前列地爾乳劑的特殊安全性實驗研究

李 萍 ，劉宏大 ，王宏英 ，薛 雁 ，薛百忠 ，潘月軍

（1.遼寧諾康生物制藥有限責任公司，遼寧沈陽 110171；2.吉林省育華藥業(yè)有限責任公司，吉林長春 130122）

前列地爾乳劑是前列地爾為主要成分的脂質(zhì)乳制劑，具有高效性、靶向性、持續(xù)性。前列地爾是一種高效生理活性物質(zhì)，具有擴張血管、抑制血小板聚集、抗血小板活化作用，改善微循環(huán)，抑制動脈粥樣硬化形成，對肝、腎、肺、胃病變均有治療、保護作用。臨床上主要用于心腦血管疾病、糖尿病并發(fā)癥、閉塞性動脈硬化癥、肝損傷等方面，還是老年下肢血管疾病的主要推薦藥[1-2]。為了評價前列地爾乳劑是否符合靜脈注射藥物的安全性標準，從溶血性、血管刺激性和過敏性三個方面進行了實驗研究。

1 儀器與試藥

1.1 試藥

0.9 %氯化鈉注射液（沈陽志鷹制藥廠）；前列地爾乳劑（2 ml∶10 μg，吉林省育華藥業(yè)有限責任公司）。

1.2 實驗動物

新西蘭種白兔：體重2.0～2.5 kg，雌雄兼用，沈陽藥科大學實驗動物室提供，動物使用證號：SYXK（遼）2003-0012。健康豚鼠，全白色毛，18 只，體重250～300g，雌雄兼用，沈陽藥科大學實驗動物室提供，動物使用證號：SYXK（遼）2003-0012。

1.3 受試物

前列地爾供試溶液：2 ml 前列地爾乳劑加入10 ml 0.9%氯化鈉注射液稀釋，混勻，備用。雞蛋清靜脈注射液（陽性對照藥）：臨用時用0.9%氯化鈉注射液配制成含量為2%（體積比）的淺黃色透明溶液。

2 方法與結(jié)果[3-7]

2.1 體外溶血性試驗

2.1.1 方法

自家兔耳緣靜脈采血15 ml，用玻璃珠除去纖維蛋白后，離心15 min（1 500 r/min），除去上清液，再以10倍量生理鹽水洗滌3次（均離心棄去上清液），至上清液無紅色，再用0.9%氯化鈉注射液配成2%紅細胞混懸液，備用。取10 ml 試管7 支，按表1 加入各種溶液，其中第6 管為生理鹽水空白對照，第7 管為陽性對照（蒸餾水）。各管輕輕搖勻后，37℃水浴中溫孵3 h，觀察0.5～3.0h 內(nèi)各試管內(nèi)的溶血程度，按表2 標準判斷。

表1 體外溶血試驗

2.1.2 結(jié)果

前列地爾乳劑在0.5～3.0h 內(nèi)未出現(xiàn)溶血或部分溶血現(xiàn)象，表現(xiàn)為溶液中紅細胞全部下沉，上層液乳白色與前列地爾乳劑相同，搖勻后紅細胞分散；生理鹽水組在0.5～3.0h 內(nèi)也未出現(xiàn)溶血或部分溶血現(xiàn)象，蒸餾水組在各時間點全溶血，結(jié)果見表3。

表2 溶血結(jié)果判斷

表3 前列地爾注射液體外溶血試驗結(jié)果

2.2 血管刺激性試驗

2.2.1 方法

家兔6 只，隨機分成兩組，第一組左耳注射前列地爾注射液1 ml/kg；第二組左耳給等容積0.9%氯化鈉注射液作對照，連續(xù)給藥3d，每天1次，末次給藥后24 h，處死動物，在進針部位下1 cm和5 cm 處，剪取兔耳，肉眼可見有無紅腫、丘斑形成等，并以10%甲醛固定，石蠟切片，HE 染色，光鏡下觀察血管內(nèi)皮、皮下組織及血栓形成情況。

2.2.2 結(jié)果

肉眼所見：給藥組和對照組的給藥局部未見明顯增生、炎癥及組織壞死等出現(xiàn)。鏡下所見：給藥組1 cm和5 cm 處血管腔內(nèi)無血栓、血管內(nèi)皮細胞及周圍結(jié)締組織均未見明顯異常。氯化鈉注射液組1 cm和5 cm 處血管及周圍結(jié)締組織均未見明顯異常。

2.3 全身過敏性試驗

2.3.1 劑量分組

2.3.1.1 試驗組：前列地爾供試品溶液，致敏劑量每次1 ml，共3次（ip）；激發(fā)劑量 2 ml，共 1次 （iv）。

2.3.1.2 陽性對照組：雞蛋清靜脈注射液，致敏劑量每次1 ml，共 3次（ip）；激發(fā)劑量 2 ml，共 1次（iv）。

2.3.1.3 陰性對照組：給相同劑量的0.9%氯化鈉注射液。

2.3.2 方法

取健康白色豚鼠18 只，隨機分成三組，即前列地爾乳劑試驗組、雞蛋清靜脈注射液陽性對照組和陰性對照組，每組6 只，雌雄兼用。每只豚鼠分別隔日、腹腔注射（ip）前列地爾供試品溶液、雞蛋清靜脈注射液和0.9%氯化鈉注射液1 ml，連續(xù)3次，每次注射后觀察豚鼠的反應(yīng)情況。ip 結(jié)束后，每組再分成兩小組，每小組3 只。分別于首次注射受試物后的第14天和第21天單次靜脈注射 （iv）以上相應(yīng)的受試物2 ml進行激發(fā)，觀察記錄動物注射后3d 內(nèi)有無搔鼻、聳毛、呼吸困難、痙攣、休克直至死亡等，見表4 中的過敏癥狀。

2.3.3 結(jié)果

健康白色豚鼠分別隔日ip 前列地爾注射液，雞蛋清靜脈注射液，0.9%氯化鈉注射液1 ml，連續(xù)3次。每次給藥后三組豚鼠均未出現(xiàn)任何異常反應(yīng)，活動、攝食、飲水均正常，與陰性對照組相同。

表4 豚鼠過敏反應(yīng)級數(shù)

首次給藥后14d和21d分別單次靜脈注射（iv）前列地爾供試品溶液、雞蛋清靜脈注射液和0.9%氯化鈉注射液2 ml。注射后，前列地爾乳劑試驗組豚鼠僅出現(xiàn)輕微搔鼻或顫抖反應(yīng)，未引起死亡，過敏反應(yīng)級數(shù)為1；而雞蛋清組豚鼠出現(xiàn)嚴重而明顯的過敏反應(yīng)癥狀，主要表現(xiàn)為豎毛、呼吸困難、抽搐、尿便失禁、甚至出現(xiàn)休克死亡，死亡時間均在2 min 內(nèi)，死亡率達100%，過敏反應(yīng)級數(shù)為4 級。陰性對照組豚鼠無任何異常反應(yīng)。

3 討論

體外溶血實驗表明，前列地爾乳劑在臨床使用的濃度下，無溶血性和紅細胞黏集作用。

前列地爾凍干粉針，對血管的刺激性較強，靜脈滴注后多有不同程度的灼樣脹痛，若滴注過快，疼痛嚴重。在前列地爾乳劑的血管刺激性試驗中，未見明顯刺激作用，可能由于前列地爾被包裹在乳劑粒子中，具備了靶向性和提高穩(wěn)定性的同時，也可避免前列地爾與血管的直接接觸，有效地降低了注射過程中局部紅腫和疼痛的不良反應(yīng)。

過敏反應(yīng)是一種變態(tài)反應(yīng)，當制劑中某些物質(zhì)以抗原或半抗原初次進入機體，可以通過刺激機體產(chǎn)生抗體。這種抗體附著在肥大細胞上，此后又有同樣抗原進入機體時，即與機體發(fā)生反應(yīng)，使肥大細胞釋放組胺等物質(zhì)，造成局部水腫，動物出現(xiàn)咳嗽或呼吸困難、抽搐，甚至休克死亡。實驗動物中以豚鼠對過敏反應(yīng)最為敏感，因此，采用豚鼠進行過敏性反應(yīng)實驗。過敏反應(yīng)級數(shù)達2 級（含2 級）以上，則該受試物被認為過敏反應(yīng)不合格。過敏性試驗結(jié)果表明，前列地爾乳劑未出現(xiàn)明顯的過敏反應(yīng)，即認為無過敏反應(yīng)。

以上試驗結(jié)果表明，前列地爾乳劑安全性好，為臨床用藥提供一定的理論依據(jù)。

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