GC法測定紫金透骨噴霧劑中龍腦的含量及穩定性Δ

鄭林，王愛民，黃勇，遲明艷，蘭燕宇，王永林(貴陽醫學院藥學院，貴陽市550004)

紫金透骨噴霧劑是根據貴州省苗族驗方開發的中藥新藥，是由紫金蓮、透骨香和冰片等6味中藥采用現代制劑提取技術富集有效成分精制而成的外用噴霧劑，具有活血散瘀、消腫止痛、舒筋通絡之功效，用于急性閉合性軟組織損傷的治療。中醫認為本品所含的冰片辛香走竄，其清香為百藥之先，為大通之品，故可用于治療多種疼痛病證[1]。現代醫學研究表明[2，3]，冰片具有止痛、抗炎、抗菌的功效，冰片中龍腦是一種有效的透皮促進劑，對多種皮膚外用藥都有促透作用。龍腦為冰片中主要有效成分，因此筆者選擇龍腦為考察指標，采用氣相色譜(GC)法對紫金透骨噴霧劑進行質量評價及穩定性研究[4，5]，證明該法可用于該制劑的質量控制，且制劑中龍腦穩定性良好。

1 儀器與試藥

GC-14B型GC儀、氫火焰離子化檢測器(日本島津公司)；WML色譜工作站(廣西威瑪龍色譜科技公司)；高純氮氣、氫氣(貴陽新維氣體有限公司，純度均為99.99%)；龍腦對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:881-200001)；正辛醇、乙醇為分析純；紫金透骨噴霧劑(貴陽醫學院貴州省中藥民族藥研究開發中心提供，批號:20080313、20080318、20080320)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:AT-WAX石英毛細管(0.53 mm×30 m×1.0μm)；載氣:氮氣；柱前壓:25 kPa；柱溫:170℃；進樣口溫度:200℃；檢測器:氫火焰離子化檢測器(FID)；檢測器溫度:250℃；氫氣流量:40 mL·min-1；空氣流量:400 mL·min-1；分流比:10∶1；進樣量:0.5 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內標溶液精密吸取正辛醇2 mL，置100 mL量瓶中，加乙醇至刻度，即得。

2.2.2 對照品溶液精密稱取龍腦對照品33.92 mg，置于25 mL量瓶中，加內標溶液溶解并稀釋至刻度，即得。

2.2.3 供試品溶液精密吸取紫金透骨噴霧劑1 mL，置25 mL量瓶中，精密加內標溶液1 mL，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 陰性對照溶液按紫金透骨噴霧劑制備工藝制得缺冰片的陰性樣品。精密吸取陰性樣品1 mL，置25 mL量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗

分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各0.5 μL注入GC儀，在上述色譜條件下測定，得色譜圖(見圖1)。結果顯示，對照品與供試品中龍腦的保留時間基本一致，龍腦峰與內標峰及其他組分峰分離良好；陰性對照溶液在龍腦色譜峰位置處無相應的峰出現，表明陰性對照無干擾。

2.4 線性關系考察

精密吸取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mL，置5 mL量瓶中，分別精密加內標溶液0.2 mL，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取上述系列對照品溶液0.5μL注入GC儀中，測定峰面積。以龍腦與內標峰面積的比值(Y)為縱坐標，對照品濃度(X)為橫坐標，制備標準曲線，得回歸方程為Y＝2.981X－6.584×10-3(r＝0.9999，n＝5)。結果表明，龍腦的檢測濃度在0.1209～0.7253 mg·mL-1范圍內與其同內標的峰面積比值呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

2.5.1 重復性試驗精密吸取樣品(批號:20080313)9份，分別按0.5、1.0、1.5 mL取樣，每個樣3份，照“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，分別測定龍腦的含量。結果，RSD＝2.21%(n＝9)，表明方法的重復性良好。

2.5.2 中間精密度試驗以不同的實驗人員在不同時間照“2.2.3”項下方法分別制備3份供試品溶液，按上述方法測定。第1次測定結果的RSD＝2.26%(n＝3)；第2次測定結果的RSD＝2.22%(n＝3)，表明方法的中間精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取同一供試品溶液，照上述色譜條件分別于0、1、2、4、8 h進樣，測定龍腦與內標的峰面積比值。結果，RSD＝1.54%(n＝5)，表明供試品溶液在8 h內穩定性良好。

2.7 耐用性試驗

取樣品適量，按“2.2.3”項下方法平行制備3份供試品溶液，用同一支色譜柱，以不同色譜柱溫度(165、170、175℃)進樣測定。結果，RSD(n＝3)分別為1.94%(165℃)、2.26%(170℃)、1.98%(175℃)；另取3份供試品溶液，除柱前壓變化外(20、25、30 kPa)，其余色譜條件不變進樣測定。結果，RSD(n＝3)分別為2.63%(20 kPa)、2.29%(25 kPa)、1.67%(30 kPa)，表明方法的耐用性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密吸取已測定龍腦含量(11.39 mg·mL-1)的樣品，分別按所取樣品量中龍腦質量分數的50%、100%和150%精密加入龍腦對照品，照“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，分別進樣，按上述色譜條件測定含量，計算加樣回收率，結果見表1。

2.9 樣品含量測定

取3批樣品，分別按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，每份重復進樣3次，并計算平均含量。結果，3批樣品(批號:20080313、20080318、20080320)中龍腦的平均含量(n＝3)分別為11.24、10.94、10.93 mg·mL-1，平均值為11.04 mg·mL-1。

2.10 制劑中龍腦穩定性考察

表1 加樣回收率試驗結果(n＝9)Tab 1Results of recovery tests(n＝9)

為考察制劑中龍腦的穩定性，取模擬上市包裝中試樣品3批(20080313、20080318、20080320)進行加速試驗和長期試驗考察。

2.10.1 加速試驗取模擬上市包裝中試樣品適量，置(40±2)℃、RH(20±5)%條件下貯藏，于0、1、2、3、6個月取樣，照上述含量測定方法檢測。結果，3批樣品中龍腦的含量分別為11.24、10.95、10.67、10.97、10.85 mg·mL-(1批號:20080313)，10.94、10.66、10.40、10.83、10.22 mg·mL-(1批號:20080318)，10.93、10.35、10.16、10.35、10.11 mg·mL-(1批號:20080320)，表明經加速試驗6個月考察，制劑中龍腦含量無明顯變化，符合質量標準要求。

2.10.2 長期試驗取模擬上市包裝中試樣品適量，置室溫條件下貯藏，于0、3、6、12、18個月取樣，照上述含量測定方法檢測。結果，3批樣品中龍腦的含量分別為11.24、10.67、10.24、10.28、9.66 mg·mL-(1批號:20080313)，10.94、10.97、10.36、10.56、9.90 mg·mL-(1批號:20080318)，10.93、11.05、10.64、10.15、9.93 mg·mL-(1批號:20080320)，表明經室溫留樣長期試驗18個月考察，制劑中龍腦含量無明顯變化，符合質量標準要求。

3 討論

2005年版《中國藥典》(一部)冰片中龍腦測定采用水楊酸甲酯作內標物，但由于紫金透骨噴霧劑處方中含有透骨香藥材，而透骨香中含有水楊酸甲酯，會對試驗結果產生干擾。經試驗，選用正辛醇為內標物，樣品不干擾內標物。

本試驗含量測定方法的驗證主要參照2005年版《中國藥典》(一部)附錄“中藥質量標準分析方法驗證技術指導原則”進行，較原來《中藥新藥質量標準研究的技術要求》中含量測定方法的驗證更為合理和嚴謹。

在紫金透骨噴霧劑穩定性考察中，除龍腦的含量測定外，還分別考察了性狀、鑒別、乙醇量、噴射試驗和微生物限度，均符合質量標準要求，說明本品在18個月內質量穩定，直接接觸藥品的容器對藥品質量無影響。

[1]雷載權，張廷模主編.中華臨床中藥學[M].第1版.北京:人民衛生出版社，1998:1558.

[2]王本祥主編.現代中藥藥理學[M].第1版.天津:天津科學技術出版社，1997:1141.

[3]朱健平，王宗銳，吳宋夏.龍腦促進藥物經皮滲透作用的研究[J].中國藥學雜志，1999，34(2):104.

[4]張開蓮，葉云，王俊，等.毛細管氣相色譜法測定雪抑樂中龍腦的含量[J].中國藥房，2007，18(30):2355.

[5]毛葉萌，張奇志，沈燁虹，等.阿普唑侖口腔崩解片的穩定性研究[J].中國藥房，2008，19(28):2213.