辣木油對家兔皮膚創傷的保護作用

段瓊芬,李 欽,林 青,段小花,楊 蓮,張重權,馬李一,王有瓊

1中國林業科學研究院資源昆蟲研究所,昆明 650224;2云南中醫學院藥理學教研室,昆明 650200;3云南省中醫中藥研究院,昆明 650223

辣木油對家兔皮膚創傷的保護作用

段瓊芬1＊,李 欽3,林 青2,段小花2,楊 蓮2,張重權1,馬李一1,王有瓊1

1中國林業科學研究院資源昆蟲研究所,昆明 650224;2云南中醫學院藥理學教研室,昆明 650200;3云南省中醫中藥研究院,昆明 650223

觀察辣木油對家兔皮膚創傷愈合的影響。取健康大耳白兔 18只,隨機分為空白對照組、京萬紅組和辣木油組,將背部左右側各切取直徑 2.35 cm大小的皮膚,深及皮下筋膜,造成創傷模型,每天涂藥 1次,測定創面面積,計算愈合率和愈合時間;于術后的第 3 d、7 d、10 d,切取涂藥部位和空白未涂藥部位皮膚全層,制片,作HE染色后鏡下觀察創面組織形態學的改變并進行皮膚病變程度的分級。結果顯示辣木油可加速創面愈合,縮短愈合時,減輕組織的病理變化。提示了辣木油能夠促進家兔皮膚創傷的愈合。

辣木油;家兔;皮膚;創面;愈合

Abstract:To investigate the protection effect of external use ofMoringa oil on skin injury of rabbit,18 rabbitswere randomly divided into 3 groups as negative control,Jinwanhong oil treatment,and Moringa oil treatment.A piece of skin deep to subcutaneous fascia with a diameter of 2.35cm was cut on both side of the back of the rabbits to construct the wound model,then the wound were treated with the oil everyday,and the wound area was measured to deter mine the healing rat and the healing time;thewhole der ma of thewound skinwas cut after 3 d,7 d,and 10 d,dyed byHE and observed with microscope to deter mine the corresponding pathogenic degree.The results showed that external use ofMoringa oil can accelerate wound healing,shorten healing time,and alleviating pathogenic changeswhich remind thatMoringa oil can promote rabbit skin wounds restoration and healing.

Key words:Moringa oil;rabbit;skin;wound;healing

辣木油是從辣木科 (Moringaceae)辣木屬(MoringaAdans.)辣木 (Moringa oleiferaLam.)[1]種子中提取出來的珍貴植物油,具有擴張血管、抗真菌、抗發炎等多種功效[2-5],廣泛應用在食品、化妝品和醫藥等方面。實際應用中發現的,用辣木油外擦可以治療人體皮膚損傷,縮短創面的愈合時間,減輕傷口感染,消腫止痛,但未檢索到相關的研究報道。因此,本試驗選用與臨床創傷修復和愈合過程基本一致的家兔背部皮膚全層缺損傷模型[6],就辣木油對

1 材料與方法

1.1 動物

新西蘭大耳白兔 18只,雌雄各半,體重 2.0～2.5 kg,購自四川省醫學科學院實驗動物研究所,動物質量合格證編號:SCXK(川)2004-18。

1.2 藥品與試劑

辣木油試樣的制備:取云南元江產辣木籽(seeds ofMoringa oleiferaLam)2500 g,經挑選除雜后用小錘破殼取仁,用自制小型液壓機壓榨得油與油餅,將油餅重復壓榨 2次后收存。合并粗油,過濾除去殘渣,得深棕色清亮的粗制辣木油將粗制辣木油經脫色處理得供試油樣,油樣質量為 500 g,淺黃促進家兔皮膚創傷愈合的作用進行了研究。色,凝固點 16℃,密度 (24℃)0.9223 mg/mL;京萬紅膏:天津達仁堂達二藥業有限公司生產,批號211516;碘伏:昆明天亙消毒制品有限公司生產,批號20070119。

1.3 試驗方法

1.3.1 分組

將 18只大耳白兔隨機分成 3組,分別是空白對照組、京萬紅組和辣木油組,每組 6只,單籠常規飼養。

1.3.2 造模

方法[7],用 8%硫化鈉將家兔背部脫毛,暴露出約 12cm×10 cm的皮膚,2 d后用 10%水合氯醛麻醉并用碘酒、酒精消毒,避開肩胛骨和髂骨,在距脊柱 2 cm的左右兩側,由前到后分別做左1、左 2、右 1、右 2共 4個直徑約為 2.35 cm的圓形創面,切除創面全層皮膚至淺筋膜組織。

1.3.3 給藥

空白組按 0.3 g/wound給予醫用凡士林;京萬紅組按 0.3 g/wound給予京萬紅軟膏;辣木油組按0.3 g/wound給予辣木油。自手術日起,按以上劑量將藥物均勻涂于創面,用消毒凡士林油紗布覆蓋并用無菌干紗布包扎,以后每天換藥 1次,直至創面愈合。

1.3.4 創面愈合情況觀察

參考文獻方法[8],肉眼觀察創面的愈合情況,觀察指標為:滲出物量的多少、創緣皮膚收縮、結痂和皮膚顏色的變化。

1.3.5 創面愈合率及愈合時間的測定

在術后的第 3、6、10、13 d,采用描計稱重法測量面積,即用透明薄膜覆蓋創面,沿創面邊緣作標記,畫出所需面積范圍并剪下,用分度值為 0.1 mg的分析天平稱質量并以質量代替面積,按創面愈合率 =(原始創面面積 -未愈合創面面積)/原始創面面積,計算創面愈合率。以 95%的創面愈合率為愈合時間的標準,記錄每個創面的愈合時間。

1.3.6 創傷組織病變程度分級檢驗

參考文獻方法[9]進行分級。組織切片方法:于術后的第 3、7、10 d,切取創面組織,經 10%中性福爾馬林固定,脫水、包埋制成石蠟切片,切片厚度為20μm,作 HE染色。鏡下病變程度分級:顯微鏡下觀察切片的病理學改變情況,將病變程度分為 4級,記為:–、+、++、+++,其中“–”為表皮再生 ＞75%,其余創面被新生的肉芽組織所修復,少量炎細胞浸潤,可見較多膠原纖維;“+”為表皮再生 50%～75%,可見大量肉芽組織,但肉芽組織尚未將創面填平,較多炎細胞浸潤,無壞死,可見少量膠原纖維;“++”為表皮再生 25%～49%,可見較多肉芽組織,大量炎細胞浸潤,少量出血,無壞死,偶見少量膠原纖維;“+++”為表皮再生 ＜25%,伴大量出血、壞死,甚至化膿,未見肉芽組織及膠原纖維。

1.4 數據處理

采用 SPSS13.0統計軟件對試驗數據進行單因素方差分析以及 Dunnet-t兩兩比較,對等級數據進行 Ridit檢驗,P＜0.05時為差異顯著;P＜0.01時為差異非常顯著。

2 結果與分析

2.1 家兔皮膚創面的愈合情況

肉眼觀察到各組動物在術后的第 1 d和第 2 d,所有動物的創面基本上都有滲出液,傷口未開始愈合。術后第 3 d,空白組 6只動物中有 2只的滲出液基本消失,并開始結痂,其余創緣皮膚收縮不明顯,2只傷口開始出現少許紅暈;京萬紅組全部創面的滲出液基本消失,創緣皮膚開始收縮,并開始結痂,其中 5只傷口開始出現少許紅暈;辣木油組 6只動物中有 5只的滲出液基本消失,創緣皮膚開始收縮,并開始結痂,有 4只傷口開始出現少許紅暈。術后第7 d,空白組仍有 3只創面濕潤,有滲出物,傷口收縮不明顯,未見明顯的新生上皮;京萬紅組與辣木油組的創面干燥、無感染,創緣皮膚收縮明顯。術后第14 d,空白組創面修復欠佳,仍有 4只未愈合,京萬紅組創面基本愈合,辣木油組有 2只未愈合。

試驗結果顯示,辣木油能有效促進家兔皮膚創面的愈合,防止傷口感染,功效與京萬紅相似。

2.2 創面愈合率和創面愈合時間

在 1.3.2節所述的 4個創面中,其中“左 1”創面被用來測量面積,剩下的“左 2”等 3個創面則用于后面試驗所需的病理取材 (所有組均按此順序操作)。當給藥劑量為 0.3 g/wound時,測得各組試驗動物的創面愈合率測的平均值、創面愈合時間的總平均值見表 1。

表1結果顯示,辣木油組家兔的創面愈合率在術后第 3 d時,與空白對照組相比差異非常顯著 (P＜0.01),表明辣木油對家兔皮膚創傷有非常明顯的修復作用,能夠促進創面的愈合,且見效比京萬紅快,但第 3 d后的影響不再有統計學意義,說明當用辣木油來治療家兔皮膚的機械創傷時,應在傷后前3 d內抓緊治療。而京萬紅的藥效則比辣木油的緩慢一些,一直到了第 10 d時才有很明顯的效果 (P＜0.01),但與辣木油不同的是,從第 10 d后一直到第13 d,它對創面的愈合率仍然有影響,仍然能明顯地促進創口的愈合,總的效果顯得更好些。此外,若將表 1中各組動物總創面愈合時間的平均值進行成對比較的話,則可知道辣木油組和京萬紅組與空白對照組相比具有明顯的差異 (P=0.031;P=0.013),說明兩者均對家兔皮膚機械損傷的創面愈合具有明顯的促進作用,而辣木油組和京萬紅組之間的差異則無統計學意義(P=0.135),說明辣木油的藥效與京萬紅相近。

表1 辣木油對家兔皮膚創面愈合率和愈合時間的影響±s,n=6)Table 1 Effects ofmoringa oil on skin wound healing rate and healing t ime of rabbit(±s,n=6)

表1 辣木油對家兔皮膚創面愈合率和愈合時間的影響±s,n=6)Table 1 Effects ofmoringa oil on skin wound healing rate and healing t ime of rabbit(±s,n=6)

注:與空白組比較,＊P＜0.05,＊＊P＜0.01。＊P＜0.05,＊＊P＜0.01vscontrol group

組別Group創面愈合率Wound healing rate/% 創面愈合時間Wound healing(time/d)3 d 6 d 10 d 13 d空白對照組 control group 11.5±6.0 16.70±12.67 41.03±14.31 75.18±11.55 16.50±2.07京萬紅組 jingwanghong group 17.0±9.36 24.60±13.73 57.75±7.52＊＊ 91.13±4.74＊ 13.67±1.21＊辣木油組 moringa oil group 2.0±13.34＊＊ 26.14±8.21 48.02±10.27 79.79±14.10 14.83±1.47＊

2.3 創傷組織病變程度分級檢驗

鏡下觀察到施行手術以后,各組動物的傷口均有局部上皮缺損,形成深達真皮層的潰瘍,伴大量出血、壞死,甚至化膿,未見肉芽組織明顯增生,其中以空白組炎癥最重,化膿最為明顯 (空白組 control group、京萬紅組 jingwanghong group、辣木油組moringa oil group:圖 1 a～c)。術后第 7 d,空白組上皮細胞增生不明顯,出血較前明顯減少,仍可見大量壞死、膿腫及炎細胞浸潤,可見少量肉芽組織,未見膠原纖維 (空白組 control group圖 1 d);京萬紅組上皮細胞增生明顯,創面未見明顯出血、壞死,炎細胞浸潤較前減少,可見較多肉芽組織及少量膠原纖維(京萬紅組 jingwanghong group圖 1e);辣木油組上皮細胞增生明顯,創面仍有較多量的出血及少量壞死,炎細胞浸潤比空白組少比京萬紅組多,可見較多肉芽組織,偶見少量膠原纖維 (辣木油組 moringa oil group圖 1f)。術后第 10 d,空白組上皮細胞增生明顯,創面出血,壞死、膿腫較前減少,仍有大量炎細胞浸潤,可見少量肉芽組織和膠原纖維 (空白組 control group圖 1 g);京萬紅組創面修復明顯,少量炎細胞浸潤,從傷口底部及邊緣長出的肉芽組織已填平傷口,膠原纖維形成較多 (京萬紅組 jingwanghong group圖 1 h);辣木油組炎細胞浸潤比空白組少比京萬紅組多,從傷口底部及邊緣長出的肉芽組織已填平大部分傷口,膠原纖維形成較多 (辣木油組moringa oil group圖 1i)。

圖1 家免皮膚創面組織切片Fig.1 Slice of a skin injuries tissue of rabbit

將 6份病理試樣按照 1.4.6節皮膚組織病變程度的分級方法來分級,得出了不同時間內不同級別的組織病變分級數據記錄于表 2中,分析各組病變程度在各個階段的統計學差異性,從病理學的角度來觀察創面愈合過程中的病理變化趨勢。

由表 2可見,隨著時間的推移,所有組別的動物都有減輕創傷病理變化的趨勢,京萬紅組及辣木油組在第 7天減輕病理變化的趨勢與空白組比較均有顯著性的區別 (P＜0.05),說明辣木油與京萬紅一樣,都具有抑制創傷組織病理變化的功效,而且在所有的試驗時間范圍內,兩者的藥效都沒有顯著性的區別 (P＞0.05),提示了辣木油可以用來治療皮膚創傷。

3 討論

創傷修復期表皮的生長、傷口的收縮對創面的愈合起著非常重要的作用,傷口收縮既能減少感染的機會,又能使機體用少量的組織就能修復傷口,同時,肉芽組織在創傷修復過程中起抗感染及保護創面、清除凝血塊及壞死組織、填補傷口等作用,因此,有無健康肉芽組織生長是傷口愈合的關鍵,另一方面,膠原纖維的增生也是影響創面愈合的重要因素[10]。

本試驗觀察到辣木油能促進傷口邊緣組織的收縮及創面壞死組織和異物的清除,促進創面炎性滲出物吸收,提高創面愈合率,加速創面愈合。同時鏡下觀察還發現,在辣木油涂藥部位皮膚組織內,炎性細胞減少、上皮細胞增生明顯、肉芽組織與膠原纖維的生長均明顯優于空白組未涂藥部位,統計學處理結果亦顯示出二者間有顯著性的差異,其上皮細胞增生、肉芽組織數量增多與膠原纖維數量增加呈正相關性,這說明辣木油的藥效作用與上皮細胞、肉芽組織和膠原纖維的參與密切相關。

實驗中,辣木油在第 3 d時對促進創面愈合具有很好的作用,能明顯降低創傷所致的皮膚炎性反應,對皮膚具有保護作用,但延時給藥不能明顯縮小創面的炎性面積,說明創傷在早期就可能已經形成了某種致炎物質,并產生了損傷,延時給藥對已形成的損傷無治療作用,可能對已形成的致損傷物質無明顯的拮抗作用,故給藥未能明顯降低炎性面積,提示了辣木油用于皮膚損傷的治療時應及早給藥。

結論:辣木油外用能促進家兔皮膚創面的愈合,對家兔皮膚機械損傷有明顯的保護作用,其機制可能與促進傷口邊緣組織的收縮、創面壞死組織和異物的清除,加速肉芽組織的生長,膠原纖維的增生形成瘢痕,保護傷口,防止感染等有關。

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Protection Effect of Moringa Oil on Skin Injury of Rabbit

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1Institute of Resource Insects,Chinese Acade my of Forestry,Kun ming 650224,China;2Yunnan College of Traditional Chinese Medicine,Kun ming 650200,China;3Yunnan Institute of Chinese Medicine,Kun ming650223,China

R285.5

A

1001-6880(2011)01-0159-04

2009-07-10 接受日期:2010-07-06

“十一五”國家科技支撐計劃項目 (2006BAD18B04);林業公益性行業科研專項項目(200704007)

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