二月桂酸甘油酯類脂囊泡的制備及研究

常 蘭，顏 麗

(1.核工業(yè)西南物理研究院，四川成都610041; 2.成都理工大學(xué)工程技術(shù)學(xué)院，四川成都614007;3.廣州市信息工程職業(yè)學(xué)校，廣東廣州510370)

二月桂酸甘油酯類脂囊泡的制備及研究

常 蘭1，2，顏 麗3

(1.核工業(yè)西南物理研究院，四川成都610041; 2.成都理工大學(xué)工程技術(shù)學(xué)院，四川成都614007;3.廣州市信息工程職業(yè)學(xué)校，廣東廣州510370)

用自制的二月桂酸甘油酯為原料，制備了包裹親水性藥物抗壞血酸的類脂囊泡。通過正交設(shè)計優(yōu)化類脂囊泡制備工藝，最優(yōu)條件為:超聲時間為15min，水相溫度為0℃，m(脂質(zhì))∶m(藥物)=10∶1，m(脂質(zhì))∶m(膽固醇)=2∶1，得到了藥物包封率最高約為34.6%。結(jié)果表明，以自制的非離子表面活性劑為原料能夠形成包封率和穩(wěn)定性較好的納米藥物載體，為納米類脂囊泡的合成提供一種價格低廉且可工業(yè)化生產(chǎn)的原料。

二月桂酸甘油酯，類脂囊泡，包封率

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

二月桂酸甘油酯 自制;抗壞血酸、硫酸鐵胺、鄰菲羅林 天津科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心，分析純;膽固醇 上海生物化學(xué)試劑公司，分析純。

TECNAI-10型透射電子顯微鏡 Philips公司; XSP-8F-0300系列生物顯微鏡 廣西梧州市光學(xué)儀器廠;TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計 北京普杯通用儀器有限責任公司;CQ250超聲波清洗器 上海超聲波儀器廠;TGL-16C型臺式離心機上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.2 實驗方法

采用超聲乳化法制備抗壞血酸類脂囊泡，選用鄰二氮菲分光光度法測定抗壞血酸的含量［5-6］。

1.2.1 游離藥物最大吸收波長及標準曲線 取抗壞血酸標準溶液 3mL，加入 4mL顯色劑，定容至100mL。置1cm吸收池中，在分光光度計上以等濃度顯色劑為空白，于400～800nm波長范圍內(nèi)掃描，掃描圖譜中最大吸收波長為510nm，所以選用510nm作為檢測波長。再準確量取抗壞血酸標準液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于100mL容量瓶中，加入顯色劑4mL，混合，放置1min，用蒸餾水稀釋至刻度，在λ= 510nm波長處測定吸光度A，以吸光度(A)對濃度(C)進行線性回歸，計算回歸方程和線性范圍。抗壞血酸游離藥物的紫外吸光度和濃度的線性回歸方程為:A=0.10756C+0.00635(r=0.99989)，線性范圍為2.08～10.09μg/mL，線性關(guān)系良好。

1.2.2 抗壞血酸類脂囊泡包封率的測定 離心法測定包封率。將類脂囊泡混懸液加入蒸餾水混勻，置于離心管中，配對后放入離心機中離心，運行參數(shù)為:轉(zhuǎn)速8000r/min，離心10min。離心后取上清液，測定上清液中游離抗壞血酸的含量。根據(jù)下式計算包封率。

類脂囊泡包封率(%)=m1/m2×100%

式中，m1:添加VC總質(zhì)量-上清液中VC質(zhì)量; m2:添加VC的質(zhì)量。

1.2.3 正交設(shè)計因素和水平的確定及實驗設(shè)計 篩選制備過程中超聲時間、m(脂質(zhì))∶m(膽固醇)、m(脂質(zhì))∶m(藥物)和水相溫度四個影響因素，每個因素選擇3個水平，按正交設(shè)計的原理用設(shè)計表L9(34)做四因素三水平正交實驗，以類脂囊泡的包封率作為制備篩選最佳實驗條件。表1為正交設(shè)計實驗的因素和水平表。

表1 正交實驗因素水平表

2 結(jié)果與討論

2.1 超聲乳化法所得微粒形態(tài)

超聲乳化法所得抗壞血酸類脂囊泡顯微鏡照片如圖1和圖2。圖1是透射電鏡觀測到的微粒結(jié)構(gòu)，可知類脂囊泡基本呈圓球狀或橢圓球狀，形態(tài)圓整，粒徑在300nm左右，大小分布均勻，沒有發(fā)生聚集，分散性良好。圖2是生物顯微鏡觀測到的微粒結(jié)構(gòu)，可以看到清晰的脂質(zhì)雙層囊泡結(jié)構(gòu)，說明二月桂酸甘油酯可形成狀態(tài)良好的脂質(zhì)囊泡。

圖1 抗壞血酸類脂質(zhì)囊泡透射電鏡照片

2.2 正交設(shè)計優(yōu)化實驗結(jié)果及數(shù)據(jù)處理

2.2.1 正交設(shè)計實驗結(jié)果 表2為類脂囊泡處方和制備工藝的正交設(shè)計實驗結(jié)果表。

圖2 抗壞血酸類脂質(zhì)囊泡透射生物顯微鏡照片(×1000)

由表2極差分析可知，影響反應(yīng)包封率的因素主次關(guān)系為水相溫度＞m(脂質(zhì))∶m(膽固醇)＞m (脂質(zhì))∶m(藥物)＞超聲時間。抗壞血酸類脂囊泡制備的最優(yōu)條件為A2B2C2D1，即超聲時間為15min，水相溫度為0℃，m(脂質(zhì))∶m(藥物)=10∶1，m(脂質(zhì))∶m(膽固醇)=2∶1。

表2 正交實驗結(jié)果

2.2.2 結(jié)果分析 m(脂質(zhì))∶m(膽固醇)=2∶1時包封率最高。這是因為適量的膽固醇可增加膜強度而利于藥物的包裹，起到穩(wěn)定脂膜和減少泄漏作用。但膽固醇過量會增加脂質(zhì)雙分子不對稱性，不對稱性更易導(dǎo)致膜的疏松，使藥物泄漏。

當m(脂質(zhì))∶m(藥物)=10∶1時，包封率最高。我們推測這是由于包封率隨藥物比例的增加而增大，但類脂囊泡的囊泡空間有限，包封抗壞血酸存在飽和點。

稀釋介質(zhì)水溶液為0℃時，包封率最高。隨著水溫增加，器壁上粘附有白色的物質(zhì)，類脂囊泡混懸液中含有少量白色塊狀物，不能形成均勻乳液，導(dǎo)致包封失敗。

超聲15min時，包封率最高，繼續(xù)延長超聲時間，包封率急劇下降。圖3是超聲40min后，類脂囊泡的掃描電鏡照片，可以觀察到囊泡的凹陷，說明超聲時間過長，會使類脂囊泡發(fā)生破裂，導(dǎo)致藥物的泄露。

3 結(jié)論

3.1 本研究表明，以自制的甘油二酯為原料能夠形成包封率較好的類脂囊泡納米藥物載體，為類脂囊泡的合成提供了一種價格低廉的原料。

3.2 實驗中得到類脂囊泡藥物包封率最高約為34.6%，在水溶性藥物中包封率較高。

圖3 超聲40min后類脂囊泡掃描電鏡照片

3.3 本課題組正進行以二月桂酸甘油酯為原料包封脂溶性藥物的相關(guān)實驗，從而比較二月桂酸甘油酯包封水溶性藥物和脂溶性藥物的差別，有待進一步研究。

［1］U CHEGBU IF.Non-ionic surfactant based vesicles (niosomes)in drug delivery［J］.Int JPharm，1998，172(1):33.

［2］穆筱梅，鐘振聲，梁世強.復(fù)乳法制備聚乙烯醇修飾果酸脂質(zhì)體［J］.日用化學(xué)工業(yè)，2007(10):341-343.

［3］UCHEGBU IF，SCHATZLEIN A，VANLERBERGHE G，et al.Polyhedral non-ionic surfactantvesicles［J］.JPharm Pharmcol，1997，49(6):606.

［4］ARUNOTHAYANUN P，BERNARD MS，CRAIG DQM，et al. The effect of processing variables on the physical characteristics of non-ionic surfactant vesicles(niosomes)formed from a hexadecyl diglyc-erol ether［J］.Int JPharm，2000，201(1):7.

［5］陳玉鑾，肖景嫻，周祝敏.磷鉬鎢三元雜多酸光度法測定藥物中的抗壞血酸［J］.分析測試技術(shù)與儀器，1995，1(3): 17-21.

［6］楊鳳儀，張平嫦.熒光微量法測定血漿中抗壞血酸的新方法［J］.廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1996，24(4):81-83.

Study on preparation of niosomes with glyceryl dilaurate

CHANG Lan1，2，YAN Li3
(1.Southwest Institution of Physics，Chengdu 610041，China; 2.The Engineering and Technical College of Chengdu University of Technology，Chengdu 614007，China; 3.Information Vocational School of Guangzhou，Guangzhou 510370，China)

VCwas encapsulated in niosomes formed by glyceryl dilaurate via a ultrasound method.The preparation process was optimized by orthogonal experiment.The optimal conditions were found to be the ultrasound time 15min，the water temperature 0℃，the material and cholesterol ratio 2∶1，the material and drug ratio 10∶1.The highest entrapmention efficiency was 34.6%.The results showed that with self-made nonionic surfactant as raw material，nano drug carrier with good entrapmention efficiency and stability was obtained.Glyceryl dilaurate was a cheaply raw material and can be used in industrial production.

glyceryl dilaurate;niosomes;entrapmention efficiency

TS201.1

B

1002-0306(2011)09-0303-03

類脂囊泡(niosome)是用可生物降解的非離子表面活性劑制成的新型給藥載體，具有與脂質(zhì)體類似的囊泡結(jié)構(gòu)［1］。脂質(zhì)體是由磷脂分散在水中定向排列而形成，是熱力學(xué)不穩(wěn)定系統(tǒng)，存在包封物易泄漏，脂質(zhì)體易聚結(jié)等問題［2］。與兩性表面活性劑磷脂相比，非離子表面活性劑具有穩(wěn)定性好、可根據(jù)具體要求選擇類脂載體的配方組成等優(yōu)點。近年來國外將非離子表面活性劑載體作為新型給藥系統(tǒng)的研究越來越多［3-4］，發(fā)現(xiàn)其形態(tài)除了球形外，還有多邊形等。但是非離子表面活性劑載體的組成對其形態(tài)的影響研究為數(shù)不多，二月桂酸甘油酯為非離子表面活性劑類脂囊泡的研究提供了一種理想、廉價并且可能工業(yè)化生產(chǎn)的原料。二月桂酸甘油酯(glyceryl dilaurate)是一種飽和的具有雙親性結(jié)構(gòu)的中性甘油二酯，二月桂酸甘油酯制成的類脂囊泡對所載藥物有廣泛的適應(yīng)性，水溶性藥物載入內(nèi)水相，脂溶性藥物溶于脂膜內(nèi)，兩親性藥物可插于脂膜上;生物相容性好，對人體無毒性;二月桂酸甘油酯作為一種長鏈飽和兩親性脂質(zhì)，它在常溫下呈固態(tài)，理化性質(zhì)穩(wěn)定，在體溫條件迅速融化，吸收快，而且性質(zhì)穩(wěn)定(不褪色、不分解、不與其它成分反應(yīng))，使用安全，加之變定性良好，填充時緊密，無針孔和空洞，適合大規(guī)模生產(chǎn)，是制藥工業(yè)理想的栓劑。本工作選用自制的二月桂酸甘油酯為載體材料，以水溶性藥物抗壞血酸為模型藥物，制備了具有囊泡結(jié)構(gòu)的類脂囊泡。以包封率為指標，通過正交設(shè)計考察了膽固醇用量、藥物用量、超聲時間、稀釋介質(zhì)的溫度對包封率的影響。

2010-05-04

常蘭(1979-)，女，碩士，講師，研究方向:化工醫(yī)藥。

成都理工大學(xué)工程技術(shù)學(xué)院科研發(fā)展基金項目(C122009011)。