艾灸對大負荷訓練期間男子中長跑運動員T淋巴細胞亞群的影響

高明 吳瑛 李國強

1 上海體育學院（上海 200438） 2 上海中醫藥大學針灸推拿學院

國內外研究表明［1，2］，大負荷運動訓練可引發運動員免疫系統機能失衡。中長跑運動員4周賽前高強度大負荷訓練使CD8+細胞進一步升高，CD4+/CD8+比值倒置［3］，優秀男子古典式摔跤運動員冬訓大負荷訓練期4周后，CD4+細胞含量及CD4+/CD8+比值明顯下降［4］，提示T淋巴細胞亞群發生變化，表明運動員免疫功能紊亂，感染疾病的幾率增大。

艾灸療法能增強機體非特異性和特異性免疫功能的作用，在預防保健、治療免疫系統疾病和調節機體免疫機能方面有肯定作用。艾灸有利于運動員恢復血清CK活性，促進血乳酸消除，降低體內血乳酸水平［5，6］，減輕運動性疲勞，提高機體運動能力。有研究表明，艾灸能明顯改善慢性疲勞綜合征（CFS）患者癥狀、提高臨床療效［7］；化膿灸足三里穴、懸鐘穴，可增加感冒易感患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值［8］，提高免疫機能 ；隔鹽艾灸神闕穴后，CD3+、CD4+、CD8+均明顯上升［9］，提示艾灸可調節T淋巴細胞亞群平衡。這些報道均提示艾灸對T淋巴細胞亞群有調節作用，可提高患者免疫功能及抗病能力。近年來提出的針灸良性預應激假說［10］和開展的艾灸預處理相關實驗研究［11，12］，也證實了艾灸對心臟、腦保護作用與啟動機體內源性保護機制密切相關。基于此，本研究以中長跑運動員為研究對象，將中醫艾灸療法和“治未病”理論相結合，制定與運動訓練相適應的防治方案，在大負荷訓練早期階段開始干預，研究艾灸對CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞亞群的調節作用，并為艾灸方法在競技體育運動訓練中的應用和推廣提供實驗依據。

1 對象和方法

1.1 研究對象

上海體育學院訓練中心男子中長跑運動員12名，年齡16～21歲，訓練年限3～6年，一級運動員3名，二級運動員9名，均身體健康，采用SAS軟件進行完全隨機化分組，分為對照組（6名）和實驗組（6名），兩組年齡、身高、體重、訓練年限、運動等級等基線情況相比，差異均無統計學意義（P> 0.05），具有可比性。

實驗組和對照組實驗期間均正常生活，按相同計劃訓練。每天下午訓練后，實驗組使用艾灸進行預防性治療，對照組無艾灸干預治療。實驗前一周內患病者如感冒、肺炎等，實驗期間外出比賽不能繼續實驗者，均不納入實驗。

1.2 訓練計劃

根據主教練制訂的全年訓練計劃，在準備期的大負荷階段訓練進行實驗。具體安排如下：第1周為適應訓練周，第2～4周為大負荷訓練期，第5周為調整訓練周。大負荷訓練期每天訓練2次，每周訓練6天，周日休息，共12次，其中，大負荷強度課3次，中負荷強度課5～6次，小負荷強度課3～4次；一次訓練課準備活動20～30分鐘，正式訓練80～90分鐘，整理活動20～30分鐘；訓練內容包括一般耐力（負荷強度65～75%、心率150～165次/分鐘、10次/周）、專項耐力（負荷強度85～90%、心率175次/分鐘以上、2次/周）、速度耐力（負荷強度85～95%、心率175～180次/ 分鐘、4～5次/周）、絕對速度（負荷強度95～100%、心率180次/分鐘以上、2～3次/周）、專項速度（負荷強度95～105%、心率185次/分鐘以上、1次/周）、速度（負荷強度95～105%、心率190次/分鐘以上、1次/周）、中長跑專項身體素質（力量、柔韌性、靈敏性、彈跳力）等，訓練中交替安排有氧耐力訓練、混氧訓練、耐酸訓練、專項抗酸訓練。

1.3 艾灸方法

1.3.1 穴位處方：（1）關元穴（RN4）、足三里穴（ST36）（雙）；（2）關元穴（RN4）、三陰交穴（SP6）（雙）［13］。

1.3.2 操作方法：實驗組每天下午訓練后，6:30～7:30進行穴位艾灸預防治療，上述（1）和（2）兩組穴位交替治療，每天灸一組；運用3個艾灸器，內置Φ20×33 mm純艾條，分別置于上述穴位上溫和灸刺激；治療過程中，調節艾灸器的調溫螺絲，使艾灸溫度以患者感覺舒適為度，灸后穴位局部皮膚成淡紅色紅斑為佳；每天1次，每次30 min，每周治療6次，星期日休息；從大負荷訓練開始至調整訓練周結束，共灸治4周。

1.4 測試指標與方法

分別在第1周末（大負荷運動訓練前）、第4周末（大負荷運動訓練3周后）、第5周末（調整訓練1周后），均在清晨6:30～7:00，運動員空腹、安靜狀態下取靜脈血4 ml，2 ml不抗凝，3000 r/min離心10 min分離血清，檢測血睪酮（T）和皮質醇（Cort）；2 ml加入肝素鈉抗凝檢測CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞亞群含量。

采用GC-911放射免疫計數器以放免法檢測T和Cort，按試劑盒說明書操作。

肝素抗凝靜脈血分離100 μl血樣，加入流式管中，加入 20 μl CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5抗體，避光孵育15 min，加入0.5 ml全血紅細胞裂解液，10 min后，加入0.5 ml的流式專用鞘液，以前向散射（FSC）和側向散射（SSC）的dot-plot二維圖區分細胞群，開窗于淋巴細胞群，使用流式細胞儀作雙熒光檢測，測定血T 細胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+）相對含量。

1.5 實驗儀器和試劑

EPICS-XL流式細胞儀和Q-Prep流式細胞儀標本制備儀（美國BECKMAN COULTER公司）；放射免疫計數器（GC-911，科大創新股份有限公司）；可調式微煙艾灸器（廣西桂林市綠竹生物科技有限公司）；純艾條（Φ20×33 mm，廣西桂林市綠竹生物科技有限公司）；CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5，全血紅細胞裂解液，試劑及抗體均購自美國BECKMAN COULTER公司；碘［125I］睪酮放射免疫分析藥盒、皮質醇放射免疫分析藥盒（北京北方生物技術研究所）。

1.6 統計學分析

2 結果

2.1 T、Cort及T/C比值

表1顯示，大負荷訓練3周后，對照組和實驗組分別與同組大負荷訓練前相比，T明顯降低（P< 0.05），Cort明顯增高（P < 0.01），T/C比值明顯降低（P < 0.01）；調整訓練后，對照組和實驗組T、Cort及其比值均恢復，但對照組T、T/C比值仍低于大負荷訓練前（P < 0.05）。對照組和實驗組兩組間相比無統計學意義（P > 0.05）。

2.2 T淋巴細胞亞群含量

表2顯示，實驗組大負荷運動訓練后CD3+T細胞比大負荷訓練前明顯增加（P < 0.01），且比同期對照組明顯增高（P < 0.05）；調整訓練1周后，對照組和實驗組CD3+T細胞與同組大負荷運動訓練后相比顯著降低（P < 0.05，P < 0.05），且實驗組明顯高于同期對照組（P < 0.05）。

實驗組大負荷運動訓練后CD4+T細胞比同組大負荷訓練前明顯增加（P < 0.05），調整訓練1周后，實驗組和對照組CD4+T細胞較同組大負荷訓練后均顯著降低（P < 0.05，P < 0.01）。

實驗組大負荷運動訓練后CD8+T細胞比同組大負荷訓練前明顯增加（P < 0.05）；調整訓練1周后，對照組和實驗組CD8+T細胞與同組大負荷訓練后相比均顯著降低（P < 0.05，P < 0.05），且實驗組顯著高于同期對照組（P < 0.05）。

表1 兩組運動員T、Cort及其比值比較

表2 兩組運動員T淋巴細胞亞群含量比較

對照組大負荷訓練后CD4+/CD8+比值較同組大負荷訓練前明顯上升（P < 0.05），調整訓練1周后仍繼續上升，但無統計學意義（P > 0.05）；實驗組CD4+/CD8+大負荷訓練后升高，調整訓練1周后恢復趨勢，且3次檢測值差異均無統計學意義（P> 0.05）。

3 討論

本研究在訓練第1周小強度、小運動量的適應性訓練之后，即大負荷訓練前，空腹安靜狀態取肘靜脈血，并檢測相關指標作為基礎值。結果顯示：T、Cort及其比值，CD3+、CD4+、CD8+T細胞含量及其CD4+/CD8+比值，對照組和實驗組兩組間差異均無統計學意義，且均在運動員正常值范圍內，故兩組有可比性。

本實驗結果表明，3周大負荷運動訓練后，T明顯下降，Cort明顯上升，對照組和實驗組T/C下降幅度分別達到（48.4±11.5）%和（55.6±8.58）%，當運動員T/C比原來水平下降25～30%，或持續下降則為疲勞或過度疲勞表現［14］，表明本研究的3周大負荷訓練造成了運動員疲勞，訓練負荷已達到大負荷的要求。調整1周后，對照組和實驗組分別恢復至（75.2±15.7）%和（78.2±26.2）%，表明1周調整使運動員機能有所恢復，但未完全恢復到訓練前水平，對照組T、T/C比值仍低于大負荷訓練前，實驗組大負荷訓練前后相比差異無統計學意義，提示艾灸對運動員T、C有一定調節作用，有利于運動員對大負荷訓練的適應。

T淋巴細胞直接反映特異性免疫功能，訓練監控中常作為反映運動員機能狀況和免疫功能的有效指標［14］，CD3+表示T細胞總數，CD4+T細胞具有輔助和調節免疫應答的作用，發揮正反饋調節作用，CD8+T細胞亞群有免疫殺傷或抑制作用，發揮負反饋調節作用，這兩個功能相互拮抗的T細胞亞群在免疫應答中相互協調，保持免疫系統功能的平衡。兩種T細胞亞群比例失調產生免疫功能障礙，進而導致機體抵抗力下降，對各種疾病易感性增加。本研究中，對照組3周大負荷訓練后CD3+、CD4+、CD8+T細胞含量上升，與大負荷訓練前相比無統計學意義，調整訓練后恢復并下降，CD3+、CD4+、CD8+T細胞與同組大負荷訓練后相比均明顯降低，且CD3+、CD4+、CD8+T細胞低于運動員正常值范圍（58.6～83.1%、27.1～49.8%、19.4～41.1%），表明本實驗的大負荷訓練導致男子中長跑運動員T淋巴細胞免疫機能低下。經艾灸防治的實驗組大負荷運動訓練后CD3+、CD4+、CD8+T細胞上升且較大負荷訓練前明顯增加，調整訓練后，實驗組CD3+、CD4+、CD8+T細胞較大負荷訓練后降低，且實驗組大負荷訓練后CD3+、調整后CD3+和CD8+與同期對照組相比，均明顯增高；實驗組CD3+、CD4+、CD8+T細胞均在正常范圍，表明艾灸對男子中長跑運動員T淋巴細胞有調節作用，提高其大負荷運動訓練期間CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞亞群含量，預防CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞亞群低下。這與其它臨床報道［7-9］一致。

本研究中，實驗組CD4+/CD8+比值變化無統計學意義，表現為動態平衡；對照組CD4+/CD8+持續上升趨勢，且大負荷訓練后與同組大負荷前相比明顯上升，對照組調整訓練后仍繼續上升，與以往相關報道［3，4，14］不相符。分析原因，本研究中，對照組調整訓練后CD4+和CD8+明顯下降，低于正常值范圍，CD8+下降更甚，導致CD4+/CD8+比值上升。理論上分析，運動訓練中，常使用CD4+/CD8+比值對運動員免疫機能評估，CD4+與CD8+T細胞相互協調，相互制約，維持機體免疫系統機能的相對平衡，大負荷訓練后上升或下降，經過一定時間調整或休息后，CD4+和CD8+應恢復至大負荷訓練前水平或變化不大，其比值也應恢復至大負荷訓練前水平或變化不大，即保持動態平衡，經過平衡－失衡－新平衡建立的變化，再進行下一周期的大負荷訓練。如果在機體免疫系統機能尚未完全恢復時進入下一周期大負荷運動，則加深對它的抑制。如此反復，會造成運動性免疫機能抑制。臨床上分析，實驗組變化在正常范圍內波動，對照組調整1周后CD3+、CD4+、CD8+T細胞含量均下降且低于正常范圍，CD4+/CD8+比值調整1周后并未恢復到大負荷訓練前水平，綜合分析，進一步表現失調趨勢。

綜上，艾灸能提高男子中長跑運動員大負荷運動訓練期間CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞亞群含量，防止CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞亞群低下，預防CD4+/CD8+失衡。艾灸對大負荷運動訓練階段運動員T淋巴細胞亞群有良性調節作用，有助于提高運動員對大負荷訓練應激的適應。

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