稻瘟病菌株接種劑的制作及致病效果研究

陳新武

（河北省筑始縣環保局）

稻瘟病菌株接種劑的制作及致病效果研究

陳新武

（河北省筑始縣環保局）

本文闡述了稻瘟病菌株接種劑的制作及胬病效果研究。

菌株；溫度；生長量；胬病效果

一、菌株最佳培養基確定：

將病原菌株分別接種于PDA培養基、PSA培養基、稻瘟病分離培養基，測定并比較菌絲體干重，確定最佳培養基。

不同培養基條件下稻瘟病菌絲體干重測定結果(單位：g／250ml)

表格1

最佳培養基如圖表1所示，三種培養基中，最佳的培養基是PSA培養基。三種培養基在相同的培養條件下，稻瘟菌在PSA培養基上產生的菌絲體最多，達到5.2874g／250ml。說明稻瘟病原菌的生長，需要含有糖類的物質為其提供碳元素，但如果加入一些其它的營養元素，可以促進稻瘟病原菌的生長

因為稻瘟病分離培養基中只能夠為菌株碳源，而馬鈴薯中營養豐富，不僅含有淀粉，蛋白質，脂肪等提供碳源，氮源的物質，而且VB、VC、鈣、鎂、鉀等微量元素也都應有盡有，能充分促進菌株生長，所以分離培養基上的稻瘟病原菌生長相對緩慢，菌絲體干重測定結果最少。

二、最佳培養溫度的確定：

利用PSA培養基，對稻瘟病菌株進行培養，分別于20?、14?、28?、30?、32?，培養6d測定并比較菌絲體干重，確定最佳培養溫度。

不同培養溫度條件下稻瘟病菌絲體干重測定結果(單位：g／250ml)

表格2

由圖表2可知，在不同溫度下病原生長明顯不同。在24?和28?對應著試驗數據中最大的兩個數值，24?之前，溫度越高，對稻瘟病原菌菌絲體的生長越有利；28?之后，在越高的溫度下培養病原菌，其菌絲體的生長越不好。所以對稻瘟病原菌的培養，適宜的溫度范圍是 24-28?

三、病原菌株生長量測定：

稻瘟病菌絲體干重測定結果(單位：g／ 250ml)

表格3

由此表3可知，稻瘟菌培養到第7天時，所對應的菌絲體的干重的數值是最大的。在培養的前3天，稻瘟菌株處于適應期，菌體增殖的數量很小或者不增加。第3天過后。菌體增殖進入了對數期，菌絲體干重急劇增加，所以此期間菌絲體的干重變化很大。第7天后，由于培養基內營養物質的逐漸減少和有害代謝產物的不斷積累，菌體的繁殖進入了穩定期間。所以菌絲體的干重不再增加，甚至還少量減少。所以為了獲得大量菌絲體來產生分生孢子，而進行的稻瘟菌株的培養的培養時間最好在7-9天之間

四、接種劑的制作及致病效果研究

1、接種劑的制備：

制備了液體接種劑

純菌接種劑為配備成的稻瘟病原菌孢子濃度為2．17 x 105個／ml的孢子懸浮液

混菌接種劑為配備成的稻瘟病原菌孢子濃度為2．25 x 105個／ml的孢子懸浮液

2、接種試驗效果：

使用純菌制成的液體接種劑對 10個水稻品種進行感病接種。東農 415和牡丹江22號的抗性類型都為R(抗性)，但這兩個水稻品種噴霧接種后，發病的平均病情分別為1．3級和 1．1級。抗性類型被判斷為HR(高抗)。其余的水稻品種的抗性類型根據平均病情判斷，沒有發生變化。此接種劑對水稻品種抗性的鑒定符合程度達到了80%，而且平均病情1．3級的判定可能還包含著一定的觀察誤差，符合程度可能還要高一些。說明了液體接種劑的有效性與準確性。所以，此液體接種劑可以應用于水稻感病的試驗中。

五、討論：

1、道瘟病菌的分離：

稻瘟病菌的分離通常使用單孢分離方法。因為稻瘟病菌在培養基上生長緩慢，所以雜菌容易占優勢。從病斑上進行組織分離特別困難，而在病斑上形成孢子后再分離孢子則比較容易。在采集到葉，穗等罹病標本時，為不使葉片打卷并盡快干燥，采集后要放在冰箱中保存，并要盡快分離。在高溫時雜菌將因為高溫高濕而大量繁殖，致使分離不易成功。

2、稻瘟病原菌產孢培養：

在稻瘟菌感病等實驗中都需要其產生大量的孢子，利用馬鈴薯瓊脂培養基，孢子形成數量少，所以一般稻瘟菌產孢都使用燕麥培養基，置于光照下培養24h是為了使孢子的成熟度整齊一致。如果孢子的成熟度不同的話，所形成的病斑中易混生R—S型從而難以判斷。但從多年的實驗經驗得知，對于一般的病菌生理小種鑒定和水稻品種抗性分析，用米糠培養基培養的孢子量就足以待用。多年養的菌株范圍很廣，一些在傳統大麥粒培養基上產孢效果很差的菌株，在米糠培養基上也可得到滿意的產孢效果。與燕麥片培養基相比，在培養過程中米糠培養基較不易被污染，而且米糠價格低，培養基制作過程簡單。因此，米糠培養基是實驗室條件下大量培養稻瘟菌分生孢子的首選培養基。

3、噴霧接種注意事項：

有些菌株產生孢子少，達不到接種孢子的最少要求濃度時，就按最少濃度接種，但要求標明記錄。

當恒溫恒濕接種設備條件受限制時，可以改在自然和溫室條件下進行，為求試驗準確，要求每次試驗前后的條件一致。

另外接種方式還可以選用離體接種，這種接種方法操作簡便，且接種效果與活體植株接種基本一致，因此可代替常規活體植株接種，該方法具有占用空間少，可在田間隨時取稻葉而不影響其稻苗的正常生長，操作簡便，溫濕條件容易控制，可大批量、多次重復鑒定，特別是對穗瘟的鑒定，可對水稻抽穗期不一致的品種進行分批采集接種，克服了在自然情況下，人工接種抽穗期不同而難以控制的問題等優點，是一種較理想的抗稻瘟病鑒定方法。

六、結論：

1、從發病組織及土壤中分離鑒定出14種真菌，初步了解了發病部位的種群結構。其中稻瘟病原菌數量很多，明顯大于其他種類微生物。觀察了稻瘟病菌，青霉屬，毛霉屬，根霉屬，曲霉屬，小菌核屬，鐮刀菌屬等微生物的生物特性。

2、測得了稻瘟病原菌的最佳的培養溫度范圍是 24?-28?，最佳的培養時間段為7-9天這一稻瘟病原菌生長穩定期，從而可以通過培養最好地獲得了足夠的孢子來進行稻瘟病菌的感病試驗。

3、在相同的條件下，純菌的接種效果要好于混菌的接種效果。但相差不是非常大。純菌接種各類稻種的平均病情比混菌接種多 0．4-0．5，除少數幾個稻種。

4、對10個水稻品種進行的抗性類型的鑒定中，液體接種劑使水稻的感病病情與水稻已知的抗病類型基本符合，說明液體接種劑可以用于稻瘟病菌的致病試驗。

研究方向：分子生物學

[1] 沈瑛，株培脝，袁筱萍．中國稻瘟病菌的遺傳多樣性．植物病理學報，1993，23(4)：309-313．

[2) 余脣濤．稻瘟病生理小種田間監測及防治策略．湖北農業科學，2003，6：16-18．

[3] 孫漱元，孫國昌．我國稻瘟病研究的現狀和展望．植保技術與推廣，1996，16(3)：39-40．

[4] 李憲，夏景玉．稻瘟病菌生理小種和品種抗性的研究．安徽農業科學，24(2)167-169．

TU987

A

1674-3954（2011）02-0192-01