鹽酸克林霉素注射液處方及生產工藝的初步研究

張連忠

（唐山師范學院 生命科學系，河北 唐山 063000）

鹽酸克林霉素化學名 6-(1-甲基-反-4-丙基-L-2-吡咯烷甲酰氨基)-1-硫代-7(S)-氯-6,7,8-三脫氧-L-蘇式-a-D-半乳辛吡喃糖苷鹽酸鹽，屬林可霉素類抗生素，為林可霉素的衍生物，抗菌譜與林可霉素相同，抗菌活性較林可霉素強4~8倍。它對革蘭氏陽性需氧菌、鏈球菌、葡萄球菌具有抗菌活性，對多種厭氧菌、衣原體、支原體和鉤形蟲也具有抗菌活性[1,2]。它的作用機制是與細菌核糖體的50s亞基結合，通過抑制肽鏈的延長而抑制細菌蛋白質的合成，通過去除細菌表面 A蛋白質和絨毛狀外衣，使其易被吞噬和殺滅[3]；同時它對機體免疫系統有增強免疫調節作用，能夠增強多型核白細胞的吞噬和殺菌功能，還可以改變細菌表面活性并能夠抑制細菌毒素的產生。克林霉素在多形核白細胞和巨噬細胞內積聚，使濃度超過細胞外40倍，這也許是克林霉素具有較強殺滅細胞內細菌能力的原因。克林霉素也可有效的減少或防止多糖—蛋白復合物的形成，使細菌不易粘附到骨組織，從而易被巨噬細胞和抗生素所殺滅[4]。本研究僅從抗氧劑、pH值范圍、活性炭脫色條件、活性炭用量以及滅菌條件五個方面對鹽酸克林霉素注射液進行研究，以期獲得該注射液的最佳處方及比較優化的相關生產工藝指標。

1 材料和方法

1.1 儀器藥品

CLASS-VP型高效液相色譜儀（日本島津公司）；pH-3C數字酸度計（杭州東星儀器設備廠）；VC（天津天泰精細化學品有限公司）；活性炭（北京大力精細化工廠）。

1.2 鹽酸克林霉素注射液（0.75g/10mL）制法

在配制容器中加入配制用量50%的注射用水，稱取處方量鹽酸克林霉素加入到容器中溶解，另取處方量的氯化鈉、枸櫞酸鈉，加入至藥液中，攪拌至溶解，再加入2%的枸櫞酸溶液調節pH值，然后加入一定量的活性炭，攪拌15min，粗濾脫碳，最后加入注射用水至規定量，濾液經0.22μm的過濾器過濾，灌裝機灌裝到安瓿瓶中并熔封，滅菌。

1.3 抗氧劑的選擇

為了提高注射液的穩定性，采用了注射劑中常用的抗氧劑如VC、L-半胱氨酸、EDTA-2Na、Na2S2O5、Na2S2O3等，進行篩選試驗比較。取表1中處方量的原輔料加50mL水溶解，用2%的枸櫞酸溶液調節pH值為4.5時，加入100mL水定容，抽濾，分裝于安瓿瓶中并熔封，115℃流通蒸汽30min滅菌。采用加速試驗方法（按市售包裝溫度40℃±2℃、相對濕度75%±5%的條件放置）考察樣品的穩定性，在60℃條件下分別放置 5d、10d，采用高效液相色譜法[5]測定含量的變化（含量測定的方法如下），同時觀察澄明度的變化。

1.3.1 色譜條件與系統適用性試驗

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸二氫銨溶液（取磷酸二氫銨2.88 g，加水溶解成1 000mL，用80%磷酸溶液調節pH=3.0）－甲醇（210: 300）為流動相；檢測波長為214nm。理論塔板數按克林霉素峰計算，應不低于1 300。

1.3.2 測定法

精密量取本品2mL，置100mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另取克林霉素對照品適量，同法測定。按外標法以峰面積計算供試品中C18H33ClN2O5S的含量。

1.4 pH值范圍的篩選

按鹽酸克林霉素注射液質量標準要求 pH值應在 3.5~5.5，加入適量弱酸調節不同pH值。在加熱前檢測克林霉素的百分含量（方法見 1.3），并觀察注射液的外觀。100℃加熱2h后同樣記錄這兩項指標的結果，與加熱前進行對比，考察注射液的穩定性。

1.5 活性炭脫色條件的選擇

為了減少雜質對注射劑的影響，在工藝研究中選擇活性碳處理藥液。試驗在不同pH值條件下，加入0.3%活性碳，分別置水浴 80℃加熱 10min，照含量測定方法測定相對含量，并觀察鹽酸克林霉素注射液的外觀顏色，以探索活性炭脫色的最佳條件。

1.6 活性炭用量的選擇

調節pH至4.0時，分別加入0.1%、0.2%、0.3%的活性炭，分別置沸水浴加熱10min，照含量測定方法測定相對含量，并觀察注射液的外觀，以期找到活性炭的最佳用量。

1.7 滅菌條件的選擇

采用流通蒸氣115℃ 30min、流通蒸氣115℃ 45min、熱壓121.5℃ 20min和熱壓115℃ 30min四種不同的滅菌方式。考察不同滅菌條件下，對鹽酸克林霉素注射液的顏色、含量、pH值、有關物質的影響（有關物質采用高效液相色譜法[5]測定。具體測定方法如下）。分別取同一批號樣品4份，在不同滅菌條件下進行試驗，選擇最佳滅菌條件。

1.7.1 色譜條件與系統適用性試驗

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸二氫鉀溶液（取磷酸二氫鉀6.8g，加水溶解成1000mL，用氫氧化鈉溶液調節 pH=7.5）－乙腈（65: 35）為流動相；檢測波長為214nm。理論塔板數按克林霉素峰計算，應不低于2 000。

1.7.2 測定方法

取本品，用流動相制成每1 mL中含10.0mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，用流動相稀釋制成每 1mL中含0.4mg的溶液，作為對照品溶液。取對照溶液10μL注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度。使主成分峰的峰高約為記錄儀滿量程的10%；再精密量取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2倍。供試品溶液色譜圖中，以克林霉素主峰相對保留時間為1計，林可霉素相對保留時間為0.17，克林霉素B相對保留時間為0.53；差向克林霉素的相對保留時間為0.72。林可霉素峰面積占總峰（除溶劑及輔料峰外）面積的百分含量不得過 5.0%；克林霉素B不得過2.0%，差向克林霉素不得過1.0%，各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的2.5倍（10.0%）。

2 結果和分析

2.1 抗氧劑的選擇結果

表1 處方中不同抗氧劑及用量的篩選

試驗結果表明，選擇0.02g EDTA-2Na作為抗氧劑，克林霉素相對含量下降最小，并且鹽酸克林霉素注射液的外觀澄清無色，符合規定，因此制備工藝中可選用 EDTA-2Na作為抗氧劑，用量0.02g。

2.2 pH值范圍的篩選結果

由表2可見，pH>5.0時樣品含量下降較大，溶液出現沉淀，pH值低時樣品較穩定，但 pH值過低時對肌體的刺激性較大，因此工藝中選擇pH值在4.0~4.5范圍內。

表2 不同pH條件下樣品的熱穩定性考察

2.3 活性炭脫色條件的選擇結果

表3 活性碳在不同pH值的注射液中對含量的影響

由表3可見，不同pH值對溶液顏色略有影響，pH為4.0時，含量下降最小，外觀符合規定，因此制備工藝中可選用pH值4.0時，加入活性碳脫色。

2.4 活性炭用量的選擇結果

表4 活性炭用量的篩選

由表4可見，活性炭用量為0.2%時，脫色后外觀無色澄清，含量下降不明顯，因此工藝中選擇活性炭用量為0.2%。

2.5 滅菌條件的選擇結果

表5 注射液滅菌條件的選擇

由表5可見，滅菌條件不同對樣品的含量和外觀影響很大，綜合比較四種不同的滅菌方式，流通蒸氣滅菌 115℃30min克林霉素相對含量及pH值下降最小，有關物質量增加最少，因此選擇滅菌條件為流通蒸氣115℃ 30min。

3 討論

鹽酸克林霉素是一種半合成抗生素，其鹽酸鹽易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚，化學性質較穩定。但其水溶液的穩定性略差，結構中的硫苷鍵在酸性或金屬作用下極易發生水解，從而影響藥液的穩定性。因此注射劑中應加入適量抗氧劑，以提高注射劑的穩定性；加入氯化鈉調節藥液等滲，減少注射液對血管的刺激性；加入檸檬酸調節注射液的pH值，保證其長期放置的穩定性。

在國家食品藥品監督管理局制定的國家藥品標準當中，鹽酸克林霉素注射液的性狀應為無色或幾乎無色的澄清液體。另外，在對該藥品進行各項研究時，都應該保證使藥品當中的克林霉素的相對含量不會下降太多。綜合以上兩點，在進行抗氧劑篩選及相關指標優化時，主要從克林霉素相對含量下降情況和注射液外觀是否澄清無色兩個方面來考慮。在所進行的五項試驗當中，最終選擇的結果都能保證注射液的澄清無色，克林霉素的相對含量下降最少。

4 結論

EDTA-2Na作為鹽酸克林霉素注射液的抗氧劑較好。pH4.0時加入0.2%活性炭進行脫色；選擇流通蒸氣115℃進行滅菌30min是比較優化的生產工藝指標。