半枝蓮化學(xué)成分的分離與鑒定

余群英，張德武，戴勝軍

（煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院，山東 煙臺(tái) 264005）

化學(xué)成分

半枝蓮化學(xué)成分的分離與鑒定

余群英，張德武，戴勝軍*

（煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院，山東 煙臺(tái) 264005）

目的：對(duì)半枝蓮Scutellaria barbata D.Don全草的化學(xué)成分進(jìn)行研究。方法：采用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、重結(jié)晶等方法進(jìn)行分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果：分離鑒定了 9個(gè) 化 合 物，分 別 為：β-谷 甾 醇 （β-Sitosterol，1）、5-羥 基-7，4′-二 甲氧 基 黃 酮 （5-hydroxy-7，4′-dimethoxyflavone，2）、5-羥基-7，8，4′-三甲氧基黃酮（5-hydroxy-7，8，4′-trimethoxyflavone，3）、三裂鼠尾草素（5-Hydroxy-6，7，4′-trimethoxyflavone，salvigenin，4）、漢黃芩素（5，7-dihydroxy-8-methoxyflavone，wogonin，5）、2-羥基-3-甲基蒽醌（2-hydroxy-3-methylanthraquinone，6）、反式-3-（4′-羥基苯基）丙烯酰乙酯 ［（E）-3-（4-hydroxyphenyl）acrylic acid ethyl ester，7］、對(duì)羥基苯甲酰乙酯（ethyl-4-hydroxy benzoate，8）、對(duì)羥基苯甲醛（p-hydroxybenzaldehyde，9）。結(jié)論：化合物2，3，6，7為首次從黃芩屬中分離得到，化合物4為第一次從半枝蓮中發(fā)現(xiàn)。

唇形科；黃芩屬；半枝蓮；化學(xué)成分

半枝蓮為唇形科黃芩屬半枝蓮Scutellaria barbataD.Don的干燥全草［1］，別名狹葉韓信草、并頭草、牙刷草等，分布于我國(guó)大部分地區(qū)。《全國(guó)中草藥匯編》中記載 “味微苦，性涼，歸肝、腎、肺經(jīng)，具有清熱解毒、活血祛瘀、消腫止痛、抗癌功效。用于腫瘤、闌尾炎、肝炎、肝硬化腹水、肺膿瘍；外用治乳腺炎、癰癤腫毒、毒蛇咬傷、跌打損傷等”［2］。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，半枝蓮具有抗腫瘤、抗氧化、解熱保肝、抗病原微生物、免疫調(diào)節(jié)、抗致突變等作用［3-5］。為了尋找半枝蓮中的生物活性成分，作者對(duì)半枝蓮干燥全草的75%乙醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分研究，共分離鑒定了9個(gè)化合物，分別為 β-谷甾醇（β-Sitosterol，1）、5-羥基-7，4′-二甲氧基黃酮（5-hydroxy-7，4′—dimethoxyflavone，2）、5-羥基-7，8，4′-三甲氧基黃酮（5-hydroxy-7，8，4′-trimethoxyflavone，3）、三裂鼠尾草素（5-Hydroxy-6，7，4′-trimethoxyflavone，Salvigenin，4）、漢黃芩素（5，7-dihydroxy-8-methoxyflavone，wogonin，5）、2-羥基-3-甲基蒽醌（2-hydroxy-3-methyl anthraquinone，6）、反式-3-（4′-羥基苯基）丙烯酰乙酯 ［（E）-3-（4-hydroxyphenyl）acrylic acid ethyl ester，7］、對(duì)羥基苯甲酰乙酯 （Ethyl-4-hydroxy benzoate，8）、對(duì)羥基苯甲醛（p-hydroxybenzaldehyde，9），化合物2～9的結(jié)構(gòu)式見圖1。其中化合物2，3，6，7為首次從黃芩屬中分離得到，化合物4為第一次從半枝蓮中發(fā)現(xiàn)。

圖1 化合物2～9化學(xué)結(jié)構(gòu)

1 儀器與試藥

XT-4微型熔點(diǎn)測(cè)定儀（溫度未校正），Autospec-Ultima ETOF型質(zhì)譜儀，Varian Unity BRUKER-400型核磁共振儀，島津UV240紫外光譜儀。Sephadex LH-20（北京金歐亞進(jìn)口分裝）；薄層色譜硅膠（GF254）、柱色譜硅膠（200～300目）（青島海洋化工廠）。半枝蓮藥材購(gòu)于山東濟(jì)寧市，經(jīng)煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院生藥室趙燕燕教授鑒定為半枝蓮Scutellaria barbataD.Don的干燥全草，標(biāo)本（YP08077）保存于煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院標(biāo)本室。

2 提取分離

干燥的半枝蓮全草5kg用6倍量體積分?jǐn)?shù)75%乙醇回流提取3次，每次1.5 h，提取液合并，減壓濃縮得浸膏，將浸膏懸浮于適量水中，依次用石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇反復(fù)萃取。三氯甲烷部分（101 g）進(jìn)行硅膠柱色譜分離，用環(huán)己烷－丙酮梯度洗脫。其中90∶5洗脫部分先上硅膠柱，環(huán)己烷－丙酮梯度洗脫，得化合物1；90∶10洗脫部分上硅膠柱，環(huán)己烷－丙酮梯度洗脫，分別得化合物2、3；90∶13洗脫部分再上硅膠柱，環(huán)己烷－丙酮梯度洗脫，配合制備薄層色譜 ［三氯甲烷－甲醇（15∶1）］，分別得化合物 4、5、6；80∶20洗脫部分同樣上硅膠柱，環(huán)己烷－丙酮梯度洗脫，結(jié)合制備薄層色譜 ［（三氯甲烷－甲醇（10∶1）］，分別得化合物7、8；75∶25洗脫部分也再次上硅膠柱，環(huán)己烷－丙酮梯度洗脫，經(jīng)制備薄層色譜 ［三氯甲烷－甲醇（8∶1）］，得化合物9。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

無色針晶（石油醚 －醋酸乙酯），mp.136～137℃。噴10%硫酸－乙醇溶液顯紫紅色。Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性。將該化合物與對(duì)照品β-谷甾醇共薄層色譜，Rf值在多種溶劑系統(tǒng)中一致，故鑒定該化合物為β-谷甾醇。

3.2 化合物2

淡黃色針晶（丙酮），mp.163～165℃。鹽酸－鎂粉反應(yīng)顯陽性，提示該化合物可能為黃酮類化合物。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）譜中，δ12.91（1H，s）表明有5-OH；δ8.04（2H，d，J＝8.8 Hz，H-2′，6′），7.11（2H，d，J＝8.8 Hz，H-3′，5′）組成 AA′BB′系統(tǒng)；δ6.91（1H，s）為黃酮 H-3特征信號(hào)；δ6.77（1H，d，J＝2.2 Hz，H-8），6.37（1H，d，J＝2.2 Hz，H-6）表明存在間位偶合的兩個(gè)芳香質(zhì)子；δ3.87（3H，s），3.86（3H，s）為 2個(gè)甲氧基信號(hào)。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz），δ 163.6（C-2），103.7（C-3），182.0（C-4），161.2（C-5），98.0（C-6），165.2（C-7），92.7（C-8），157.3（C-9），104.7（C-10），122.7（C-1′），128.4（C-2′），114.6（C-3′），162.4（C-4′），114.6（C-5′），128.4（C-6′），56.1（-OCH3），55.6（-OCH3）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道的 5-羥基-7，4′-二甲氧基黃酮一致，故鑒定該化合物為5-羥基-7，4′-二甲氧基黃酮。

3.3 化合物3

淡黃色針晶（三氯甲烷－甲醇），mp.286～288℃。鹽酸 －鎂粉和 FeCl3反應(yīng)呈陽性。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）譜中，δ12.60（1H，s）為黃酮5-OH特征信號(hào)；δ7.92（2H，d，J＝9.0 Hz，H-2′，6′），7.02（2H，d，J＝9.0 Hz，H-3′，5′）構(gòu)成 AA′BB′偶合系統(tǒng)；δ6.59（1H，s）歸為H-6信號(hào)；δ6.42（1H，s）歸為 H-3信號(hào)；δ3.94（3H，s），3.90（3H，s），3.85（3H，s）表明存在 3個(gè)甲氧基。13CNMR（CDCl3，100 MHz）δ163.9（C-2），103.8（C-3），182.7（C-4），157.5（C-5），95.7（C-6），158.5（C-7），128.9（C-8），149.4（C-9），104.8（C-10），123.6（C-1′），128.1（C-2′），114.6（C-3′，5′），162.7（C-4′），114.6（C-5′），128.1（C-6′），55.5（4′-OCH3），56.3（7-OCH3），61.7（8-OCH3）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道的 5-羥基-7，8，4′-三甲氧基黃酮一致，故鑒定該化合物為5-羥基-7，8，4′-三甲氧基黃酮。

3.4 化合物4

淡黃色針晶（丙酮），mp.191～192℃鹽酸－鎂粉反應(yīng)呈陽性，提示該化合物可能為黃酮類化合物。ESI-MSm／z329.1［M＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）譜中，δ12.88（1H，s）為黃酮5-OH特征信號(hào)；δ8.05（2H，d，J＝9.0 Hz，H-2′，6′），7.11（2H，d，J＝9.0 Hz，H-3′，5′）構(gòu)成 AA′BB′偶合系統(tǒng)；δ6.93（1H，s）為黃酮 H-3特征信號(hào)；δ6.91（1H，s）為 H-8信號(hào)；δ3.93（3H，s），3.87（3H，s），3.75（3H，s）歸為 3個(gè)甲氧基信號(hào)。13CNMR（DMSO-d6，100 MHz），δ163.5（C-2），103.2（C-3），182.1（C-4），152.0（C-5），131.8（C-6），158.6（C-7），91.5（C-8），152.5（C-9），105.0（C-10），122.6（C-1′），128.2（C-2′，6′），114.5（C-3′，5′），162.3（C-4′），59.9（6-OCH3），56.3（7-OCH3），55.5（4′-OCH3）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道的三裂鼠尾草素一致，故鑒定該化合物為三裂鼠尾草素。

3.5 化合物5

黃色針晶（三氯甲烷），mp.203～204℃。鹽酸－鎂粉反應(yīng)呈紅色，提示該化合物可能為黃酮類化合物。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）譜中，δ 12.51（1H，s）為黃酮5-OH質(zhì)子特征信號(hào)；δ10.82（1H，s）歸為 7-OH質(zhì)子信號(hào)；δ8.09（2H，m），7.60（3H，m）歸屬為B環(huán)上5個(gè)質(zhì)子信號(hào)；δ6.99（1H，s）表明存在 H-3；δ6.32（1H，s）為 H-6信號(hào)；δ3.87（3H，s）歸為甲氧基質(zhì)子信號(hào)。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）：δ163.0（C-2），105.0（C-3），182.0（C-4），156.2（C-5），99.1（C-6），157.4（C-7），127.8（C-8），149.8（C-9），103.7（C-10），130.8（C-1′），129.2（C-2′，6′），126.2（C-3′，5′），122.0（C-4′），61.0（-OCH3）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道的漢黃芩素一致，故鑒定該化合物為漢黃芩素。

3.6 化合物6

黃色粉末（丙酮），mp.302～304℃。UV（CH3OH）λmax（nm）：244，276為蒽醌類化合物的特征吸收。ESI-MSm／z237.4［M＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）譜中：δ11.0（1H，s，C2-OH）表明存在 β-酚羥基；δ8.11（2H，m，H-5，8），7.86（2H，m，H-6，7）分別為蒽醌母核一個(gè)芳環(huán)上α位和β位上質(zhì)子信號(hào)；δ7.91（1H，s，H-4），7.52（1H，s，H-1）為蒽醌母核一個(gè)芳環(huán)上α位上的兩個(gè)質(zhì)子信號(hào)；δ2.27（3H，s，C3-CH3）歸為 β-CH3質(zhì)子信號(hào)。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）：δ111.2（C-1），161.2（C-2），131.8（C-3），129.8（C-4），124.9（C-4a），126.4（C-5），134.3（C-6），133.8（C-7），126.4（C-8），133.1（C-8a），182.4（C-9），133.0（C-9a），181.5（C-10），133.1（C-10a），16.1（CH3）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道的2-羥基-3-甲基蒽醌一致，故鑒定該化合物為2-羥基-3-甲基蒽醌。

3.7 化合物7

油狀物（丙酮），與 FeCl3-K3［Fe（CN）6］試劑顯藍(lán)色，說明存在酚羥基。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）譜中共有12個(gè)質(zhì)子信號(hào)：δ10.0（1H，br.s，4′-OH）為酚羥基信號(hào)；δ7.62（1H，d，J＝16.0 Hz，H-2），6.35（1H，d，J＝16.0 Hz，H-2）為一典型反式雙鍵的兩個(gè)質(zhì)子信號(hào)；δ7.51（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2′，6′），6.81（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3′，5′）為苯環(huán)上的 AA′BB′偶合系統(tǒng)質(zhì)子信號(hào)；δ4.17（2H，q，J＝7.1 Hz），1.28（3H，t，J＝7.1 Hz）表明有-O-CH2CH3片段；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：167.8（-C＝O），116.0（C-2），114.6（C-3），144.9（C-1′），129.9（2C-2′，6′），126.0（2C-3′，5′），159.1（C-4′），60.3（-CH2），14.2（-CH3）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)［11］對(duì)照一致，故鑒定該化合物為反式-3-（4′-羥基苯基）丙烯酰乙酯［（E）-3-（4-hydroxyphenyl）acrylic acid ethyl ester］。

3.8 化合物8

無色結(jié)晶（石油醚 －醋酸乙酯），mp.117～118℃。與FeCl3-K3［Fe（CN）6］試劑顯藍(lán)色，示有酚羥基存在。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）譜中共有10個(gè)質(zhì)子信號(hào)：δ10.35（1H，br.s，4′-OH）為酚羥基質(zhì)子信號(hào)；δ7.83（2H，d，J＝8.6 Hz，H-2′，6′），6.87（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3′，5′）處出現(xiàn)的雙質(zhì)子雙峰構(gòu)成一個(gè)AA′BB′偶合系統(tǒng)；δ4.26（2H，q，J＝7.0 Hz），1.31（3H，t，J＝7.0 Hz）說明結(jié)構(gòu)中有-O-CH2CH3片段。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)［12］對(duì)照一致，故鑒定該化合物為對(duì)羥基苯甲酰乙酯（Ethyl-4-hydroxy benzoate）。

3.9 化合物9

無色針晶（石油醚－醋酸乙酯），mp.111～113℃。與FeCl3-K3［Fe（CN）6］試劑顯藍(lán)色，示有酚羥基存在。1H-NMR（DMSO-d6，400MHz）譜中共有6個(gè)質(zhì)子信號(hào)：δ10.64（1H，br.s，-OH）為酚羥基信號(hào)；δ9.80（1H，s，-CHO）為醛基質(zhì)子信號(hào)；δ7.78（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2′，6′），6.95（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3′，5′），說明有一個(gè)AA′BB′偶合系統(tǒng)的苯環(huán)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)［13］對(duì)照一致，故鑒定該化合物為對(duì)羥基苯甲醛（p-hydroxybenzaldehyde）。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：109.

［2］《全國(guó)中草藥匯編》編寫組.全國(guó)中草藥匯編（上冊(cè)）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：228-229.

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［8］張占軍，楊小生，朱文適，等.土黨參化學(xué)成分研究［J］.中草藥，2005，36（8）：1144-1146.

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Isolation and Identification of Chem ical Constituents from the W hole Herb of Scutellaria Barbata

YU Qun-ying，ZHANG De-wu，DAI Sheng-jun
（School of Pharmaceutical Science，Yantai University，Yantai 264005，China）

Objective：To investigate the chemical constituents of the whole herb of Scutellaria barbata D.Don.Methods：The compounds were isolated by silica gel column chromatography and purified by Sephadex LH-20 column chromatography and recrystallization.The structures were elucidated on the basis of physicochemical properties and spectroscopic analyses.Results：Nine compounds were separated and identified as：β-sitosterol（1），5-hydroxy-7，4′-dimethoxyflavone（2），5-hydroxy-7，8，4′-trimethoxyflavone（3），5-hydroxy-6，7，4′-trimethoxyflavone，salvigenin（4），5，7-dihydroxy-8-methoxyflavone（wogonin，5），2-hydroxy-3-methylanthraquinone（6），（E）-3-（4-hydroxyphenyl）acrylic acid ethyl ester（7）；ethyl-4-hydroxybenzoate（8），p-hydroxybenzaldehyde（9）.Conclusion：compounds 2，3，6，7 were isolated from the genus Scutellaria for the first time，and compound 4 was obtained from S．barbata.

Lamiaceae；Scutellaria；Scutellaria barbata；Chemical constituents

*戴勝軍，Tel：（0535）6706025，E-mail：sjdai8616＠sina.com

2010-10-20）