飛龍掌血多糖清除自由基活性的研究

田春蓮，蔣鳳開(kāi)，文赤夫

(1.林產(chǎn)化工工程湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南張家界 427000; 2.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南吉首 416000)

飛龍掌血多糖清除自由基活性的研究

田春蓮1，蔣鳳開(kāi)2，文赤夫2

(1.林產(chǎn)化工工程湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南張家界 427000; 2.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南吉首 416000)

目的:研究飛龍掌血多糖的抗氧化活性。方法:采用Fenton法、DPPH法測(cè)定飛龍掌血多糖清除羥基自由基(·OH)、二苯代苦味酰肼自由基(DPPH·)的能力，以VC為對(duì)照。結(jié)果:質(zhì)量濃度在0.2～0.4mg/mL范圍內(nèi)，飛龍掌血多糖隨濃度增大，清除·OH能力增強(qiáng)，且0.4mg/mL時(shí)清除率高達(dá)73.7%;質(zhì)量濃度在5×10－3～5×10－1mg/mL時(shí)，對(duì)DPPH·的清除率為13.5%～79.5%，清除作用與濃度呈正相關(guān)，當(dāng)濃度為0.5mg/mL時(shí)，清除率高達(dá)79.5%。結(jié)論:飛龍掌血多糖具有較強(qiáng)的體外抗氧化性能，對(duì)·OH、DPPH·具有明顯的清除作用。

飛龍掌血多糖，羥基自由基，DPPH，抗氧化活性

飛龍掌血(Toddalia asiatica Lam)為蕓香科植物，別名勒溝、血見(jiàn)飛、散血丹。主要分布在湖南、四川、貴州等地。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為其具有舒筋通絡(luò)、活血散瘀、消腫止痛的作用，常用于治療風(fēng)濕痹痛、胃痛、痛經(jīng)、跌打損傷［1］。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，其具有鎮(zhèn)痛抗炎、抗心肌缺血、治療家畜胃腸炎等作用［2－4］。目前國(guó)內(nèi)對(duì)飛龍掌血的化學(xué)成分［5－8］、飛龍掌血提取物的抑菌作用［9］、飛龍掌血多糖提取工藝［10］已有報(bào)道，但對(duì)飛龍掌血多糖的體外抗氧化活性未曾深入研究。因此，本實(shí)驗(yàn)以飛龍掌血為原料提取多糖，利用紫外分光光度計(jì)，研究飛龍掌血多糖對(duì)活性氧自由基如羥基自由基(·OH)、DPPH·的清除作用，以期為飛龍掌血多糖藥物及功能性食品開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

飛龍掌血(Toddalia asiatica Lam) 于2009年采于張家界，經(jīng)廖博儒研究員鑒定，取其根洗凈，60℃烘干，粉碎，過(guò)40目篩，于干燥器中保存?zhèn)溆?DPPH

紫色結(jié)晶，上海華藍(lán)化學(xué)科技有限公司;其他試劑為AR。

UV－160型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 日本島津; BM400型數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋 日本YAMATO; AED－220型電子天平 日本SHIMADZU。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 飛龍掌血多糖的提取 參照文獻(xiàn)［10］的方法提取。稱取一定量的飛龍掌血粉末，按料水比為1∶20，在60℃下浸提2h，抽濾，濃縮，醇沉，離心，冷凍干燥得飛龍掌血粗多糖。

1.2.2 羥基自由基(·OH)清除率的測(cè)定 采用鄰二氮菲Fe2+－H2O2法［11－12］，按下列公式計(jì)算清除率。

其中∶A0為空白參比的吸光值;A1為未損傷管的吸光值;A2為損傷管的吸光值;A3為樣品參比的吸光值;A4為樣品管的吸光值。

1.2.3 DPPH自由基(DPPH·)清除率的測(cè)定 參照文獻(xiàn)［14］的操作，分別吸取2mL一定濃度的飛龍掌血多糖、VC、茶多酚溶液，各加入2×10－4mol/L的DPPH·溶液2mL，無(wú)水乙醇2mL，混勻后25℃水浴30min，以溶劑為空白，在517nm處測(cè)吸光度Ai，同時(shí)測(cè)定2mL上述溶液與2mL溶劑混合后的吸光度Aj，再測(cè)定DPPH·溶液2mL與2mL溶劑混合后的吸光度Ac，平行測(cè)定3次，計(jì)算清除率。

清除率(%)=［1－(Ai－Aj)/Ac］×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 羥基自由基(·OH)清除率

從圖1～圖2可知，所選濃度范圍內(nèi)，VC、飛龍掌血多糖對(duì)·OH均有較強(qiáng)的清除作用，且清除率與物質(zhì)的質(zhì)量濃度呈正相關(guān)。兩種物質(zhì)對(duì)·OH清除率的強(qiáng)弱為∶VC＞飛龍掌血多糖。

圖1 VC對(duì)羥基自由基清除能力的影響

圖2 飛龍掌血多糖對(duì)羥基自由基清除能力的影響

2.2 DPPH自由基(DPPH·)清除率

DPPH·在有機(jī)溶劑中是一種穩(wěn)定的自由基，其孤對(duì)電子在517nm附近有強(qiáng)吸收(呈深紫色)，當(dāng)有機(jī)清除劑存在時(shí)，孤對(duì)電子被配對(duì)，吸收消失或減弱，通過(guò)測(cè)定吸收減弱的程度，可評(píng)價(jià)自由基清除劑的活性。從圖3～圖4可知，兩種物質(zhì)對(duì)DPPH·均有良好的清除作用，且在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，清除率與濃度呈線性關(guān)系。清除DPPH·的能力大小為∶VC＞飛龍掌血多糖。

3 結(jié)論

圖3 VC對(duì)DPPH自由基清除能力的影響

圖4 飛龍掌血多糖對(duì)DPPH自由基清除能力的影響

飛龍掌血多糖對(duì)不穩(wěn)定自由基·OH和穩(wěn)定性自由基DPPH·均具有較強(qiáng)的清除活性，盡管比VC稍差一些，但VC在水溶液中易被空氣中的氧所氧化，在堿性介質(zhì)或受熱情況下很不穩(wěn)定，且在植物體內(nèi)含量較低。飛龍掌血是湘西地區(qū)廣泛分布且功能獨(dú)特的藥用植物，從飛龍掌血中提取的多糖作為天然自由基清除劑具有潛在的開(kāi)發(fā)價(jià)值。

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Study on free radical scavenging efficency of Toddalia asiatica polysaccharides

TIAN Chun－lian1，JIANG Feng－kai2，WEN Chi－fu2
(1.Key Laboratory of Forest Products and Chemical Industry Engineering，Zhangjiajie 427000，China; 2.College of Biology and Environmental Sciences，Jishou University，Jishou 416000，China)

Objective:To study the antioxidant activity of polysaccharides from Toddalia asiatica.Methods:The research adopted Fenton method and DPPH method to determine the scavenging ability of Toddalia asiatica polysaccharides to·OH and DPPH· by comparing with VC.Results:In the concentration of 0.2～0.4mg/mL，the scavenging ability to·OH was a positive correlation with the concentration of Toddalia asiatica polysaccharides，when the concentration was 0.4mg/mL，the clearance rate of·OH was 73.7%.In the concentration of 5×10－3～5× 10－1mg/mL，the clearance rate of DPPH·was 13.5%～79.5%，the scavenging ability to DPPH·was also positively correlated with the concentration of Toddalia asiatica polysaccharides，when the concentration was 0.5mg/mL，the clearance rate of DPPH· was 79.5%.Conclusions:Toddalia asiatica polysaccharides had strong antioxidant properties and possessed a clear scavenging effect to·OH and DPPH·.

Toddalia asiatica polysaccharides;hydroxy radical;DPPH;antioxidant activity

TS201.2+3

A

1002－0306(2011)11－0106－03

2011－08－11

田春蓮(1970－)，女，副教授，碩士，主要從事資源植物保護(hù)與利用研究工作。

湖南省科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(2010TP4007－1);湖南省高校“林產(chǎn)資源化學(xué)與林化產(chǎn)品開(kāi)發(fā)”科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)支持計(jì)劃資助(湘教通(2010)212號(hào))。