HPLC法測定胞磷膽堿鈉片有關物質以及含量

2011-08-16 01:09:58何文勝

長春工業大學學報 2011年4期

何文勝

(福建生物工程職業學院生物工程系,福建福州 350002)

0 引言

胞磷膽堿鈉片為核苷衍生物,是磷脂生物合成的中間產物,存在于所有細胞中,是磷脂合成的主要輔酶,通過促進卵磷脂的合成而改善腦的功能,表現為意識狀態改善、大腦血流量增加及對氧的攝取明顯提高。通過增加腦血流量,改善腦代謝和催醒。降低腦血管阻力,增加腦血流而促進腦物質代謝,改善腦循環。另外可增強腦干網狀結構上行激活系統的機能,增強錐體系統的機能,改善運動麻痹,故對促進大腦功能的恢復和促進蘇醒有一定作用,用于急性顱腦外傷和腦手術后意識障礙。近年來,廣泛應用于腦手術和顱腦外傷所引起的意識障礙以及其它中樞神經系統急性損傷引起的功能和意識障礙、震顫麻痹、耳鳴和神經性耳聾及乙醇、安眠藥中毒等。

為了有效控制產品質量,保證臨床用藥安全有效,原檢驗標準中含量采用紫外分光光度法,有關物質采用薄層色譜法測定[1]。參見文獻[2-5],文中建立了HPLC法[6-9]測定胞磷膽堿鈉片有關物質以及含量,方法簡便、準確、重現性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-2010CH T高效液相色譜儀,色譜柱為Grace Smart 4.6 mm ×250 mm 5 μm 。

1.2 試藥

胞磷膽堿鈉片,福建省閩東力捷迅醫藥有限公司,批號:091001,091002,091003;

胞磷膽堿鈉對照品,中國藥品生物制品檢定所,批號:140675-200602;

磷酸二氫鈉,分析純,汕頭金砂化工廠;

水為超純水;

三乙胺,分析純,國藥集團化學試劑有限公司;

磷酸,分析純,上海三鷹化學試劑有限公司。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與適用性試驗

色譜柱為Grace Smart RP C184.6 mm×250 mm 5 μm;以磷酸二氫鈉溶液(取磷酸二氫鈉3.12 g,加水1000 mL溶解,加入三乙胺5 mL,用磷酸調 pH值至 5.0)為流動相;流速1.0 mL·min-1;檢測波長 271 nm,進樣量20 μL。供試品溶液測定色譜圖中,按胞磷膽堿鈉的主峰計算,理論板數為7571,分離度為7.6。

2.2 有關物質測定

2.2.1 專屬性

精密稱取經強光照射(4500 lx±500 lx)、高濕(90%RH ±5%RH,5 d)、高溫(90 ℃,24 h)加速破壞的樣品細粉約32 mg置于50 mL量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。濾過,照上述選定的方法測定,結果表明,用上述方法加速破壞后測定結果均無明顯變化。

精密稱取輔料細粉約32 mg置于50 mL,加流動相稀釋至刻度,依法測定,結果表明,輔料對胞磷膽堿鈉的測定無干擾。

2.2.2 定量限

取有關物質項下的對照溶液用流動相稀釋10倍。按上述色譜條件測定,記錄色譜圖,信噪比S/N＞10。

2.2.3 有關物質穩定性實驗

分別取有關物質項下的供試品溶液與對照溶液,于室溫下放置,按上述選定的方法,在0,2,4,6,8 h分別進樣測定,結果供試品溶液的色譜圖中雜質百分含量的RSD=2.98%,表明本品在室溫下放置8 h內穩定,見表1。

表1 胞磷膽堿鈉片有關物質穩定性試驗

2.2.4 有關物質測定

精密稱取本品細粉32 mg,置于50 mL容量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續濾液作為供試品溶液。精密量取供試品溶液2 mL于100 mL的容量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,作為對照溶液。照上述選定的色譜條件試驗,取對照品溶液20 μL注入液相色譜儀。結果表明,各雜質含量均小于1.0%,見表2。

表2 胞磷膽堿鈉片有關物質測定試驗

2.3 含量測定

2.3.1 專屬性

精密稱取輔料空白細粉約32 mg置于50 mL量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。濾過,精密量取續濾液2 mL置10 mL量瓶中,用流動相稀釋至刻度,照含量測定項下方法測定,結果表明,輔料對胞磷膽堿鈉含量測定無干擾。

2.3.2 耐用性

另換一根色譜柱 Thermo ODS-2 HYPERSIL 4.6×250 nm柱對同一份樣品溶液進行實驗,柱效良好,結果表明,該色譜系統在兩根色譜柱上表現無明顯差別。

2.3.3 線性關系

精密稱取胞磷膽堿鈉對照品約 16 mg置200 mL量瓶中,用適量流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,分別精密量取 5,10,15,20,25,30,50 μL進樣。按上述選定的條件測定。以對照品進樣量(μ g)為橫坐標,以峰面積A為縱坐標進行線性回歸,回歸方程為:A=549471C+6613.3,r=0.99996。結果表明,胞磷膽堿鈉在0.403～4.03 μ g范圍內與峰面積成良好的線性關系,見表3和圖1所示。

表3 胞磷膽堿鈉片含量測定線性試驗

圖1 胞磷膽堿鈉片線性圖

圖中

2.3.4 胞磷膽堿鈉片回收率試驗

精密稱取胞磷膽堿鈉對照品約8 mg,10 mg,12 mg(各3份),同時精密稱取按處方比例的空白輔料適量于25 mL量瓶中,加流動相少許使其溶解,用流動相稀釋至刻度,搖勻;濾過,精密量取續濾液2 mL置于10 mL量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液,按上述色譜條件進樣 20 μL,記錄色譜圖,結果平均回收率為100.2%,RSD為0.98%,見表4。

2.3.5 重復性試驗

精密稱取本品一批(批號:09001-1)約32 mg 6份,按含量測定項下方法配制,按上述選定的條件測定,結果平均含量為 96.87%,RSD=0.62%,結果表明重復性良好,見表5。