鮑魚性腺多糖抗血栓及抗疲勞活性的研究

郭 麗 莉, 朱 蓓 薇, 孫 黎 明, 牛 海 鈴, 秦 磊, 劉 俊 榮

(1.大連工業(yè)大學(xué) 海洋食品教育部工程研究中心, 遼寧 大連 116034;2.大連工業(yè)大學(xué) 農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)研發(fā)貝類專業(yè)分中心, 遼寧 大連 116034;3.大連海洋大學(xué) 食品工程學(xué)院, 遼寧 大連 116023)

0 引 言

海洋貝類因其營養(yǎng)豐富、味道鮮美而被人們所熟知。除此之外,貝類多糖具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力等活性,因而貝類也成為新藥和功能食品開發(fā)的重要原料[1]。本實(shí)驗(yàn)室對鮑魚多糖已經(jīng)進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究,發(fā)現(xiàn)鮑魚臟器及性腺多糖均具有一定的抗氧化活性[2-4]、抗腫瘤、免疫增強(qiáng)[5-7]及抗凝血[7]等活性。本研究以雌性皺紋盤鮑(HaliotisDiscusHannaiIno)性腺為原料,根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室已確定的方法提取鮑魚性腺粗多糖(CAGP),分別考察其體外溶解血栓及抗疲勞活性,以期為鮑魚性腺多糖的進(jìn)一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 原 料

鮑魚性腺多糖:本實(shí)驗(yàn)室制備[7]。

昆明種雌性小鼠(SPF級(jí))30只,體重18～20 g；雄性SD大鼠3只,體重50～70 g,均購自大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

乳酸、尿素氮、糖原及乳酸脫氫酶檢測試劑盒,均購自南京建成生物制劑研究所。

1.2 鮑魚性腺多糖的體外溶栓能力檢測

取雄性SD大鼠,經(jīng)腹主動(dòng)脈插管放血至長約2 m、直徑3 mm 的塑料管中,夾閉兩端,于室溫放置24 h 后,將血凝塊切成質(zhì)量約為50 mg 的小段,精密稱取,分別置入含有低、中、高劑量CAGP(50、100和200 μg/ mL)、檸檬酸鈉(10%)和生理鹽水各2 mL的試管中,37 ℃ 溫浴24 h 后取出稱取剩余血凝塊的質(zhì)量,計(jì)算血塊溶解率[8-9]。血塊溶解率=(溶解前血凝塊濕重-溶解后血凝塊濕重)/溶解前血凝塊濕重。

1.3 鮑魚性腺多糖抗疲勞活性檢測

1.3.1 動(dòng)物分組與處理

取30只昆明種小鼠隨機(jī)分為空白對照組(等體積的生理鹽水)、CAGP組(200 mg/kg)和陽性對照組(香菇多糖,80 mg/kg),按10 mL/kg的劑量灌胃,每天1次,連續(xù)35 d。

1.3.2 檢測指標(biāo)及方法

負(fù)重游泳時(shí)間：末次給藥30 min后,小鼠尾部負(fù)荷8%體重的砝碼。放入水深30 cm,水溫(34±1)℃的游泳箱中進(jìn)行實(shí)驗(yàn),判斷標(biāo)準(zhǔn)按Dawson法[10],用秒表記錄動(dòng)物自投入水中開始游泳至頭部全部沉入水中8 s不能浮出水面的時(shí)間作為小鼠持續(xù)游泳時(shí)間。

尿素氮、乳酸、乳酸脫氫酶、糖原的測定：末次給藥1 h后,在溫度30 ℃的水箱中不負(fù)重游泳90 min。休息60 min后摘眼球采全血約0.5 mL。2 000 r/min離心15 min,取上層血清,按試劑盒要求進(jìn)行尿素氮、乳酸及乳酸脫氫酶的測定。斷椎處死小鼠,解剖取肝臟,經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸凈水分準(zhǔn)確稱取100 mg肝組織和后肢肌肉組織,按試劑盒要求進(jìn)行糖原測定。

血紅蛋白含量測定：取上述離心取上層血清后剩下的血紅細(xì)胞20 μL,加2 mL蒸餾水稀釋,室溫靜止放置30 min,使紅細(xì)胞發(fā)生溶血釋放出全部血紅蛋白,再用蒸餾水4倍稀釋上述溶液,然后在413 nm下測其吸光值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果以(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)表示。P<0.05表示有顯著性差異,P<0.01表示差異極其顯著。

2 結(jié)果與討論

2.1 鮑魚性腺多糖的體外溶栓作用

表1顯示,與生理鹽水組比較,CAGP低劑量、CAGP高劑量及陽性對照檸檬酸鈉均具有明顯的溶栓能力,50和200 μg/mL的CAGP的溶栓率分別為62.95%和67.70%。目前,對于多糖研究較多的是抗凝血作用,溶栓作用還少有報(bào)道。體外溶栓作用的研究主要集中在生物酶及中藥組分[8-9]。本研究中鮑魚性腺多糖CAGP為具有一定蛋白含量的多糖提取物,其溶栓作用的具體機(jī)制有待于深入研究。

表1 CAGP的體外溶栓作用(n=3)

2.2 CAGP對小鼠糖原及血紅蛋白含量的影響

表2 CAGP對小鼠肝糖原、肌糖原及血紅蛋白含量的影響(n=10)

表2顯示,與空白對照組相比,CAGP能夠明顯提高肝臟和肌肉組織中糖原含量,說明CAGP能提高組織糖原的貯備能力。糖原貯備的增加有利于提高機(jī)體耐力。陽性對照也可明顯提高肝組織中糖原含量,但對肌肉中糖原含量的提高不明顯。 由表2可知,CAGP組、陽性對照組的血紅蛋白含量均明顯升高,說明CAGP能夠促進(jìn)體內(nèi)血紅蛋白的合成。血紅蛋白含量的提高能夠?yàn)檫\(yùn)動(dòng)提供更多的氧,從而達(dá)到緩解疲勞的效果。

2.3 CAGP對小鼠乳酸、尿素氮及乳酸脫氫酶活力的影響

表3 CAGP對小鼠乳酸脫氫酶活力、乳酸及尿素氮含量的影響(n=10)

表3顯示,與空白對照組相比,CAGP組和陽性對照組的血清乳酸的含量均明顯降低,而且這兩組的血清乳酸脫氫酶活力均明顯提高。鮑魚性腺多糖可能通過提高機(jī)體乳酸脫氫酶活力,加速運(yùn)動(dòng)后乳酸的代謝,減少乳酸堆積,從而改善運(yùn)動(dòng)疲勞。CAGP組和陽性對照組血清尿素氮的含量較空白對照組有所降低,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。

2.4 CAGP對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

表4顯示,與空白對照組比較,CAGP組和陽性對照組小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間均明顯延長,分別是空白對照組的1.46和1.73倍。抗疲勞能力的加強(qiáng)主要表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)耐力的提高,小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的長短可以反映小鼠運(yùn)動(dòng)疲勞的程度。因此,CAGP能提高小鼠的運(yùn)動(dòng)耐力,具有抗疲勞活性。

表4 CAGP對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響(n=10)

Tab.4 Effect of CAGP on swimming endurance exercise(n=10)

組別w/(mg·kg-1)t(游泳)/min空白對照組3.57±0.71CAGP2005.22±0.87?陽性對照組806.50±0.94??注:?表示P<0.05(同空白對照組比);??表示P<0.01(同空白對照組比)。

3 結(jié) 論

CAGP具有一定的體外血栓溶解作用,其溶栓作用很可能與其蛋白部分的酶活力有關(guān)。CAGP具有抗疲勞活性,在CAGP的作用下,小鼠負(fù)重游泳時(shí)間明顯延長,肝臟糖原、肌肉糖原和血紅蛋白的含量以及血清乳酸脫氫酶活力顯著提高,血清中乳酸含量有效降低。

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