炮制對葛根中總黃酮及葛根素含量的影響

吳 可，謝朝暉 ，王 芳

(湖南中醫藥大學第一附屬醫院藥劑科，湖南長沙 410007)

葛根為豆科植物野葛[Pueraria lobata(wild)Ohwi]的干燥根，性涼、味甘、辛。具有解肌退熱、生津透疹、升陽止瀉的功效。生葛根擅于解肌退熱、透疹生津；麩煨品發散作用緩和，增強止瀉的作用[1]。葛根主要含有黃酮類物質20 余種及葛根苷類、三萜類等成分[2]。藥理研究表明，葛根總黃酮和葛根素具有使冠狀動脈擴張、降低心肌耗氧量、改善微循環、解痙及降壓等作用。本實驗對葛根采用不同炮制方法下總黃酮和葛根素的含量進行了研究，現報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-9200 紫外可見分光光度計 （北京瑞利分析儀器公司）；DHG101 電熱恒溫鼓風干燥箱 （鞏義市英峪予華儀器廠）；SK3300H 超聲提取器 （上海科學超聲儀器公司）；AR1140分析天平（奧豪斯國際貿易公司）。

1.2 試藥

葛根飲片購于湖南省邵陽市廉橋藥材市場，經鑒定為野葛[Pueraria lobata（wild）Ohwi]的干燥根。葛根素（批號：0752-9605，湖南省藥品檢定所），硅膠gF254（批號：050630，青島海洋化工廠），其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

2.1.1 生葛根 取葛根片，凈制，粉碎，過二號篩，為1 號粉。

2.1.2 麥麩煨制[3]按文獻將葛根片煨至呈焦黃色時取出，篩去麥麩（麥麩用量為每100 克葛根用麥麩30g），放涼，粉碎，過二號篩，為2 號粉。

2.1.3 麥麩烘制[4]取100g 葛根片置方盤中，上下各鋪一層麥麩，烘制條件為：165℃、40 min 取出放涼 （麥麩用量為每100 克葛根用麥麩30g），粉碎，過二號篩，為3 號粉。

2.2 含水量測定[5]

分別稱取1、2、3 號粉約1g，精密稱定，平鋪于干燥至恒重的稱量瓶中，開蓋，置干燥箱中，在105℃ 干燥5 h，將瓶蓋好，轉移至干燥器中冷卻30 min，精密稱定重量，再于105℃干燥1 h，冷卻，稱重，至連續兩次稱重差異不超過5 mg為止，根據減少的重量計算供試品含水量，結果見表1。

表1 生品與制品含水量測定結果Tab.1 determination result of moisture in Pueraria lobata Ohwi and preparation Pueraria lobata Ohwi

2.3 醇溶性浸出物的測定[5]

分別取供試品約2g，精密稱定，置250 ml 的錐形瓶中，精密加95%乙醇50 ml，密塞，稱定重量，靜置1h 后，連接回流，加熱至沸騰，并保持微沸1 h，放冷后，精密稱定重量，用水補足減失重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25 ml，置已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定。結果見表2。

表2 醇溶性浸出物含量測定結果Tab.2 Contentdetermination results of ethanol-soluble extractives

2.4 總黃酮含量的測定[6-7]

2.4.1 線性關系考察 取干燥至恒重的葛根素標準品約5 mg，精密稱定，置25 ml 量瓶中，用95%乙醇溶解并定容至刻度，搖勻， 精密吸取 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 ml分別置 10 ml 量瓶中，用95%乙醇定容至刻度，搖勻，在251 nm 處測定吸光度，以濃度（C）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：A=0.062 4C+0.001 0（r=0.997 9），結果表明，葛根素在4.008～12.024 μg/ml 范圍內呈良好的線性關系。

2.4.2 精密度 取“2.4.1”項下已配得葛根素濃度為8.016 μg/ml的溶液，共5份，按“2.4.1”項下方法測定吸光度，計算RSD為0.36%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復性試驗分別稱取1、2、3 號粉，共 6份，按“2.4.6”項下方法操作，在相同條件下測定，計算得總黃酮含量量分別為 0.676、0.810、0.874g，符合要求。

2.4.4 穩定性試驗 取1、2、3 號粉適量，按“2.4.6”項下方法操作，分別在 0、2、4、8、12、24h 進行測定，計算得總黃酮含量分別為3.09%、3.55%、3.79%。結果表明，溶液在24h 內基本穩定。

2.4.5 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的樣品液5份，分別置5個10 ml 量瓶中，分別加入5 ml 已測定濃度為4.008 μg/ml的樣品液，用95%乙醇定容至刻度，搖勻，在251 nm 處測定吸光度，計算回收率，加樣回收率計算公式：回收率=（加入純品后的測得總量-樣品中所含被測成分量）/加入純品量，結果見表3。

表3 總黃酮加樣回收率試驗（n=5）Tab.3 Results of recovery test of total flavonoids(n=5)

2.4.6 樣品含量測定分別稱取1、2、3 號粉約25g， 精密稱定，放入500 ml 圓底燒瓶中，加80%乙醇150 ml 溶解，先超聲20 min，再熱回流提取30 min，提取3次[8]，抽濾洗滌，合并3次濾液，搖勻，轉移至蒸發皿中濃縮至干，放入烘箱中干燥至恒重，分別取3 種提取物約30 mg，精密稱定，分別置50 ml量瓶中，用95%乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，再分別取1 ml置3個50 ml 量瓶中，用95%乙醇溶解并定容至刻度，以空白溶劑作對照，在251 nm 波長處測定吸光度，根據標準曲線方程計算總黃酮的含量，結果見表4。

表4 各供試品總黃酮含量測定結果（n=3）Tab.4 Contentdetermination results of total flavonoids indifferent sample（n=3）

2.5 葛根素的含量測定[8]

2.5.1 線性關系考察 取葛根素對照品約1.5 mg，精密稱定，置25 ml 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取標準溶液 0.9、1.0、1.1、1.2、1.3 ml分別置 10 ml 量瓶中，各加甲醇至刻度，搖勻，以甲醇為空白對照液，在251 nm 波長處測定吸收度，以濃度（C）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：A=0.080 5C+0.048 3（r=0.997 6），結果表明葛根素在1.248～6.240 μg/ml 范圍內具有良好的線性關系。

2.5.2 重復性試驗分別稱取1、2、3 號粉，共6份，按供試品溶液制備方法操作，在相同條件下測定，計算得葛根素平均質量分別為 0.398、0.555、0.606g，符合要求。

2.5.3 穩定性試驗 取 1、2、3 號供試品溶液分別在 0、2、4、8、12、24h 進樣，在上述條件下進行測定，計算得葛根素含量分別為1.82%、2.43%、2.64%。結果表明，溶液在24h 內基本穩定。

2.5.4 加樣回收率試驗 按 “2.5.5”項下方法操作，取濃度為4.008μg/ml 對照品溶液，共5份，分別加入已知濃度為5.407μg/ml、體積為9 ml 的樣品溶液中，以95%乙醇為空白溶液，在251 nm 波長處測定吸收度，根據回歸方程計算回收率。得平均回收率為98.06%，RSD=0.31%（n=5）。結果見表5。

表5 葛根素加樣回收率試驗（n=5）Tab.5 Results of recovery test of puerarin(n=5)

2.5.5 樣品含量測定

2.5.5.1 薄層層析板制備[8]取硅膠H 加0.5%CMC-Na 溶液，混勻，濕法制板，涼干后，105℃活化0.5 h，備用。

2.5.5.2 供試品溶液制備分別取1、2、3 號粉提取物約30 mg，精密稱定，分別置3個50 ml 量瓶中，超聲20 min，使提取物充分溶解，分別取1 ml 置3個50 ml 量瓶中，分別定為1、2、3 號供試品溶液，備用。

2.5.5.3 葛根素含量測定[9]用進樣器精密取葛根素標準液及1、2、3 號供試液各10 μl 點樣于制備好的薄層板上， 以三氯甲烷-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）配制展開劑，將展開劑倒入展開槽中，再把點好供試液的薄層板放入展開槽中，先不接觸展開劑，使薄層板飽和15 min 后，再放入展開劑中進行展開，展開約10 cm 后取出，噴適量氨水于薄層板，在紫外燈下365 nm處，根據熒光畫定斑點位置，刮下斑點于具塞試管中，加5 ml甲醇，超聲20 min，再離心10 min，倒出溶液，以甲醇為空白對照液，在251 nm 波長處測定吸收度，代入回歸方程，計算樣品中葛根素含量，結果見表6。

3 討論

實驗表明，水分含量生品最高，麩烘品最低，依次為生品＞麩煨品＞麩烘品，說明炮制后更干燥，有利于儲存。醇溶性浸出物以生品最高，麩烘品最低，分別是生葛根＞麩烘品＞麩煨品，表明葛根經麩烘或麩煨后不利于醇溶物的溶出，提示麩烘或麩煨可能對醇溶性成分有破壞。

表6 各供試品中葛根素含量測定結果（n=3）Tab.6 Contentdetermination results of Puerarin indifferent samples（n=3）

從總黃酮和葛根素含量的測定結果可以看出，生葛根、麩煨品及麩烘品的總黃酮含量分別為3.09%、3.54%、3.78%；葛根素含量分別為1.81%、2.43%、2.62%；結果表明，葛根經加熱炮制后總黃酮及葛根素含量均高于生品，麥煨品略低于麩烘品，可能與樣品處理程度有關。

葛根臨床應用生熟有別，從已知的作用成分來看，用于心血管系統以麩煨較好，但根據中醫藥理論，煨后發散作用減弱，止瀉作用增強，其炮制原理有待于進一步研究。

[1]葉定紅,張世臣.中藥炮制學[M].北京:人民衛生出版社,2000:393.

[2]王浩生,鄧文龍,薛春生.中藥藥理與應用[M].北京:人民衛生出版社,2004:1146.

[3]龔千峰,丁安偉,孫秀梅,等.中藥炮制學[M].北京:中國中醫藥出版社,2003:360.

[4]解統新.淺談葛根炮制[J].山東中醫雜志,2003,22(8):496.

[5]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學工業出版社,2005:附錄ⅨH,附錄ⅩA,附錄ⅪB.

[6]周國海,于華忠,李國章,等.葛根中總黃酮及葛根素的含量測定[J].湖南林業科技,2004,31(5):71-72.

[7]彭欣榮,李璞.RP-HPLC 法測定保健品葛根粉中葛根素的含量[J].河南預防醫學雜志,2007,18(3):177-178,183.

[8]楊振林,寇玉璽,李紅舉.紫外分光光度法測定葛根沖劑中葛根素含量[J].醫療論壇學報,2005,26(6):57.

[9]彭菊艷,王俊儒,張義英,等.葛根有效成分的含量測定與提取工藝優化[J].陜西農業科學,2005,(3):52-54.