兩種檢測膽紅素的指標評價黃疸療效的比較

韓升波

干化學和濕化學是臨床常用的兩種檢測生物化學參數的機器，在這里我們主要探討強生VITROS 350和OLIMPUS AU640兩種機器關于膽紅素的檢測對于臨床評價病理性黃疸的過程及療效的作用大小。

1 機器與方法

1.1 機器與試劑強生VITROS 350，試劑為強生干化學膽紅素干片，檢測總膽紅素方法為重氮法，檢測結合和非結合膽紅素用的是膽紅素組分-分光光度法(以HPLC方法參考方法)，質控為強生專用質控。OLIMPUS AU640，試劑為日本合光純藥工業株式會社生產的膽紅素試劑，總膽紅素和直接膽紅素都是用重氮法檢測，間接膽紅素為計算所得，質控用的是伯樂質控。

1.2 標本來源收集病房不同疾病高膽紅素患者90例(阻塞性黃疸患者30例、溶血性黃疸患者30例，肝病性黃疸30例)，治療前和治療后各檢測一次。都選取早晨空腹靜脈抽血3～5 ml，15 min之內離心分取血清。標本無脂血和溶血，-80°C冰凍保存集中測定。

1.3 實驗方法測定過程及參數設置均按照說明書執行，嚴格按照SOP文件操作。全部數據用統計軟件分析，做治療后和治療前兩種機器檢測數據對比。

2 實驗過程及結果

2.1 兩臺機器線性范圍評價分別用定值的低濃度血清Ⅰ和高濃度血清Ⅱ，相互稀釋(比如3Ⅰ+1Ⅱ，2Ⅰ+2Ⅱ，1Ⅰ+3Ⅱ)成五個不同濃度梯度，以TBIL為例測試五個值，以理論值為X軸，以測試值為Y軸，統計分析得VITROS 350機器，r2=0.9994斜率為0.9885;OLIMPUS AU640機器，r2=0.9956斜率為1.0101;評價標準為相關系數r2＞0.95，斜率在0.97-1.03范圍內。兩臺機器r2和斜率都在要求內。

2.2 方法學對比用兩臺機器相同條件下分別檢測180例(治療前90例和治療后90例)標本。用OLIMPUS AU640檢測的是總膽紅素(TBIL)、間接膽紅素(IBIL)、直接膽紅素(DBIL);用VITROS 350檢測的時總膽紅素、BU、BC;BU對應間接膽紅素，BC對應直接膽紅素。選取40個標本，10個高值、20個中間值、10個低值，以VITROS 350檢測的值為X軸，以OLIMPUS AU640檢測的值為Y軸進行方法學對比分析得到:總膽紅素為r2=0.9854＞0.95、偏移值小于CLIA'88允許誤差的1/2;間接膽紅素和BU之間r2=0.8543＜0.95、偏移值大于CLIA'88允許誤差的1/2，同一標本兩者有差異;直接膽紅素和BC之間r2=0.7532＜0.95、偏移值大于CLIA'88允許誤差的1/2，同一標本兩者差異較大。

2.3 阻塞性黃疸患者治療后TBIL、IBIL、DBIL都比治療前下降，BU、BC也下降，但100%BC比DBIL下降更加顯著。溶血性黃疸患者治療后TBIL、IBIL、DBIL比治療前下降，但90%BU、70%BC下降都比IBIL、DBIL下降更加明顯;肝病性黃疸患者治療后TBIL、IBIL、DBIL比治療前下降，但52%BU、60%BC下降也略比IBIL、DBIL下降明顯。

3 討論

在OLIMPUS AU640檢測膽紅素時用的時重氮法，檢測的總膽紅素中包含的組分有結合膽紅素，未結合膽紅素和δ-膽紅素，在檢測時，重氮試劑直接與結合膽紅素和δ-膽紅素反應，但不能直接測定未結合膽紅素(Bu)濃度[1]。對于這些重氮化學法，一旦知道總膽紅素和直接膽紅素的測定值，便可計算出未結合膽紅素(Bu)值(間接膽紅素=總膽紅素-直接膽紅素)。此方法雖然是一種可行的替代測定方法，但必須認識到確定兩種被測組分時的偏差和誤差，可能導致計算出的間接膽紅素出現較大的誤差[2]。

使用VITROS350干化學分析儀，可直接測定總膽紅素(TBIL)、間接膽紅素(Bu)和直接膽紅素(Bc)濃度。并且在測定BC時僅僅只是結合膽紅素，不測定δ-膽紅素(OLIMPUS AU640檢測直接膽紅素時包括結合膽紅素和δ-膽紅素)。由于在VITROS化學分析儀上直接測定未結合膽紅素(Bu)，從而在使用VITROS結合未結合膽紅素(BuBc)干片確定未結合膽紅素(Bu)濃度時可以使分析誤差更低。所以在用干化學檢測的BU比濕化學檢測的IBIL在病理性黃疸時更加準確。

δ-膽紅素(δ-BIL)，它是一種白蛋白和膽紅素間非酶促反應形成的共價結合物。δ膽紅素的反應性與結合膽紅素相似，在血中含量極低。一旦進入血液循環，它會慢慢地與白蛋白結合而成為δ膽紅素[3]。δ膽紅素在血清中的存在時間與白蛋白的半衰期相關，為2～3周。在BC的檢測中，由于BC在正常人體內從肝臟到腸道，隨腸道排出體外，所以正常人體內幾乎沒有BC，而在阻塞性黃疸的時候由于腸道阻塞，導致大量BC回流入血，引起BC升高，直接膽紅素(DBIL)也升高。但是經過治療阻塞疏通之后，BC隨腸道排出，立刻就下降，對于疾病療效的反映比DBIL靈敏。溶血性黃疸時由于體內未結合膽紅素的大量增加，導致結合膽紅素和δ-膽紅素輕度升高，而肝病性黃疸時，由于肝細胞病變引起的未結合和結合膽紅素及δ-膽紅素都增加，治療后由于干化學和濕化學測試項目實際物質的不同，就導致干化學評價的更好。

以上結果及分析表明，在實際工作中，對于病理性黃疸的檢測，采用干化學的BU，BC檢測來評價病情要比采用濕生化的IBIL、DBIL檢測來評價要更加準確，靈敏。

[1]周新，涂植光.臨床生物化學和生物化學檢驗.第3版.北京:人民衛生出版社，2003.

[2]姚勇.強生干化學分析儀定標的使用經驗.中外健康文摘·醫藥月刊，2007，8.

[3]楊志娜，田衛東，李安均，等.Olmpus AU640全自動生化分析的維護與保養.中國療養醫學，2010，19(3):264-265.