三種抗凝管在血細胞分析中的評價

唐金華

（防城港市第一人民醫院檢驗科，廣西 防城港 538021）

在臨床醫學實驗室中，檢驗操作經歷了手工操作、半自動化分析和自動化分析的過程。目前自動化分析儀以高新技術為基礎，以提高準確度、精密度、靈敏度、高效率為特點，在現在臨床醫學實驗室中廣泛應用[1]。供檢驗分析的抗凝血標本，用傳統方法制備的抗凝劑遠遠不能滿足實驗室的要求，需采用EDTA鹽，因其對紅、白細胞形態影響很小，根據國際血液學標準公委員會(International committee standard of hematology，ICSH)1993年文件建議，血細胞計數用EDTA二鉀做抗凝劑，用量為 EDTA-K2·2H2O 1.5～2.2 mg，(4.45±0.85)μmol/ml血液。EDTA-Na與EDTA-K2對血細胞計數影響均較小，但二鈉溶解度明顯低于二鉀，有時影響抗凝效果，其他抗凝劑不適用于血細胞計數。為了快速方便的應于臨床實驗室，因此近10年來，國內外均有生產各抗凝管應用于臨床實驗室。由于各種抗凝管都遵循了國際血液學標準，選擇最適合做血細胞計數分析的EDTA二鉀做抗凝劑，只是用量和性狀不同，有的是干劑，有的是水劑，但是用的比例是一樣的。本文對三種抗凝管對血細胞及血細胞形態的影響進行比較，結果顯示三種抗凝管對血細胞計數分析無影響，但通過制片進行瑞氏染色，用光學顯微鏡觀察，發現購買的烘干抗凝管對血細胞形態影響較大，血小板易凝集。探討的過程如下：

1 資料與方法

1.1 標本來源 選擇本院2011年1～4月門診健康體驗人群40份血液標本。

1.2 儀器與試劑 日本東芝KX-21N血細胞分析儀，希森美康生物有限公司(無錫)提供的配套的溶血素、釋稀液、濃縮清洗液。日本生產OLYMPUS光學顯微鏡，由珠海貝索生物技術有限公司生產的瑞氏-吉姆薩染液。

1.3 自制抗凝劑EDTA二鉀的制備 用分析天平準確稱量EDTA-K2·2H2O 10 g，倒入燒杯中，然后用蒸鎦水溶解，倒入帶1000 ml刻度的容量瓶中，先加少量蒸鎦水分多次溶解燒杯中的EDTA-K2，直到溶解完，然后加蒸鎦水到容量瓶中準確定位到1000 ml，充分振蕩混勻，然后過濾，過濾后分裝到帶0.5 ml刻度的管中，每管加EDTA溶液10 μl，加蓋放室溫避光陰涼處備用[2]。

1.4 血片的制備 三種抗凝管的血液標本進行血細胞計數后，立即進行制片，按照日常工作標準操作進行制作，制作有頭有尾，厚薄適宜的血片。自制抗凝管、購買烘干抗凝管、購買液體真空抗凝管各推一張血片，待自然風干后，進行瑞氏-吉姆薩染色，用光學顯微鏡觀察其血細胞的形態。

1.5 血細胞計數的5項指標檢測 采用門診健康體檢人群隨機選取的血標本，按其要求的血量置于三種抗凝管中，充分混勻，觀察有無凝塊或微小凝集，上機進行5個項目的檢測，檢測方法按標準操作程序規范操作分析。

1.6 統計學方法 定量5項檢測指標的資料配對采用t檢驗。

2 結果

自制抗凝管、購買烘干抗凝管、購買液體真空采血抗凝管，按其要求比例進行采血，充分混勻后觀察均無凝集或微小凝塊現象。三種抗凝管做好血細胞計數分析及制片后，放置一段時間觀察血漿均無溶血現象發生。

自制抗凝管、購買烘干抗凝管、購買液體真空采血抗凝管對40份標本進行抗凝，抗凝血標本5項血液指標檢測結果見表1。由表1可見，自制抗凝管與購買烘干抗凝管及自制抗凝管與購買液體真空采血管經過配對t檢驗比較，差異均無統計學意義(P＞0.05)，由此說明自制抗凝管對檢驗結果無影響，說明自制抗凝管的制備過程及用量是正確的。

對三種抗凝管抗凝血推制血片用瑞氏染液進行染色，在光學顯微鏡下觀察其細胞形態變化，三種抗凝管的抗凝血的血片均有一定比例的血細胞形態變化。在鏡下可見粒細胞的細胞核分葉不見或細胞腫脹，甚至可見少量白細胞裂解、血小板凝集等現象。但用購買烘干抗凝管抗凝的血標本，其血細胞形態變化的比例高一點，可能是烘干抗凝的蒸鎦水被蒸發采用相同比例的血液，因其抗凝濃度較高，這是根據國際血液標準化委員會認為抗凝劑濃度越大對血細胞形態影響越大，所以致血細胞形態變化較大一點。

表1 三種抗凝管抗凝血5項血液指標檢測結果(n＝40)

3 討 論

在現在臨床醫學實驗室中，自動化儀器的廣泛應用大大提高了工作效率，為了滿足快速、方便、減少負擔的需要，購買現成的抗凝管抗凝血標本進行血細胞分析，也成為臨床實驗室發展的必然結果。本文實驗結果表明：購買的兩種抗凝管與自制抗凝管進行抗凝血液標本檢測的5個項目的配對t檢驗差異無統計學意義(P＞0.05)。購買烘干抗凝管抗凝的血標本對血細胞形態影響較大，且烘干的抗凝管有部分出現裂開的現象，在采血的過程中發現有漏血的，購買烘干抗凝管的管壁較厚不宜采血。自制抗凝管對檢測結果經過比較差異無統計學意義，且自制抗凝管成本低廉，價格不及其他兩種購買抗凝管的十分之一，原料來源廣泛，制作簡單，雖然需要人力來制作，但發現有問題也易改進；購買液體真空采血抗凝管抗凝的血標本，結果準確，血細胞形態變化較小，快速、方便，但較昂貴且需血量多(1.8 ml血液)，不適合新生兒和嬰兒采血。

綜上所述，筆者自制的抗凝管對血細胞形態及PLT的影響較小，對檢驗結果無影響，原料來源廣泛，制備也較簡單，成本低廉，可適合各種人群(包括新生兒、嬰幼兒、未成年人、成年人)采血進行血細胞計數分析，具有較高的使用或推廣價值。

[1]蔣廷武.加強檢驗與臨床溝通以促進標本采集質量的提高[J].臨床和實驗醫學雜志,2006,5(7):128-129.

[2]葉應嫵,王毓三,申小瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].3版.南京:東南大學出版社,2006:780-781.