含量標準曲線

1.3.3 黃酮含量測定

分別取醇提物各1 mL，用無水乙醇定容至5 mL，加入0.3 mL Na2NO2(5%)溶液，混合均勻后靜置5 min，加0.3 mL AlCl3(10%)溶液，混勻后靜置6 min，加4 mL 1 mol/L NaOH 溶液，再加入0.4 mL 30%乙醇溶液使總體積為10 mL，混勻后靜置10 min，在510 nm處測定吸光值。蘆丁標準曲線如圖2所示。

圖2 蘆丁含量標準曲線

1.3.4 對DPPH·清除率的測定

200 μL 樣品中添加2.8 mL 0.1 mol/L 的 DPPH溶液，在暗處放置30 min，在517 nm測定吸光值［5］。

DPPH·清除率=(1－A樣品/A模型)×100%

1.3.5 與Fe2+絡合能力的測定

取50 μL樣品與試管中，加入1 mol/L FeSO4溶液 25 μL，5 mmol/L 的鐵試劑溶液 50 μL，室溫下反應10 min后用甲醇溶液定容至3 mL，在562 nm處測定吸光度［6］。

與Fe2+絡合率 =(1－A樣品/A模型)×100%

1.3.6 對ABTS+·清除能力的測定

用蒸餾水配置7 mmol/L的ABTS溶液和140 mmol/L的K2S2O8溶液，分別取50 mL ABTS溶液和880 μL K2S2O8溶液混合(K2S2O8的最終濃度約為2.45 mmol/L)，混合液使用前在常溫下暗處放置12 h以上，使用前用甲醇或無水乙醇稀釋，使吸光度在734 nm處為0.70 ±0.02，得到 ABTS+·工作液。

取新制備的ABTS+·溶液3 mL，添加0.5 mL樣品溶液，在室溫下放置30 min，使其反應，然后測定734 nm處的吸光值，以不加樣品的試管為空白管，按以下公式計算樣品對ABTS+·的清除率［5］:

ABTS+·清除率 =(1－A樣品/A空白)×100%

1.3.7 對OH·清除能力的測定

采用2－脫氧核糖法。在1.34 mL磷酸鹽緩沖溶液中(0.01 mol，pH 7.4)加入28 mmol的2 －脫氧核糖溶液0.3 mL，28 mmol的雙氧水0.3 mL，2.5 mmol的三氯化鐵溶液 30 μL，1 mmol 的 EDTANa20.3 mL，0.1 mL的樣品溶液。添加10 mmol抗壞血酸30 μL引發反應，37℃水浴1 h，加入1%的硫代巴比妥酸溶液0.3 mL，28%的三氯乙酸30 μL。100 ℃水浴 20 min，冷卻后在532 nm處測吸光率。模型管用乙醇代替樣品，用BHT，Trolox，沒食子酸做對照，每組3 個重復［7］。

對OH·的清除率=(1－A樣品/A模型)×100%

1.3.8 對脂質過氧化抑制作用的測定

脂質體的制備:稱取80 mg卵磷脂溶入20 mL 0.05 mol/L(pH=7.4)的磷酸緩沖液中，在超聲發生器中處理30 min(常溫，40 Hz)，所得液體為單層小體積脂質體，置于4℃冰箱保存備用。

對脂質過氧化抑制作用的測定:在試管中加入200 μL脂質體溶液，100 μL不同濃度的樣品溶液，混勻，加入50 μL 50 mmol/L的FeSO4溶液，用磷酸緩沖液補足3 mL，模型管不加樣品溶液，空白管不加FeSO4溶液，然后將空白管、模型管和樣品管一同置于37℃水浴溫浴40 min，每5 min振搖一次。溫浴完成后，各管加入10%TCA 1.0 mL，0.8%TBA 1 mL，混勻，置于100℃水浴中加熱15 min，冷卻后在5 000 r/min離心10 min，取上清液在532 nm測定吸光度［8］。

脂質過氧化的抑制率=(1－A樣品/A模型)×100%

1.3.9 數據處理

數據采用Excel和SPSS13.0軟件包處理，組間比較采用單因素方差分析，數據間的差異性在P＜0.05水平進行比較，結果以平均值±標準差(珋x±s)的形式表示。

2 結果與討論

2.1 MNE及YNE的全波長掃描圖譜

由圖3可見，MNE在230 nm和270 nm處均有最大吸收峰，YNE在410 nm和665 nm處也有吸收峰。這說明在MNE和YNE中均含有不同的組分。

圖3 MNE及YNE全波長掃描圖譜

2.2 多酚及黃酮含量

由表1可知，MNE中的多酚含量高于YNE，但是黃酮含量低于YNE。這是因為油棕果在發育過程中各成分都在不斷的變化。

表1 MNE及YNE的多酚及黃酮含量

2.3 清除DPPH·的能力

由圖4可見，YNE清除DPPH·的能力顯著高于MNE，這可能是因為YNE中的黃酮含量較高，而黃酮具有較強的抗氧化能力;但二者的清除能力均顯著低于對照物Trolox、沒食子酸和BHT。

圖4 MNE及YNE清除DPPH·的能力(0.4 mg/mL)

2.4 與Fe2+的絡合能力

由圖5可見，YNE與Fe2+的絡合能力顯著高于MNE及3種對照物，這可能與YNE中黃酮含量較高有關。MNE與Fe2+的絡合能力顯著高于Trolox，但與沒食子酸、BHT無顯著差異。

圖5 MNE及YNE與Fe2+的絡合能力(0.4 mg/mL)

2.5 清除ABTS+·的能力

對ABTS+·清除率的Trolox當量標準曲線為y=0.992 0x+1.051 2，R2=0.998 4，將 樣 品 對ABTS+·清除率換成Trolox當量濃度(TEAC值)，結果見圖6。由圖6可見，在多酚含量為0.6 mg/mL以下時，YNE的TEAC值顯著高于MNE，但當多酚含量在0.6 mg/mL以上時無顯著差異。

圖6 MNE及YNE清除ABTS+·的能力

圖7 MNE及YNE清除清除OH·的能力(0.4 mg/mL)

2.6 清除OH·的能力

由圖7可見，MNE及YNE清除OH·的能力相當，且均顯著高于對照物。而OH·是體內最活潑的活性氧，可導致許多病例變化［9］，因此，作為一種植物提取物，MNE及YNE都具有良好的抗氧化性，在清除OH·能力方面優于人工合成的抗氧化劑BHT。

2.7 對脂質過氧化的抑制能力

由圖8可見，MNE對脂質過氧化的抑制能力顯著高于YNE，但都顯著低于對照物。

圖8 MNE及YNE對脂質過氧化的抑制能力(0.2 mg/mL)

3 結論

3.1 MNE在230 nm和270 nm處均有最大吸收峰，YNE在410 nm和665 nm處也有吸收峰。

3.2 MNE中的多酚含量高于YNE，但是黃酮含量低于YNE。3.3 YNE清除DPPH·的能力、與Fe 的絡合能力顯著高于MNE。在多酚含量為0.6 mg/mL以下時，YNE清除ABTS+·的能力高于MNE，但當多酚含量在0.6 mg/mL以上時無顯著差異。MNE及YNE清除OH·的能力相當。MNE對脂質過氧化的抑制能力顯著高于YNE。

［1］Ftefan Jouannic，Xavier Argout，Frédéric Lechauve，et al.A-nalysis of expressed sequence tags from oil palm(Elaeis guineensis)［J］.FEBS Letters，2005，579(12):2709 －2714

［2］Hasmadi Mamat，I Nor Aini，Mamot Said，et al.Physicochemical characteristics of palm oil and sunflower oil blends fractionated at different temperatures［J］.Food chemistry，2005，91:731－736

［3］M B Aguila，A R Pinheiro，J C F Aquino，et al.Different edible oil beneficial effects(canola oil，fish oil，palm oil，olive oil，and soybean oil)on spontaeously hypertensive rat glomerular enlargement and glomeruli number［J］.Prostaglandins ＆other lipid mediators，2005，76(1 －4):74 －85

［4］I S M Zaidul，N A Nik Norulaini，A K Mohd Omar，et al.Supercritical carbon dioxide(SC－CO2)extraction and fractionation of palm kernel oil from palm kernel as cooca butter replacers blend［J］.Journal of food engineering，2006，73(3):210－216

［5］Akhilesh Kumar，Sharmila Chattopadhyay.DNA damage protecting activity and antioxidant potential of pudina extract［J］.Food Chemistry，2007，100:1377 －1384

［6］王華，姚亞平，王畢妮，等.高粱籽粒提取物抗氧化活性的研究［J］.生產與科研實踐，2007，10:123－127

［7］Perumal Siddhuraju，Klaus Becker.The antioxidant and free radical scavenging activities of processed cowpea(Vigna unguiculata(L.)Walp.)seed extracts［J］.Food Chemistry，2007，101:10 －19

［8］Siddhuraju P.Antioxidant activity of polyphenolic compounds extracted from defatted raw and dry heated TamarIndus indica seed coat［J］.LWT － Food Science and Technology，2007，40:982－990

［9］龐戰軍，周玫，陳瑗.自由基醫學研究方法［M］.北京:人民衛生出版社，2000:2－3.

Study on In－vitro Antioxidant Property of Defatted Oil Palm Meat

Li Rui1，2Xia Qiuyu1，2Zhao Songlin1，2Chen Weijun1，2Tang Minmin1，2
(Coconut Research Institute of Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences1，Wenchang 571339)
(Engineering and Technology Research Center for Coconut Deep Process in Hainan Province2，Wenchang 571339)

The in－vitro antioxidant activity of young oil palm meat ethanol extract(YNE)and mature oil palm meat ethanol extract(MNE)were investigated.The results showed that the scavenging ability to DPPH radical of YNE was remarkably higher than MNE's，but both YNE's and MNE's DPPH radical scavenging ability were lower than Trolox，gallic acid and BHT.The complexation ability to ferrous iron of YNE was obviously higher than MNE and the contrasts，of which MNE was remarkably higher than Trolox，but lower than gallic acid and BHT.The scavenging rate to ABTS radical of YNE was higher than MNE when the polyphenol concentration was lower than 0.6 mg/mL and there was no obvious difference when the polyphenol concentration was above 0.6 mg/mL.The scavenging rate to OH radical of YNE and MNE was comparable，both of which were lower than 3 contrasts'.The lipid peroxidation inhibition ability of MNE was much higher than YNE，but obviously lower than 3 contrasts'.

defatted oil palm meat，ethanol extract，in vitro antioxidant property

TS229

A

1003－0174(2011)07－0095－04

海南省自然科學基金(309058)，中國熱帶農業科學院中央級公益性科研院所基本科研業務費(16300120 11004－7)

2010－08－19

李瑞，女，1981年出生，助理研究員，碩士，熱帶油料及油脂化工

趙松林，男，1965年出生，研究員，農產品加工及貯藏