慢性酒精中毒患者血清脂聯素、葉酸、維生素B12含量測定及其臨床意義

宋 巖， 崔松彪， 吳 光

脂聯素(APN)是一種由脂肪細胞特異性分泌的血漿激素蛋白，具有多種生物學功能。在調節內皮功能、免疫功能、糖脂代謝、抗胰島素抵抗、抗動脈粥樣硬化及在腦血管疾病等方面發揮著重要作用。隨著慢性酒精中毒的發病率的持續上升，維生素缺乏、營養障礙與慢性酒精中毒的關系越來越受到人們的重視。了解慢性酒精中毒患者的營養狀態及對中樞神經系統的影響也越來越受到醫學界的重視。由于慢性酒精中毒的人長期大量飲酒，進食量減少，并且很大一部分人經常空腹飲酒，這就導致了營養不良、造成了葉酸和維生素B12的攝入不足，再加上慢性酒精中毒造成胃腸道的病變及功能紊亂，可引起葉酸和維生素B12的吸收障礙。本研究探討慢性酒精中毒患者血清脂聯素(APN)、葉酸(FA)、維生素B12水平的變化及其與甘油三酯、膽固醇、HDL-C、LDL-C、空腹血糖、谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶等指標的相關性，進一步探討慢性酒精中毒與腦血管疾病及其高危因素的關系，為臨床預防和治療慢性酒精中毒患者、觀察其預后均有重要的臨床價值。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 (1)慢性酒精中毒患者均符合中國精神障礙分類與診斷標準CCMD-3修訂的酒精所致精神障礙的診斷標準［1］。(2)選擇2009年6月～12月期間在延邊醫院及延邊腦科醫院住院的酒精中毒患者及參加體檢的健康體檢者。依研究目的分為慢性酒精中毒組和對照組。其中患者組共54例，均為男性，年齡37～68歲，平均48.6±6.73歲，飲酒年限為5～42年，平均為48.42±6.39歲。對照組共43例，不飲酒或偶爾飲酒的男性，均為同期健康體檢者，年齡24～59歲，平均34.12±10.11歲。按飲酒年限分為飲酒＜10年組、飲酒10～20年組、飲酒20～30年組、飲酒＞30年組;按CT是否合并腦萎縮及腦血管疾病分為慢性酒精中毒CT異常組與慢性酒精中毒CT正常組。頭部CT診斷符合1995年全國腦血管病學會制定的腦血管病診斷標準［2］。

1.2 標本采集及保存 所有患者均在確診后未治療前和對照組在體檢后清晨空腹狀態下采取靜脈血5ml，標本采集后不抗凝，以3000r/min進行離心10min，分離血清，一管置于-80℃低溫冰箱中保存待測脂聯素、葉酸及維生素B12。另一管作為血清脂類檢測及血糖檢測。

1.3 APN測定 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人脂聯素(APN)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脂聯素(APN)，再與HRP標記的脂聯素抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂聯素(APN)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中人脂聯素(APN)濃度。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0軟件包建立數據庫并進行統計分析。

2 結果

2.1 酒中毒組與對照組血清各項臨床指標比較 本試驗中慢性酒精中毒組血清APN較對照組明顯降低，比較有顯著性差異(P＜0.05);慢性酒精中毒組與對照組相比，慢性酒精中毒組的FA明顯低于對照組，有顯著性差異(P＜0.01);慢性酒精中毒組與對照組相比，慢性酒精中毒組的維生素B12高于對照組，有顯著性差異(P＜0.05);慢性酒精中毒組與對照組相比，慢性酒精中毒組的空腹血糖明顯高于對照組，有顯著性差異(P＜0.01);慢性酒精中毒組SBP、DBP較對照組均明顯增高，比較有顯著性差異(P＜0.01)。慢性酒精中毒組的 TC、TG、HDL-c、LDL-c均高于對照組，有顯著性差異(P＜0.01)。慢性酒精中毒組AST、ALT較對照組均明顯增高，比較有顯著性差異(P＜0.01)(見表1)。

表1 慢性酒精中毒組與對照組血清各項臨床指標比較()

表1 慢性酒精中毒組與對照組血清各項臨床指標比較()

與對照組比較* P ＜0.05，＊＊P ＜0.001

觀察指標 慢性酒精中毒組 正常對照組 F值 P值APN(mg/L)FA(ng/ml)VitB12(pg/ml)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-c(mmol/L)LDL-c(mmol/L)FBG(mmol/L)AST(U/L)ALT(U/L)SBP(mmHg)DBP(mmHg)1.54 ±0.57*3.63 ±1.97＊＊497.57 ±289.57*4.47 ±1.38*1.73 ±1.29＊＊1.62 ±0.70＊＊2.29 ±0.85*6.00 ±1.45＊＊106.03 ±40.63＊＊64.19 ±8.04＊＊136.76 ±20.56 ＊＊84.91 ±12.27*2.05 ±1.10 7.33 ±2.40 403.40 ±116.17 3.98 ±0.81 0.95 ±0.44 0.77 ±0.29 2.00 ±0.43 4.34 ±0.37 29.90 ±6.90 25.67 ±8.52 117.67 ±13.38 80.12 ±11.21 8.936 69.612 4.025 4.383 14.569 55.949 4.064 54.319 13.218 13.577 27.680 3.940 0.004 0.000 0.048 0.039 0.000 0.000 0.047 0.000 0.000 0.000 0.000 0.050

2.2 慢性酒精中毒組與對照組之間相關疾病的患病水平 慢性酒精中毒組的空腹血糖與對照組相比較明顯增高，比較具有顯著性差異(P＜0.001)，說明慢性酒精中毒組增加了患糖尿病的風險。慢性酒精中毒組血TC、血TG癥與對照組相比明顯增高，有顯著性差異(P＜0.01)，說明慢性酒精中毒組患者增加血脂異常的風險;慢性酒精中毒組血壓與對照組相比明顯增高，有顯著性差異(P＜0.01)，說明慢性酒精中毒組患者增加了患高血壓的風險。而高血壓、糖尿病、血脂異常又與動脈粥樣硬化密切相關，并且它們均為腦卒中的高危因素。故慢性酒精中毒組患者增加了高血壓、糖尿病、血脂異常、動脈粥樣硬化、腦卒中等疾病的患病率。

2.3 慢性酒精中毒各飲酒年限組 APN、FA、VitB12比較 對54例慢性酒精中毒患者按飲酒年限分為4組及對照組，觀察飲酒年限與APN、FA、VitB12的關系。結果發現，隨著飲酒年限的增加，FA隨之逐年降低(P＜0.05)，比較有統計學意義。但隨著飲酒年限的增加，未發現血清APN降低有規律性(P＜0.05)。隨著飲酒年限的增加，未發現血清VitB12有規律性，比較無顯著性差異(P＞0.05)。飲酒＜10年組、飲酒 l0～20年組、飲酒20～30年組、飲酒＞30年組與對照組5組間APN、FA比較均有統計學差異(P ＜0.05，P ＜0.01)(見表2)。

2.4 酒中毒CT異常組、酒中毒CT正常組、對照組的APN、FA、VitB12比較 酒中毒CT異常組、酒中毒CT正常組與對照組3組間血清APN比較都有顯著差異(P＜0.05)，酒中毒CT異常組與對照組、酒中毒CT正常組與對照組血清APN比較都有顯著差異(P＜0.05)。酒中毒CT異常組、酒中毒CT正常組與對照組3組間維生素B12比較無顯著差異(P＞0.05)。酒中毒CT異常組、酒中毒CT正常組與對照組FA比較都有顯著差異(P＜0.05)，酒中毒CT異常組與對照組、酒中毒CT正常組與對照組FA比較都有顯著差異(P＜0.01)(見表3)。

表2 酒中毒各飲酒年限組APN、FA、VitB12含量比較()

表2 酒中毒各飲酒年限組APN、FA、VitB12含量比較()

與對照組比較*P ＜ 0.05，＊＊P ＜0.001

組別 例數APN FA VitB12 43 8 27 17 2 403.40 ±116.17 473.88 ±166.91 481.04 ±317.25 531.35 ±312.44 528.50 ±193.04 0.345對照組飲酒＜10年組飲酒10～20年組飲酒20～30年組飲酒＞30年組P值2.05 ±1.10 1.24 ±0.21*1.67 ±0.58*1.42 ±0.62*1.81 ±0.01*0.032 7.33 ±2.40 4.17 ±2.35＊＊3.65 ±2.00＊＊3.46 ±1.89＊＊2.56 ±0.95＊＊0.000

表3 酒中毒組CT異常組、CT正常組APN、FA、VitB12含量比較()

表3 酒中毒組CT異常組、CT正常組APN、FA、VitB12含量比較()

與對照組比較*P ＜0.05，＊＊P ＜0.001

組別 例數 APN(mg/L) FA(ng/ml) VitB12(pg/ml)酒精中毒CT異常組酒精中毒CT正常組對照組P值28 26 43 1.59 ±0.56*1.48 ±0.58*2.05 ±1.10 0.013 3.09 ±1.46＊＊4.2 ±2.29＊＊7.33 ±2.40 0.000 502.89 ±311.86 491.85 ±269.57 403.395 ±116.17 0.140

3 討論

血清APN是由脂肪細胞特異性合成和分泌的一種重要的細胞因子，在血漿中含量豐富。脂聯素與其受體結合，具有調節血管內皮功能、調節人體能量代謝、抗炎、抗胰島素抵抗(IR)及抗動脈粥樣硬化(AS)等多種作用［3］。大量臨床研究結果表明慢性酒精中毒患者的血清APN水平明顯降低，與本實驗結果一致。慢性酒精中毒患者低脂聯素血癥狀態下易引起2型糖尿病(T2DM)。T2DM重要機制之一是胰島素抵抗(IR)，表達也減少，長期飲酒可以使胰島素與其受體結合受損，從而導致胰島素抵抗。研究表明，低脂聯素血癥與胰島素抵抗(IR)密切相關［4］，幾項大型前瞻性研究也表明脂聯素參與體內糖代謝以及糖尿病的發生、發展，并且血漿APN的濃度與 FBG、IR 和高胰島素血癥呈顯著負相關［5，6］。長期飲酒會導致胰島素及其受體結合能力下降，引起IR。一方面乙醇在氧化過程中使輔酶I(NAD)被還原形成還原型輔酶I(NADH)，抑制三羧酸循環，影響脂肪酸代謝，引起脂肪酸代謝產物增加，三酰甘油含量升高會抑制磷脂酰肌醇-3-激酶和葡萄糖轉運蛋白4(GluT4)的活性而減少葡萄糖的吸收，阻斷了胰島素信號的轉導。從而導致IR。另一方面，乙醇抑制脂肪酸氧化，使游離脂肪酸(FFA)增加，而FFA的增加是引起IR的重要機制之一。

長期飲酒會導致糖、脂代謝紊亂，誘發炎性機制，加速動脈粥樣硬化的進展。動脈粥樣硬化(AS)是一種慢性炎性疾病，AS中內皮細胞、巨噬細胞和平滑肌細胞構成AS病灶的三要素。三者相互作用，促進AS的發生發展。脂聯素具有抗動脈硬化形成的作用，其作用機制可能與脂聯素具有拮抗慢性炎癥過程有關。脂聯素被認為是有抗動脈粥樣硬化作用的唯一的一種保護性細胞因子［7］，在動脈粥樣硬化病變中起重要的調控作用。脂聯素APN通過多種途徑影響內皮細胞、巨噬細胞和血管平滑肌細胞的生物活性，由此可見脂聯素可以阻止AS的發生、發展，脂聯素水平與動脈粥樣硬化疾病的密切相關，脂聯素能明顯抑制與動脈內膜增生有關的過程，在動脈硬化早期給予脂聯素進行干預，延緩動脈硬化的發生，在未來的臨床試驗研究中有重要意義。

慢性酒精中毒時，由于酒精能夠提供熱量，使患者進食量減少，甚至一部分人經常空腹飲酒，這就導致了營養不良、維生素B12、FA攝入量不足;并且長期飲酒導致胃腸道的病變及功能紊亂，可引起葉酸和維生素B12的吸收障礙。此外，酒精可以阻止維生素B12與胃體壁細胞分泌的內因子結合，阻礙了維生素B12的吸收。酒精損害使肝臟對葉酸的儲存轉化為四氫葉酸的能力下降［8］。葉酸和維生素B12是人體不可缺少的維生素，在神經系統疾病的發生、形成中起著重要作用，而慢性酒精中毒的患者往往伴有葉酸和維生素B12的異常，從而引發多種神經系統疾病。本文結果顯示慢性酒精中毒患者FA水平顯著低于對照組，并且隨著飲酒年限的增加，葉酸FA降低，具有統計學意義。本實驗慢性酒精中毒患者維生素B12水平明顯高于對照組，并且隨著飲酒年限的增加，無明顯規律性。目前認為血清葉酸水平低，血漿同型半胱氨酸水平高等因素，與原發性高血壓、糖尿病、血脂異常等共同作用，可能是導致我國腦卒中發生率和死亡率居高不下的重要原因。通過合理補充葉酸和維生素B12，能有效地降低血液中Hcy水平，并對于降低腦血管疾病的發生具有重要的臨床價值。

有研究表明［9，10］，酗酒人群中有38%血清FA水平降低、18%伴紅細胞FA水平下降，長期酗酒也可導致維生素B12吸收障礙。葉酸缺乏時，中樞神經系統內蛋白質合成受到抑制，致使神經元的能量缺乏及遞質合成障礙，可出現彌漫性神經系統損害，包括大腦損害、小腦損害、脊髓損害和周圍神經損害，多項研究表明補充葉酸能顯著降低腦卒中風險。葉酸缺乏可引起高Hcy血癥，目前認為高Hcy血癥與腦卒中的發生密切相關，是心腦血管疾病發病的危險指標［11］，增加葉酸和維生素B12的攝入能降低同型半胱氨酸(Hcy)水平［12］。葉酸可改善血管內皮功能、預防心、腦血管疾病。葉酸缺乏引起巨幼紅細胞貧血、白細胞和血小板減少，引起血液成分和血液流變學的改變。葉酸具有抗氧化應激作用，大量證據證明氧化應激在血管病的發病機制中起著重要作用。

綜上所述，在慢性酒精中毒的發生、發展過程中，脂聯素起保護性作用，它可以促進脂肪酸氧化，抑制脂肪酸合成，減少脂質沉積，增加胰島素敏感性，還具有抗炎、抗動脈粥樣硬化的作用，減少腦卒中的發生等多種生物學作用。進一步研究脂聯素慢性酒精中毒中的作用機制，將有助于開發新藥物。制定新的治療方案，促進慢性酒精中毒治療手段的發展，因此具有廣泛的臨床意義及應用前景。盡管本研究采用了有效的前瞻性隊列研究設計，但仍有若干不足之處。在該群體中慢性酒精中毒組樣本例數相對較少(n=54)，使研究結果的可靠性降低。而且，如同所有以容易發生致命事件的高危患者為對象的研究一樣，本文也不包括已經死亡的病例。因此，這種對患者的選擇可以解釋一些危險因素在脂聯素高、低水平組間的不平衡分布，可能會對結果產生影響。

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