HPLC 法測定頭孢地尼分散片中頭孢地尼的含量

俞 平（江蘇溧水縣人民醫(yī)院藥庫，溧水縣 211200）

頭孢地尼（Cefdinir）是優(yōu)秀的第3代口服頭孢菌素品種之一，對β-內(nèi)酰胺酶高度穩(wěn)定，抗菌譜廣、抗菌活性高、毒性低、副作用小[1，2]。國內(nèi)對于頭孢地尼原料、膠囊的含量測定有紫外分光光度法和高效液相色譜（HPLC）法[3]，但未見對頭孢地尼分散片中主藥含量測定方法的報道和研究。筆者以頭孢地尼為指標(biāo)成分，建立了頭孢地尼分散片中頭孢地尼的HPLC測定方法，旨在為該制劑的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型HPLC儀（美國安捷倫公司）；AUW-220D電子天平；5210DT超聲處理器（250 W，33 kHz）；pH計（MettlerToledo，Seven Multi）。

頭孢地尼對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：130502-201001）；頭孢地尼分散片（天津中央藥業(yè)有限公司，批號：100728、100802、100806）；乙腈、甲醇為色譜純（美國天地公司），水為重蒸水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomexex Luna-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：0.25%四甲基氫氧化銨溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至5.5）-乙腈-甲醇（900∶60∶40）（每1 000 mL加入0.1 mol·L－1乙二胺四醋酸二鈉溶液0.4 mL）；流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：254 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：40℃。頭孢地尼與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)≥1.2，頭孢地尼峰的拖尾因子應(yīng)≤1.5，理論板數(shù)按頭孢地尼峰計算應(yīng)≥2 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液的制備 精密稱取頭孢地尼對照品40 mg，置于100 mL容量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（pH 7.0）溶解后用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密吸取對照品貯備液5 mL，置于10 mL容量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（pH 7.0）溶解后用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取頭孢地尼分散片2片，置于研缽中研細(xì)，精密稱取適量（約含頭孢地尼20 mg），置于100 mL容量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（pH 7.0）溶解后用流動相稀釋至刻度，0.45 μm的微孔濾膜濾過，即得。

2.2.4 空白溶液的制備 取處方量輔料，精密稱定，置于100 mL容量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（pH 7.0）溶解后用流動相稀釋至刻度，0.45 μm的微孔濾膜濾過，即得。

2.3 方法專屬性

取空白溶液20 μL，注入HPLC儀，記錄色譜。另取頭孢地尼對照品溶液20 μL，注入HPLC儀，記錄色譜。結(jié)果，空白溶液在與頭孢地尼對照品溶液主峰相同的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明輔料對樣品的測定無干擾。色譜見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取頭孢地尼對照品貯備液適量，定量稀釋成40、80、120、160、200、240 μg·mL－1的溶液，分別進(jìn)樣20 μL。以頭孢地尼檢測濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（A）為縱坐標(biāo)，得回歸方程：A＝27 221.4C+30 496.4（r＝0.999 9）。表明頭孢地尼檢測濃度在40～240 μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.5 精密度試驗

精密吸取濃度為200 μg·mL－1的頭孢地尼對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果，峰面積的RSD＝0.10%，說明精密度良好，符合要求。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果，RSD＝0.42%（n＝7），說明供試品溶液在12 h內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗

按照處方比例，取高（120%）、中（100%）、低（80%）不同量的頭孢地尼對照品，分別加入處方量的輔料，過120目篩混合均勻。精密稱取該粉末適量（約相當(dāng)于頭孢地尼16、20、24 mg，按“2.2.3”項下方法制備處理后（每個濃度3份樣品），進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖。另取對照品溶液，同法測定，按外標(biāo)法計算3種含量樣品中頭孢地尼的回收率，平均加樣回收率分別為：99.76%、100.11%、99.92%，RSD＝0.26%（n＝9），詳見表1。

2.8 重復(fù)性試驗

取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖；另取對照品溶液，同法測定。按外標(biāo)法計算樣品的含量，測得的含量平均值為：99.89%，RSD＝0.56%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.9 樣品含量測定

3批樣品按“2.2.3”項下方法制備處理后，測定含量。結(jié)果，含量分別為99.90%、99.81%、100.03%。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab 1Results of recovery tests（n＝9）

3 討論

頭孢地尼在水、乙醇、乙醚中均不溶解，只在pH 7.0的磷酸鹽緩沖液中微溶，故選擇pH 7.0的磷酸鹽緩沖液作為溶劑。筆者在試驗過程中對流動相進(jìn)行了篩選，采用了不同的流動相[4，5]，試驗結(jié)果表明，以0.25%四甲基氫氧化銨溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至5.5）-乙腈-甲醇（900∶60∶40），每1 000 mL加入0.1 mol·L－1乙二胺四醋酸二鈉溶液0.4 mL為流動相，效果最佳。

綜上所述，本方法操作簡便，具有較強的專屬性，且回收率好，可以為頭孢地尼分散片的含量測定提供有效的質(zhì)量控制依據(jù)。

[1] 周永健，邊 穎，蔡 毅.第3代口服頭孢菌素-頭孢地尼[J].天津藥學(xué)，2003，15（2）：66.

[2] 林 燕.頭孢地尼的國內(nèi)外臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國藥房，2010，21（4）：382.

[3] 張新萍，趙利萍，雷光明.頭孢地尼分散片的人體生物等效性研究[J].中國藥房，2007，18（32）：2 514.

[4] 錢 妍，趙春景，喻婭婷.HPLC測定頭孢地尼膠囊的含量[J].華西藥學(xué)雜志，2005，20（3）：253.

[5] 王杏林.HPLC測定頭孢地尼的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].中國新藥雜志，2003，12（2）：114.