金線蓮莖尖的組培快繁技術研究

李丹丹 張付遠

江西環境工程職業學院園林與建筑學院 341000

金線蓮莖尖的組培快繁技術研究

李丹丹 張付遠

江西環境工程職業學院園林與建筑學院 341000

本研究以金線蓮莖尖作為外植體，研究了不同激素濃度對金線蓮莖尖誘導、增殖及生根率的影響。結果表明：對于金線蓮比較適合的誘導培養基是：MS+ 6-BA 4. 0mg/L + ZT0. 2mg/L +NAA 0. 5mg/L；增殖較佳的組合是1/2Ms+6-BA0·4mg·L-1+ NAA0· 2mg·L-1。當NAA的濃度達到2·0 mg·L-1時生根率最高，可以達到100%。

金線蓮；6-BA；NAA

金線蓮為蘭科開唇蘭屬多年生珍稀中草藥。素有“藥王”、“金草”、“神藥”、“烏人參”等美稱。金線蓮具有涼血瀉火、消腫止痛的功效，能調節體內分泌，抑制分泌過多的油質，促進皮膚細胞的新陳代謝，服用后對青春痘、粉刺、各種黑斑、雀斑、老人斑效果奇佳。野生金線蓮干貨最高曾漲到每公斤3000多元。

金線蓮種子微小，胚發育不完全，在自然條件下極難出芽；若以分根或扦插繁殖，則耗時長且繁殖系數低，金線蓮賴以生存的自然環境發生變化，野生資源銳減，現已瀕絕，加上長期采挖，種質資源稀缺，已瀕臨滅絕，已不能滿足臨床需要。目前，雖然組培快繁金線蓮雖已有報道，金線蓮的組培快繁技術在各個環節上的研究取得較大進展，但還不太穩定，規模化、產業化生產的關鍵技術有待進一步研究和突破，如誘導培養基、繼代培養基和生根培養基的配方問題，若能解決這些制約因素，組培快繁技術在金線蓮產業化生產過程中將大有作為[1-2]。

本研究以觀賞金線蓮幼嫩莖尖為外植體，采用組織培養生物技術金線蓮進行組培快繁研究，包括初代培養、繼代培養、生根培養等階段的影響和制約因素的研究。

1 、材料與方法

1.1 材料

以福建的野生金線蓮莖尖作為培養的材料。

1.2 方法

1.2.1 外植體的選擇與培養

小心切取金線蓮的莖尖，流水沖洗1h，取出后吸干表面水分以75%酒精浸泡12s，然后再用0.1%的升汞溶液浸泡15min，無菌水沖洗5 遍，再用無菌濾紙吸干表面水分，在超凈工作臺上，小心的剝去莖尖外面的包片，接種于： MS+ 6-BA 4. 0mg/L + ZT0. 2mg/L +NAA 0. 5mg/ L的培養基上。

1.2.2 不定芽的增殖

將長1～2cm的莖段接種于誘導不定芽的培養基(表1)上，20d后，莖節間開始膨大、腋芽發白，漸漸突起并伸長。40d后，腋芽生長良好，不經過愈傷組織階段,并且有的基部又長出新芽。

1.2.3 生根

采用生長健壯，繼代3次后的高約 2cm的幼苗用作試驗材料?；九囵B基是組培苗生根的營養來源, 一般低濃度的營養成分有利于組培苗的根誘導。生根培養以 1/ 4MS為基本培養基，均分別附加0.5 mg·L-1的NAA，共 5個處理。生根培養40d后統計生根情況。

1.2.3 培養條件

培養基均附加蔗糖20 g·L-1，瓊脂6.2g·L-1，pH值5.6-6.0。培養溫度25 ±2℃，光強 2000～2500Lx，光照10h/ d。

2 、結果與分析

2.1 不同激素濃度配比對金線蓮增殖的影響

在金線蓮的組織培養過程中，芽增殖是十分關鍵的環節，只有提高增殖倍數，才能達到快速繁殖的目的。在金線蓮繼代培養過程中，影響金線蓮芽增殖的一個關鍵因素就是培養基中激素濃度的配比。為了研究激素配比對金線蓮芽增殖的影響 ，以1/2Ms為基本培養基，附加6-BA和 NAA進行配比試驗（見表1）。

表1 不同激素配比對金線蓮芽增殖的影響

從表 1 可以看出，當 NAA 濃度為0. 5 mg·L-1時，隨著6-BA濃度的增加，再生芽的增殖系數呈上升趨勢，同時 6 -BA 濃度為 3.0mg·L-1時，雖然增殖系數最大，但增殖的芽纖細，葉片小，長勢差 ，故6 - BA濃度以3.0mg·L-1為宜。

2.2 NAA濃度對金線蓮生根的影響

把繼代培養的金線蓮無根苗切割成單苗,接種在培養基上誘導生根，培養20 d 后開始有根冒出，隨后根的數量進一步增多，并逐漸伸長，到30 d 左右統計各處理的生根情況。

NAA濃度對金線蓮生根率的影響比較大，結果見表3。本實驗以不附加NAA作為對照，生根率并非隨著NAA濃度的增加而增加，當NAA濃度為2.0 mg·L-1時生根率達到最大。試驗只對濃度對發根的影響進行了調查, 因此對等其它生長素類及生長素的相互混合使用效果則有待于進一步研究。

表2 NAA濃度對金線蓮生根的影響

3 、結論與討論

3.1 不同激素配比對金線蓮芽增殖的影響

影響金線蓮組織培養的因素主要有基本培養基、激素配比、有機添加物及培養條件，其中激素配比是最為關鍵的因素[3-

5]。

對于金線蓮芽誘導和增殖最佳激素種類和濃度配比，不同學者研究結果有所差異，王雅英[3]通過正交試驗認為Ms+6-BA3. 5mg·L-1+KT1.5mg·L-1+ NAA0.6mg· L-1組合是芽快速成增殖的最佳配方，三種激素對芽繼代增殖系數影響大小為6-BA>NAA>KT；劉潤東[4]認為6-BA和NAA濃度過高不利于芽叢的發生，在附加6-BA1.0mg·L-1的Ms培養基上，添加低濃度的ZT能明顯促進芽叢的發生；范子南[5]認為6-BA對芽分化具有促進作用，隨著6-BA濃度的提高其促進芽分化的過程也加強。結合本試驗認為：金線蓮芽誘導的比較合適激素配比為MS+ 6-BA 4. 0mg/ L + ZT0.2mg/L+NAA0.5mg/L；而增殖較為理想的激素配比為1/2Ms+6-BA3. 0mg·L-1+ NAA0.5mg·L-1

3.2 NAA對金線蓮的生根的影響

NAA對金線蓮的生根的影響比較大，但生根率并非隨著NAA濃度的增加而增加，當NAA的濃度達到2.0 mg·L-1時生根率最高，可以達到100%。

總之隨著民間珍稀藥用植物資源的日趨枯竭,采用現代生物技術通過組織培養加速開發對發掘傳統的民間中草藥有著極其深遠的意義。

[1]馬以忠，鄧琳瓊，黃麗華.金線蓮的研究現狀及展望[J].貴州科學.2007，25 (2):81～84

[2]陳芝華，胡啟燦.金線蓮組培快繁與移栽試驗研究[J].三明農業科技.2005，103(3): 13～15·

[3]王雅英，林榮耀，楊忠耿等.金線蓮快速繁殖及促根壯苗試驗[J].亞熱帶植物科學. 2005，34( 3) : 40～42

[4]劉潤東，郭文杰，林忠寧等.金線蓮組織培養及營養成分的分析研究[J]. 廣西農業科學. 2006, 37(5) : 506 -509·

[5]范子南，肖華山，范曉紅等.金線蓮組織培養研究[J]·福建師范大學學報. 1997，13(2) : 82 ～87·

李丹丹，女，碩士，主要從事植物植物組培研究。

10.3969/j.issn.1001-8972.2011.21.019