抑菌圈自動測量系統(tǒng)及其在抗生素效價評價中的應(yīng)用

辛在海 ,王國雷

1.山東省千佛山醫(yī)院 醫(yī)學工程部，山東 濟南 250014；2.山東大學控制科學與工程學院 山東 濟南 250014

抑菌圈自動測量系統(tǒng)及其在抗生素效價評價中的應(yīng)用

辛在海1,王國雷2

1.山東省千佛山醫(yī)院 醫(yī)學工程部，山東 濟南 250014；2.山東大學控制科學與工程學院 山東 濟南 250014

當前，國內(nèi)外對抗生素測定的通用方法是微生物檢定法，該方法是通過測量微生物抑菌圈的大小得到抗生素的效價。本文系統(tǒng)介紹了抑菌圈自動測量系統(tǒng)的硬件和軟件設(shè)計，將圖像形態(tài)處理學的理論應(yīng)用于抑菌圈邊緣的提取。應(yīng)用各種邊緣提取算子對抑菌圈邊緣進行提取，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用canny算子得到的抑菌圈邊緣較為理想。最后利用抗生素濃度與抑菌圈直徑或面積的關(guān)系，求出樣品的效價。

抑菌圈；形態(tài)處理學；canny算子；抗生素效價

抗生素生物效價測定是以抗生素的抑菌力和殺菌力作為效價的衡量標準。抗生素效價的測量方法主要有2種：管碟法和比濁法（濁度法）。管碟法的原理是將已知濃度的標準溶液與未知濃度的樣品溶液在含有敏感性試驗菌的瓊脂表面進行擴散滲透，形成抑制試驗長菌的透明抑菌圈，對抑菌圈直徑或面積的大小進行測定，根據(jù)抗生素濃度與抑菌圈直徑或面積之間的關(guān)系，求出抗生素的生物效價。金杰等人[1]提出了一種利用BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)自學習自適應(yīng)能力，建立抗生素效價與抑菌圈直徑之間的預測模型，該方法簡便快捷，預測結(jié)果可靠。由此可見，抑菌圈大小的測量是系統(tǒng)設(shè)計的關(guān)鍵任務(wù)。傳統(tǒng)的手工測量法具有精度低，操作繁瑣，耗時長等缺點，后來出現(xiàn)的采用光學非接觸測量法的專用抑菌圈測量儀則價格昂貴，測量精度也不十分理想。本文利用VC++6.0作為開發(fā)環(huán)境，編寫了一個抑菌圈圖像處理和邊緣自動檢測的軟件，實現(xiàn)對抑菌圈的自動測量，克服了人工測量的缺點，取得了較為理想的結(jié)果。

1 工作任務(wù)

基于圖像處理的微生物抑菌圈自動測量分析系統(tǒng)是以計算機為中心，數(shù)字圖像處理技術(shù)為基礎(chǔ)。綜合利用了圖像傳感器、計算機和誤差處理等多種技術(shù)的一種新型的自動測量系統(tǒng)。系統(tǒng)設(shè)計工作流程如圖1所示。

如圖1所示，工作任務(wù)分為硬件設(shè)計和軟件設(shè)計。硬件主要負責對抑菌圈圖像進行采集并進行數(shù)值離散化，而軟件設(shè)計主要任務(wù)是應(yīng)用各種圖像處理方法對采集到的圖像進行處理和分析，得到質(zhì)量最高的圖像以方便我們提取抑菌圈邊緣，從而測量抑菌圈實際物理參數(shù)，最后對抗生素效價做出合理的評定。

圖1 系統(tǒng)設(shè)計工作流程圖

2 系統(tǒng)設(shè)計

2.1 硬件設(shè)計

硬件主要包括如下：運動控制卡（控制步進電機運動，從而方便我們獲取最佳的圖像視角）；CCD攝像頭；視頻采集卡；計算機。

2.2 圖像采集軟件設(shè)計

圖像采集軟件采用VFW技術(shù)實現(xiàn)視頻采集。VFW以消息驅(qū)動方式對視頻設(shè)備進行管理，可以很方便地控制設(shè)備數(shù)據(jù)流的工作過程。目前，大多數(shù)的視頻采集設(shè)備驅(qū)動程序都支持VFW接口，它主要包括多個動態(tài)連接庫，通過這些組件間的協(xié)調(diào)合作，來完成視頻的捕獲、視頻壓縮及播放功能。視頻數(shù)據(jù)的實時采集，主要通過AVICAP模塊中的消息、宏函數(shù)、結(jié)構(gòu)，以及回調(diào)函數(shù)來完成。本實驗主要通過宏函數(shù)來完成采集過程，每一個宏函數(shù)完成的功能都可以用相應(yīng)的消息機制來實現(xiàn)。

2.3 圖像分析軟件設(shè)計

由于抑菌圈內(nèi)外灰度相差較小，并且抑菌圈內(nèi)部有時也分布著菌落。這些都給抑菌圈的提取帶來困難。如果抑菌圈內(nèi)外灰度相差太小，在邊緣檢測過程中會出現(xiàn)斷邊，這對抑菌圈內(nèi)部分布的菌落會產(chǎn)成干擾，有時還會出現(xiàn)雙邊緣現(xiàn)象。這些干擾會給圖像分析軟件的設(shè)計帶來困難，所以如何提高圖像分析軟件的抗干擾能力是提高系統(tǒng)性能的關(guān)鍵。

為確定我們進行圖像處理的方法，我們在一個培養(yǎng)皿中只放置一個涂有抗生素的紙片，也就是說我們拍攝到的只有一個抑菌圈，這樣我們可以確定進行圖像處理選取的方法和進行的先后步驟。

通過多次圖像處理的方法比較，本實驗采用如圖2所示的圖像處理方法，無論是從處理的數(shù)據(jù)量還是圖像清晰度都得到了理想的結(jié)果。

圖像進行中值濾波后起到平滑作用，進行二值化處理方便我們進行圖像閉運算，這樣能夠?qū)D像的邊緣起到很好的平滑作用。以下為圖像處理前后比較，如圖3所示：

圖2 圖像分析軟件流程圖

圖3 圖像處理前后比較

接下來我們應(yīng)用各種邊緣檢測算子對抑菌圈邊緣進行檢測。常用的邊緣檢測算子有Roberts邊緣檢測算子、Sobel邊緣檢測算子、Prewitt邊緣檢測算子、Canny邊緣檢測算子等；另外還可以通過小波變換實現(xiàn)邊緣檢測。Roberts邊緣算子采用的是對角方向相鄰的2個像素之差，從圖像處理的實際效果來看，邊緣定位準，對噪聲敏感。Sobel和Prewitt算子都是先做加權(quán)平均，再微分，然后求梯度，效果一般。Canny算子具體實現(xiàn)有3個步驟：① 用高斯濾波器對圖像進行濾波，去除圖像中的部分噪聲；② 用高斯算子的一階微分對圖像進行濾波，得到圖像梯度的強度和方向；③ 對梯度進行非最大抑制和滯后閾值處理，得到邊緣圖像。

圖4是用各個微分算子對閉運算后的圖像進行邊緣提取的結(jié)果。

圖4 應(yīng)用各種方法提取圖像邊緣

接下來進行圖像周長和面積的自動計算。在菜單中點擊周長自動計算和面積自動計算時軟件會根據(jù)某種算法自動計算周長和面積的大小。這里計算周長和面積的思想如下：將白色區(qū)域視為背景，黑色區(qū)域視為物體，則從圖像的左下角開始追蹤，最后回到出發(fā)點的跟蹤方法。自動測量周長和面積結(jié)果如圖5所示。

圖5 周長和面積自動測量結(jié)果

可以看到，在圖像的下方都會對圖像的周長和面積的大小進行標注。當然，這里標注大小的單位為像素，可以根據(jù)像素值換算為實際的尺寸大小。經(jīng)過多組實驗，該系統(tǒng)測量結(jié)果穩(wěn)定，與實際數(shù)據(jù)出入不大，效果很不錯。

當然，為了排除邊緣輪廓自動提取跟蹤中可能出現(xiàn)的錯誤，軟件在設(shè)計時也保留了手動測量選項，由測量人員點擊鼠標選擇圖像邊緣。

3 抗生素效價評定

根據(jù)抗生素效價生物檢定的理論，抗生素測定法主要是利用抗生素在特定實驗菌的固體培養(yǎng)基內(nèi)呈球面行擴散，形成含一定濃度抗生素的球形區(qū)，抑制了實驗菌的繁殖而呈現(xiàn)出透明的抑菌圈。根據(jù)抗生素在一定濃度范圍內(nèi)，對數(shù)劑量與抑菌圈直徑或面積成線性關(guān)系，因此可以通過觀察抑菌圈并測量其半徑或面積，可以換算成抗生素效價。當然，該方法受多種因素的影響會引入一定的誤差。金杰等人[1]提出了利用BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)自學習自適應(yīng)能力，建立抗生素效價與抑菌圈直徑之間的預測模型。當然，這屬于生物醫(yī)學的問題，我們設(shè)計系統(tǒng)的關(guān)鍵是要精確測量抑菌圈的大小。

4 總結(jié)與展望

本文詳細論述了抑菌圈自動測量系統(tǒng)硬件軟件設(shè)計，

本系統(tǒng)具有結(jié)構(gòu)簡單、軟件系統(tǒng)用戶界面友好、精度高且工作效率高等優(yōu)點，實現(xiàn)了抑菌圈自動測量，并對抗生素效價做出了合理科學的評價標準。目前，市場上已經(jīng)將這套系統(tǒng)產(chǎn)品化。但對于抑菌圈邊緣的自動識別方法還有待我們進一步提出更合理的算法，消除噪聲和抑菌圈毛邊的影響。

[1] 金杰,郝燕,何建勇.BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)在抗生素效價測定中的應(yīng)用[J].哈爾濱工程大學學報,2006,27(7):206-208.

[2] 趙志強,張思祥.抗生素抑菌圈自動測量系統(tǒng)的研制[J].分析儀器,2008,39(5):23-26.

[3] 楊淑瑩.VC++圖像處理程序設(shè)計[M].北京:清華大學出版社,2005.

[4] 齊永奇.基于圖像處理的微生物抑菌圈自動測量分析系統(tǒng)的研究[D].鄭州:鄭州大學2000.

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Inhibition Zone Automatic Measurement System and Its Application in Antibiotic Potency Evaluation

XIN Zai-hai1,WANG Guo-lei2
1.Medical Engineering Department,Qianfoshan Hospital,Jinan Shandong 250014,China; 2.Control Science and Engineering, Shandong University,Jinan Shandong 250014,China

Nowadays，the general method for determination of antibiotics in domestic and abroad is microbial assays. The method is measuring the size of inhibition zone by microbial potency of antibiotics.This paper introduces the inhibition zone automatic measurement system hardware and software design,forms the image processing theories applied to extract the edge of inhibition zone. Using lots of edge detection operators to extract the edge of inhibition zone, we found that the canny operators are ideal application to extract edge of inhibition zone. Finally, use the relationship between concentration of antibiotics and inhibition zone diameter or area to obtain the potency of the samples.

inhibition zone; the theory of form process; canny operator; antibiotic potency

TH789

A

10.3969/j.issn.1674-1633.2011.08.040

1674-1633(2011)08-0109-03

2011-03-01

作者郵箱：xinzaihai1982@163.com